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- Xybio
- 上海
- P0790
- 2026年01月16日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
XM_005268872.4
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：pCDNA3-HA-p53人源基因质粒
别称: NM_001308090.1;HD7;HD7A;HDAC7A
启动子：CMV
复制子: pUC
质粒分类：基因文库载体；哺乳细胞人源基因表达质粒
原核抗性: Amp
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：
荧光蛋白：
质粒简介：详询
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P0779/pwtCas9-bacteria大肠敲除质粒 |
| P0325/pET22b-SaCas9大肠敲除质粒 |
| P0435/pdCas9-bacteria大肠敲除质粒 |
| P2273/pMJ826大肠基因编辑质粒 |
| P2274/pWJ68大肠基因编辑质粒 |
| P1104/p2CT-His-MBP-Lbu_C2c2_WT大肠敲除质粒 |
| P3014/p2CT-His-MBP-Lbu_C2c2_R1079A_K1080A大肠编辑质粒 |
| P1869/pCAS9-CR4大肠敲除质粒 |
| P1119/p2CT-His-MBP-Lbu_C2c2_R472A_H477A_R1048A_H1053A大肠敲除质粒 |
| P2838/pREDCas9大肠敲除质粒 |
| P3064/pET-28b-Cas9-His大肠编辑质粒 |
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文献和实验，表达载体pCDNA3，pCDNA3.1(+),pCDNA3.1(-),表达载体pcmv-ha以及表达载体 pCMV-Myc的图谱 http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/2019694_0.html pMD18-载体图谱：http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/2993026_0.html pGEX-KG载体图谱序列：http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post
"把基因表达量调高"听起来是个简单需求，但用 CRISPRa 和用 cDNA 过表达质粒，得到的细胞模型和结论都可能完全不同。选错的话，表型实验从一开始就偏了。 先说结论：过表达质粒是在细胞质里额外生产一份蛋白，表达量远高于生理水平、不考虑 isoform 和调控背景、也无法保证定位正确；CRISPRa 是在内源基因组位点上激活转录，产物是天然的剪接 isoform、受内源调控元件约束、表达量更接近生理范围。想问"这个基因多了会怎样"用过表达，想问"把这个基因的内源表达调高
目的基因的细胞株。 插入外源基因的克隆位点包括Sal1、BamH1和EcoR1位点。注意在此载体 中有二个EcoR1位点存在。 2. pEGFP, 增强型绦色荧光蛋白表达载体 (Enhanced Fluorecent Protein Vector) 特点: pEGFP表达载体中含有绿色荧光蛋白，在PCMV启动子驱动下，在真核细胞中高水平表达。载体骨架中的SV40 origin使该载体在任何表达SV40 T 抗原的真核细胞内进行复制。Neo抗性盒由SV40早期
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