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- Xybio
- 上海
- P0016
- 2025年07月11日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pET21b
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pET-21b大肠表达质粒
别称: pET21b
质粒属性
质粒简介
pET-21b质粒是一种原核表达载体， N端含有一个T7标签,C端含有一个6×His标签。表达由宿主细胞提供的T7 RNA聚合酶诱导，目的基因被克隆到质粒载体上，受噬菌体强转录及翻译信号控制。
pET系统是有史以来在大肠杆菌中表达重组蛋白的功能最强大的系统，也是现今原核表达方面使用最广泛的系统。该系列质粒能很容易的通过降低诱导物的浓度来削弱蛋白表达。在非诱导条件下，可以使目的基因处于完全沉默状态而不转录。
The pET-21a-d(+) vectors carry an N-terminal T7•Tag® sequence plus an optional C-terminal His•Tag® sequence. These vectors differ from pET-24a-d(+) only by their selectable marker (ampicillin vs. kanamycin resistance). Unique sites are shown on the circle map. Note that the sequence is numbered by the pBR322 convention, so the T7 expression region is reversed on the circular map. The cloning/expression region of the coding strand transcribed by T7 RNA polymerase is shown below. The f1 origin is oriented so that infection with helper phage will produce virions containing single-stranded DNA that corresponds to the coding strand. Therefore, single-stranded sequencing should be performed using the T7 terminator primer.
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 5442 bp ds-DNA circular SYN 31-7-2015
DEFINITION synthetic circular DNA
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 5442)
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported 2015-7-31 MLCC
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..5442
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
source 246..268
/organism="Enterobacteria phage T7"
/mol_type="genomic DNA"
/db_xref="taxon:10760"
terminator 26..73
/note="T7 terminator"
/note="transcription terminator for bacteriophage T7 RNA
polymerase"
CDS complement(140..157)
/codon_start=1
/product="6xHis affinity tag"
/note="6xHis"
/translation="HHHHHH"
CDS complement(206..238)
/codon_start=1
/product="leader peptide from bacteriophage T7 gene 10"
/note="T7 tag (gene 10 leader)"
/note="promotes efficient translation in E. coli"
/translation="MASMTGGQQMG"
RBS 246..268
/note="efficient ribosome binding site from bacteriophage
T7 gene 10 (Olins and Rangwala, 1989)"
protein_bind 283..307
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
promoter complement(308..326)
/note="T7 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
promoter 635..712
/gene="lacI"
/note="lacI promoter"
CDS 713..1795
/codon_start=1
/gene="lacI"
/product="lac repressor"
/note="lacI"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
/translation="MKPVTLYDVAEYAGVSYQTVSRVVNQASHVSAKTREKVEAAMAEL
NYIPNRVAQQLAGKQSLLIGVATSSLALHAPSQIVAAIKSRADQLGASVVVSMVERSGV
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MSGFQQTMQMLNEGIVPTAMLVANDQMALGAMRAITESGLRVGADISVVGYDDTEDSSC
YIPPLTTIKQDFRLLGQTSVDRLLQLSQGQAVKGNQLLPVSLVKRKTTLAPNTQTASPR
ALADSLMQLARQVSRLESGQ"
CDS 2604..2795
/codon_start=1
/gene="rop"
/product="Rop protein, which maintains plasmids at low copy
number"
/note="rop"
/translation="MTKQEKTALNMARFIRSQTLTLLEKLNELDADEQADICESLHDHA
DELYRSCLARFGDDGENL"
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/note="bom"
/note="basis of mobility region from pBR322"
rep_origin complement(3225..3813)
/direction=LEFT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(3984..4844)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
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/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
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/direction=LEFT
/note="f1 ori"
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
ORIGIN
1 atccggatat agttcctcct ttcagcaaaa aacccctcaa gacccgttta gaggccccaa
61 ggggttatgc tagttattgc tcagcggtgg cagcagccaa ctcagcttcc tttcgggctt
121 tgttagcagc cggatctcag tggtggtggt ggtggtgctc gagtgcggcc gcaagcttgt
181 cgacggagct cgaattcgga tcccgaccca tttgctgtcc accagtcatg ctagccatat
241 gtatatctcc ttcttaaagt taaacaaaat tatttctaga ggggaattgt tatccgctca
301 caattcccct atagtgagtc gtattaattt cgcgggatcg agatctcgat cctctacgcc
361 ggacgcatcg tggccggcat caccggcgcc acaggtgcgg ttgctggcgc ctatatcgcc
421 gacatcaccg atggggaaga tcgggctcgc cacttcgggc tcatgagcgc ttgtttcggc
481 gtgggtatgg tggcaggccc cgtggccggg ggactgttgg gcgccatctc cttgcatgca
541 ccattccttg cggcggcggt gctcaacggc ctcaacctac tactgggctg cttcctaatg
601 caggagtcgc ataagggaga gcgtcgagat cccggacacc atcgaatggc gcaaaacctt
661 tcgcggtatg gcatgatagc gcccggaaga gagtcaattc agggtggtga atgtgaaacc
721 agtaacgtta tacgatgtcg cagagtatgc cggtgtctct tatcagaccg tttcccgcgt
781 ggtgaaccag gccagccacg tttctgcgaa aacgcgggaa aaagtggaag cggcgatggc
841 ggagctgaat tacattccca accgcgtggc acaacaactg gcgggcaaac agtcgttgct
901 gattggcgtt gccacctcca gtctggccct gcacgcgccg tcgcaaattg tcgcggcgat
961 taaatctcgc gccgatcaac tgggtgccag cgtggtggtg tcgatggtag aacgaagcgg
1021 cgtcgaagcc tgtaaagcgg cggtgcacaa tcttctcgcg caacgcgtca gtgggctgat
1081 cattaactat ccgctggatg accaggatgc cattgctgtg gaagctgcct gcactaatgt
1141 tccggcgtta tttcttgatg tctctgacca gacacccatc aacagtatta ttttctccca
1201 tgaagacggt acgcgactgg gcgtggagca tctggtcgca ttgggtcacc agcaaatcgc
1261 gctgttagcg ggcccattaa gttctgtctc ggcgcgtctg cgtctggctg gctggcataa
1321 atatctcact cgcaatcaaa ttcagccgat agcggaacgg gaaggcgact ggagtgccat
1381 gtccggtttt caacaaacca tgcaaatgct gaatgagggc atcgttccca ctgcgatgct
1441 ggttgccaac gatcagatgg cgctgggcgc aatgcgcgcc attaccgagt ccgggctgcg
1501 cgttggtgcg gatatctcgg tagtgggata cgacgatacc gaagacagct catgttatat
1561 cccgccgtta accaccatca aacaggattt tcgcctgctg gggcaaacca gcgtggaccg
1621 cttgctgcaa ctctctcagg gccaggcggt gaagggcaat cagctgttgc ccgtctcact
1681 ggtgaaaaga aaaaccaccc tggcgcccaa tacgcaaacc gcctctcccc gcgcgttggc
1741 cgattcatta atgcagctgg cacgacaggt ttcccgactg gaaagcgggc agtgagcgca
1801 acgcaattaa tgtaagttag ctcactcatt aggcaccggg atctcgaccg atgcccttga
1861 gagccttcaa cccagtcagc tccttccggt gggcgcgggg catgactatc gtcgccgcac
1921 ttatgactgt cttctttatc atgcaactcg taggacaggt gccggcagcg ctctgggtca
1981 ttttcggcga ggaccgcttt cgctggagcg cgacgatgat cggcctgtcg cttgcggtat
2041 tcggaatctt gcacgccctc gctcaagcct tcgtcactgg tcccgccacc aaacgtttcg
2101 gcgagaagca ggccattatc gccggcatgg cggccccacg ggtgcgcatg atcgtgctcc
2161 tgtcgttgag gacccggcta ggctggcggg gttgccttac tggttagcag aatgaatcac
2221 cgatacgcga gcgaacgtga agcgactgct gctgcaaaac gtctgcgacc tgagcaacaa
2281 catgaatggt cttcggtttc cgtgtttcgt aaagtctgga aacgcggaag tcagcgccct
2341 gcaccattat gttccggatc tgcatcgcag gatgctgctg gctaccctgt ggaacaccta
2401 catctgtatt aacgaagcgc tggcattgac cctgagtgat ttttctctgg tcccgccgca
2461 tccataccgc cagttgttta ccctcacaac gttccagtaa ccgggcatgt tcatcatcag
2521 taacccgtat cgtgagcatc ctctctcgtt tcatcggtat cattaccccc atgaacagaa
2581 atccccctta cacggaggca tcagtgacca aacaggaaaa aaccgccctt aacatggccc
2641 gctttatcag aagccagaca ttaacgcttc tggagaaact caacgagctg gacgcggatg
2701 aacaggcaga catctgtgaa tcgcttcacg accacgctga tgagctttac cgcagctgcc
2761 tcgcgcgttt cggtgatgac ggtgaaaacc tctgacacat gcagctcccg gagacggtca
2821 cagcttgtct gtaagcggat gccgggagca gacaagcccg tcagggcgcg tcagcgggtg
2881 ttggcgggtg tcggggcgca gccatgaccc agtcacgtag cgatagcgga gtgtatactg
2941 gcttaactat gcggcatcag agcagattgt actgagagtg caccatatat gcggtgtgaa
3001 ataccgcaca gatgcgtaag gagaaaatac cgcatcaggc gctcttccgc ttcctcgctc
3061 actgactcgc tgcgctcggt cgttcggctg cggcgagcgg tatcagctca ctcaaaggcg
3121 gtaatacggt tatccacaga atcaggggat aacgcaggaa agaacatgtg agcaaaaggc
3181 cagcaaaagg ccaggaaccg taaaaaggcc gcgttgctgg cgtttttcca taggctccgc
3241 ccccctgacg agcatcacaa aaatcgacgc tcaagtcaga ggtggcgaaa cccgacagga
3301 ctataaagat accaggcgtt tccccctgga agctccctcg tgcgctctcc tgttccgacc
3361 ctgccgctta ccggatacct gtccgccttt ctcccttcgg gaagcgtggc gctttctcat
3421 agctcacgct gtaggtatct cagttcggtg taggtcgttc gctccaagct gggctgtgtg
3481 cacgaacccc ccgttcagcc cgaccgctgc gccttatccg gtaactatcg tcttgagtcc
3541 aacccggtaa gacacgactt atcgccactg gcagcagcca ctggtaacag gattagcaga
3601 gcgaggtatg taggcggtgc tacagagttc ttgaagtggt ggcctaacta cggctacact
3661 agaaggacag tatttggtat ctgcgctctg ctgaagccag ttaccttcgg aaaaagagtt
3721 ggtagctctt gatccggcaa acaaaccacc gctggtagcg gtggtttttt tgtttgcaag
3781 cagcagatta cgcgcagaaa aaaaggatct caagaagatc ctttgatctt ttctacgggg
3841 tctgacgctc agtggaacga aaactcacgt taagggattt tggtcatgag attatcaaaa
3901 aggatcttca cctagatcct tttaaattaa aaatgaagtt ttaaatcaat ctaaagtata
3961 tatgagtaaa cttggtctga cagttaccaa tgcttaatca gtgaggcacc tatctcagcg
4021 atctgtctat ttcgttcatc catagttgcc tgactccccg tcgtgtagat aactacgata
4081 cgggagggct taccatctgg ccccagtgct gcaatgatac cgcgagaccc acgctcaccg
4141 gctccagatt tatcagcaat aaaccagcca gccggaaggg ccgagcgcag aagtggtcct
4201 gcaactttat ccgcctccat ccagtctatt aattgttgcc gggaagctag agtaagtagt
4261 tcgccagtta atagtttgcg caacgttgtt gccattgctg caggcatcgt ggtgtcacgc
4321 tcgtcgtttg gtatggcttc attcagctcc ggttcccaac gatcaaggcg agttacatga
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4501 atgccatccg taagatgctt ttctgtgact ggtgagtact caaccaagtc attctgagaa
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//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pET-21b大肠表达质粒
别称: pET21b
| 启动子: | T7 |
|---|---|
| 复制子: | pBR322 |
| 终止子: | T7 terminator |
| 质粒分类: | 大肠杆菌质粒；大肠表达质粒；pET系列质粒 |
| 质粒大小: | 5442bp |
| 质粒标签: | N-T7, C-His |
| 原核抗性: | Amp |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | BL21(DE3)等大肠杆菌 |
| 培养条件: | 37℃，有氧，LB |
| 诱导方式: | IPTG或乳糖及其类似物 |
| 5'测序引物: | T7（TAATACGACTCACTATAGGG） |
| 3'测序引物: | T7-ter（TGCTAGTTATTGCTCAGCGG） |
质粒属性
| 载体宿主： | 大肠杆菌 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达 |
| 基因种属： | 空载体 |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Amp |
| 真核抗性： | |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
pET-21b质粒是一种原核表达载体， N端含有一个T7标签,C端含有一个6×His标签。表达由宿主细胞提供的T7 RNA聚合酶诱导，目的基因被克隆到质粒载体上，受噬菌体强转录及翻译信号控制。
pET系统是有史以来在大肠杆菌中表达重组蛋白的功能最强大的系统，也是现今原核表达方面使用最广泛的系统。该系列质粒能很容易的通过降低诱导物的浓度来削弱蛋白表达。在非诱导条件下，可以使目的基因处于完全沉默状态而不转录。
The pET-21a-d(+) vectors carry an N-terminal T7•Tag® sequence plus an optional C-terminal His•Tag® sequence. These vectors differ from pET-24a-d(+) only by their selectable marker (ampicillin vs. kanamycin resistance). Unique sites are shown on the circle map. Note that the sequence is numbered by the pBR322 convention, so the T7 expression region is reversed on the circular map. The cloning/expression region of the coding strand transcribed by T7 RNA polymerase is shown below. The f1 origin is oriented so that infection with helper phage will produce virions containing single-stranded DNA that corresponds to the coding strand. Therefore, single-stranded sequencing should be performed using the T7 terminator primer.
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 5442 bp ds-DNA circular SYN 31-7-2015
DEFINITION synthetic circular DNA
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 5442)
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported 2015-7-31 MLCC
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..5442
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
source 246..268
/organism="Enterobacteria phage T7"
/mol_type="genomic DNA"
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polymerase"
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T7 gene 10 (Olins and Rangwala, 1989)"
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relieved by adding lactose or
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isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
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ORIGIN
1 atccggatat agttcctcct ttcagcaaaa aacccctcaa gacccgttta gaggccccaa
61 ggggttatgc tagttattgc tcagcggtgg cagcagccaa ctcagcttcc tttcgggctt
121 tgttagcagc cggatctcag tggtggtggt ggtggtgctc gagtgcggcc gcaagcttgt
181 cgacggagct cgaattcgga tcccgaccca tttgctgtcc accagtcatg ctagccatat
241 gtatatctcc ttcttaaagt taaacaaaat tatttctaga ggggaattgt tatccgctca
301 caattcccct atagtgagtc gtattaattt cgcgggatcg agatctcgat cctctacgcc
361 ggacgcatcg tggccggcat caccggcgcc acaggtgcgg ttgctggcgc ctatatcgcc
421 gacatcaccg atggggaaga tcgggctcgc cacttcgggc tcatgagcgc ttgtttcggc
481 gtgggtatgg tggcaggccc cgtggccggg ggactgttgg gcgccatctc cttgcatgca
541 ccattccttg cggcggcggt gctcaacggc ctcaacctac tactgggctg cttcctaatg
601 caggagtcgc ataagggaga gcgtcgagat cccggacacc atcgaatggc gcaaaacctt
661 tcgcggtatg gcatgatagc gcccggaaga gagtcaattc agggtggtga atgtgaaacc
721 agtaacgtta tacgatgtcg cagagtatgc cggtgtctct tatcagaccg tttcccgcgt
781 ggtgaaccag gccagccacg tttctgcgaa aacgcgggaa aaagtggaag cggcgatggc
841 ggagctgaat tacattccca accgcgtggc acaacaactg gcgggcaaac agtcgttgct
901 gattggcgtt gccacctcca gtctggccct gcacgcgccg tcgcaaattg tcgcggcgat
961 taaatctcgc gccgatcaac tgggtgccag cgtggtggtg tcgatggtag aacgaagcgg
1021 cgtcgaagcc tgtaaagcgg cggtgcacaa tcttctcgcg caacgcgtca gtgggctgat
1081 cattaactat ccgctggatg accaggatgc cattgctgtg gaagctgcct gcactaatgt
1141 tccggcgtta tttcttgatg tctctgacca gacacccatc aacagtatta ttttctccca
1201 tgaagacggt acgcgactgg gcgtggagca tctggtcgca ttgggtcacc agcaaatcgc
1261 gctgttagcg ggcccattaa gttctgtctc ggcgcgtctg cgtctggctg gctggcataa
1321 atatctcact cgcaatcaaa ttcagccgat agcggaacgg gaaggcgact ggagtgccat
1381 gtccggtttt caacaaacca tgcaaatgct gaatgagggc atcgttccca ctgcgatgct
1441 ggttgccaac gatcagatgg cgctgggcgc aatgcgcgcc attaccgagt ccgggctgcg
1501 cgttggtgcg gatatctcgg tagtgggata cgacgatacc gaagacagct catgttatat
1561 cccgccgtta accaccatca aacaggattt tcgcctgctg gggcaaacca gcgtggaccg
1621 cttgctgcaa ctctctcagg gccaggcggt gaagggcaat cagctgttgc ccgtctcact
1681 ggtgaaaaga aaaaccaccc tggcgcccaa tacgcaaacc gcctctcccc gcgcgttggc
1741 cgattcatta atgcagctgg cacgacaggt ttcccgactg gaaagcgggc agtgagcgca
1801 acgcaattaa tgtaagttag ctcactcatt aggcaccggg atctcgaccg atgcccttga
1861 gagccttcaa cccagtcagc tccttccggt gggcgcgggg catgactatc gtcgccgcac
1921 ttatgactgt cttctttatc atgcaactcg taggacaggt gccggcagcg ctctgggtca
1981 ttttcggcga ggaccgcttt cgctggagcg cgacgatgat cggcctgtcg cttgcggtat
2041 tcggaatctt gcacgccctc gctcaagcct tcgtcactgg tcccgccacc aaacgtttcg
2101 gcgagaagca ggccattatc gccggcatgg cggccccacg ggtgcgcatg atcgtgctcc
2161 tgtcgttgag gacccggcta ggctggcggg gttgccttac tggttagcag aatgaatcac
2221 cgatacgcga gcgaacgtga agcgactgct gctgcaaaac gtctgcgacc tgagcaacaa
2281 catgaatggt cttcggtttc cgtgtttcgt aaagtctgga aacgcggaag tcagcgccct
2341 gcaccattat gttccggatc tgcatcgcag gatgctgctg gctaccctgt ggaacaccta
2401 catctgtatt aacgaagcgc tggcattgac cctgagtgat ttttctctgg tcccgccgca
2461 tccataccgc cagttgttta ccctcacaac gttccagtaa ccgggcatgt tcatcatcag
2521 taacccgtat cgtgagcatc ctctctcgtt tcatcggtat cattaccccc atgaacagaa
2581 atccccctta cacggaggca tcagtgacca aacaggaaaa aaccgccctt aacatggccc
2641 gctttatcag aagccagaca ttaacgcttc tggagaaact caacgagctg gacgcggatg
2701 aacaggcaga catctgtgaa tcgcttcacg accacgctga tgagctttac cgcagctgcc
2761 tcgcgcgttt cggtgatgac ggtgaaaacc tctgacacat gcagctcccg gagacggtca
2821 cagcttgtct gtaagcggat gccgggagca gacaagcccg tcagggcgcg tcagcgggtg
2881 ttggcgggtg tcggggcgca gccatgaccc agtcacgtag cgatagcgga gtgtatactg
2941 gcttaactat gcggcatcag agcagattgt actgagagtg caccatatat gcggtgtgaa
3001 ataccgcaca gatgcgtaag gagaaaatac cgcatcaggc gctcttccgc ttcctcgctc
3061 actgactcgc tgcgctcggt cgttcggctg cggcgagcgg tatcagctca ctcaaaggcg
3121 gtaatacggt tatccacaga atcaggggat aacgcaggaa agaacatgtg agcaaaaggc
3181 cagcaaaagg ccaggaaccg taaaaaggcc gcgttgctgg cgtttttcca taggctccgc
3241 ccccctgacg agcatcacaa aaatcgacgc tcaagtcaga ggtggcgaaa cccgacagga
3301 ctataaagat accaggcgtt tccccctgga agctccctcg tgcgctctcc tgttccgacc
3361 ctgccgctta ccggatacct gtccgccttt ctcccttcgg gaagcgtggc gctttctcat
3421 agctcacgct gtaggtatct cagttcggtg taggtcgttc gctccaagct gggctgtgtg
3481 cacgaacccc ccgttcagcc cgaccgctgc gccttatccg gtaactatcg tcttgagtcc
3541 aacccggtaa gacacgactt atcgccactg gcagcagcca ctggtaacag gattagcaga
3601 gcgaggtatg taggcggtgc tacagagttc ttgaagtggt ggcctaacta cggctacact
3661 agaaggacag tatttggtat ctgcgctctg ctgaagccag ttaccttcgg aaaaagagtt
3721 ggtagctctt gatccggcaa acaaaccacc gctggtagcg gtggtttttt tgtttgcaag
3781 cagcagatta cgcgcagaaa aaaaggatct caagaagatc ctttgatctt ttctacgggg
3841 tctgacgctc agtggaacga aaactcacgt taagggattt tggtcatgag attatcaaaa
3901 aggatcttca cctagatcct tttaaattaa aaatgaagtt ttaaatcaat ctaaagtata
3961 tatgagtaaa cttggtctga cagttaccaa tgcttaatca gtgaggcacc tatctcagcg
4021 atctgtctat ttcgttcatc catagttgcc tgactccccg tcgtgtagat aactacgata
4081 cgggagggct taccatctgg ccccagtgct gcaatgatac cgcgagaccc acgctcaccg
4141 gctccagatt tatcagcaat aaaccagcca gccggaaggg ccgagcgcag aagtggtcct
4201 gcaactttat ccgcctccat ccagtctatt aattgttgcc gggaagctag agtaagtagt
4261 tcgccagtta atagtttgcg caacgttgtt gccattgctg caggcatcgt ggtgtcacgc
4321 tcgtcgtttg gtatggcttc attcagctcc ggttcccaac gatcaaggcg agttacatga
4381 tcccccatgt tgtgcaaaaa agcggttagc tccttcggtc ctccgatcgt tgtcagaagt
4441 aagttggccg cagtgttatc actcatggtt atggcagcac tgcataattc tcttactgtc
4501 atgccatccg taagatgctt ttctgtgact ggtgagtact caaccaagtc attctgagaa
4561 tagtgtatgc ggcgaccgag ttgctcttgc ccggcgtcaa tacgggataa taccgcgcca
4621 catagcagaa ctttaaaagt gctcatcatt ggaaaacgtt cttcggggcg aaaactctca
4681 aggatcttac cgctgttgag atccagttcg atgtaaccca ctcgtgcacc caactgatct
4741 tcagcatctt ttactttcac cagcgtttct gggtgagcaa aaacaggaag gcaaaatgcc
4801 gcaaaaaagg gaataagggc gacacggaaa tgttgaatac tcatactctt cctttttcaa
4861 tattattgaa gcatttatca gggttattgt ctcatgagcg gatacatatt tgaatgtatt
4921 tagaaaaata aacaaatagg ggttccgcgc acatttcccc gaaaagtgcc acctgaaatt
4981 gtaaacgtta atattttgtt aaaattcgcg ttaaattttt gttaaatcag ctcatttttt
5041 aaccaatagg ccgaaatcgg caaaatccct tataaatcaa aagaatagac cgagataggg
5101 ttgagtgttg ttccagtttg gaacaagagt ccactattaa agaacgtgga ctccaacgtc
5161 aaagggcgaa aaaccgtcta tcagggcgat ggcccactac gtgaaccatc accctaatca
5221 agttttttgg ggtcgaggtg ccgtaaagca ctaaatcgga accctaaagg gagcccccga
5281 tttagagctt gacggggaaa gccggcgaac gtggcgagaa aggaagggaa gaaagcgaaa
5341 ggagcgggcg ctagggcgct ggcaagtgta gcggtcacgc tgcgcgtaac caccacaccc
5401 gccgcgctta atgcgccgct acagggcgcg tcccattcgc ca
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P2627/pENTR223-EXO1-A2009G-C2167T人源基因质粒 |
| P2628/pENTR223-WDR47-A2338G-T2369C人源基因质粒 |
| P2629/pENTR223-WWP1人源基因质粒 |
| P2630/pENTR223-PSMD2-A2170T人源基因质粒 |
| P2631/pENTR223-PCDHB15-A1420C-G1481A人源基因质粒 |
| P2632/pENTR223-ELP2人源基因质粒 |
| P2633/pENTR223-TTC12-A13T人源基因质粒 |
| P2634/pENTR223-LENG8-A10G人源基因质粒 |
| P2639/pENTR223-CAPN1人源基因质粒 |
| P2640/pENTR223-FOXM1人源基因质粒 |
| P2641/pENTR223-RBPMS人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
晚上每天都有人做报告，我觉得让我收获最大的是Bill Studier的报告。本来这个报告是后来才听到的，但是由于Burgess的模块是唯一的涉及大肠杆菌中表达蛋白的，我把这一段提前来说说。Studier这老哥是Brookhaven National Laboratory的，一生研究T7噬菌体，也是T7 RNA polymerase induction system（pET系列质粒）的发明者。 T7系统在大肠杆菌表达蛋白的应用实在太广泛了，但凡表达蛋白的兄弟姐妹们的不可能不知道这个系统
-1,pBADHis, pBADHislacZ，pLLP ompA, pINIIIompA, pMBP-P ,pMBP-C 共表达质粒：pCDFduet-1 以及pCDNA3.1，pEGFP-N2等 大肠杆菌Rosetta（DE3），Rasettagame（DE3），Top10F', BL21(DE3)plySS 等 酵母表达质粒： pPICZαA, pGAPZαA, 酵母细胞 KM71, X33 yingzi
pET17b 大肠杆菌质粒 Amp pET19b 大肠杆菌质粒 Amp pET20b 大肠杆菌质粒 Amp pET21b 大肠杆菌质粒 Amp
pET-21b大肠表达质粒
￥100 - 1000
