pCMV-HA-Ub人源基因质粒

基本信息
名称：pCMV-HA-Ub人源基因质粒
别称: 1×Ub
启动子：CMV
复制子: pUC
终止子:  SV40 poly(A) signal
质粒分类:  基因文库质粒；人源质粒；泛素化系列质粒
质粒大小：3997bp
质粒标签：N-HA
原核抗性: Amp
筛选标记：无
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度

表达宿主:	哺乳细胞
诱导方式:	无需诱导
5'测序引物:	CMV-F：CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG
3'测序引物:	Sv40-polyA-R：GAAATTTGTGATGCTATTGC

质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：
荧光蛋白：

质粒简介

人类Ubiquiitin基因有四个，编码同一个蛋白，称为Ubiquitin分子，这四个基因的mRNA水平存在些许差异，但是蛋白序列是一样的。其中最常见的是Ubiquitin C（UBC）、Ubiquitin B（UBB）基因，UBC mRNA编码六个重复的Ubiquitin分子，UBB编码四个重复的Ubquitin分子，所以外源克隆的HA-UB一般只克隆了一个ub分子，也就只有76个氨基酸，如果您需要连续几个Ub的那种，可以委托我们做亚克隆，HA-ub(n),n=1.2.3.4.5.6.....
Homo sapiens ubiquitin C (UBC), mRNA，NCBI Reference Sequence: NM_021009.6

质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                3997 bp ds-DNA     circular SYN 11-MAR-2017
DEFINITION  synthetic circular DNA
ACCESSION   .
VERSION     .
KEYWORDS    pCMV-HA-UB
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 3997)
  AUTHORS   .
  TITLE     Direct Submission
  JOURNAL   Exported Saturday, March 11, 2017 from miaolingbio
            http://www.miaolingbio.com
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..3997
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     enhancer        27..330
                     /note="CMV enhancer"
                     /note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
     promoter        331..534
                     /note="CMV promoter"
                     /note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early 
                     promoter"
     intron          672..768
                     /note="SV40 intron"
                     /note="modified SV40 intron with splice donor and acceptor 
                     sites"
     CDS             832..858
                     /codon_start=1
                     /product="HA (human influenza hemagglutinin) epitope tag"
                     /note="HA"
                     /translation="YPYDVPDYA"
     misc_feature    886..1113
                     /note="UB"
     polyA_signal    1136..1270
                     /note="SV40 poly(A) signal"
                     /note="SV40 polyadenylation signal"
     primer_bind     complement(1381..1397)
                     /note="M13 rev"
                     /note="common sequencing primer, one of multiple similar 
                     variants"
     protein_bind    1405..1421
                     /bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
                     /note="lac operator"
                     /note="The lac repressor binds to the lac operator to 
                     inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be 
                     relieved by adding lactose or 
                     isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
     promoter        complement(1429..1459)
                     /note="lac promoter"
                     /note="promoter for the E. coli lac operon"
     protein_bind    1474..1495
                     /bound_moiety="E. coli catabolite activator protein"
                     /note="CAP binding site"
                     /note="CAP binding activates transcription in the presence 
                     of cAMP."
     rep_origin      complement(1783..2371)
                     /direction=LEFT
                     /note="ori"
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     CDS             complement(2542..3402)
                     /codon_start=1
                     /gene="bla"
                     /product="beta-lactamase"
                     /note="AmpR"
                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
                     related antibiotics"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
     promoter        complement(3403..3507)
                     /gene="bla"
                     /note="AmpR promoter"
     primer_bind     3981..3997
                     /note="M13 fwd"
                     /note="common sequencing primer, one of multiple similar 
                     variants"
ORIGIN
        1 gagttcgagc ttgcatgcct gcaggtcgtt acataactta cggtaaatgg cccgcctggc
       61 tgaccgccca acgacccccg cccattgacg tcaataatga cgtatgttcc catagtaacg
      121 ccaataggga ctttccattg acgtcaatgg gtggagtatt tacggtaaac tgcccacttg
      181 gcagtacatc aagtgtatca tatgccaagt acgcccccta ttgacgtcaa tgacggtaaa
      241 tggcccgcct ggcattatgc ccagtacatg accttatggg actttcctac ttggcagtac
      301 atctacgtat tagtcatcgc tattaccatg gtgatgcggt tttggcagta catcaatggg
      361 cgtggatagc ggtttgactc acggggattt ccaagtctcc accccattga cgtcaatggg
      421 agtttgtttt ggcaccaaaa tcaacgggac tttccaaaat gtcgtaacaa ctccgcccca
      481 ttgacgcaaa tgggcggtag gcgtgtacgg tgggaggtct atataagcag agctcgttta
      541 gtgaaccgtc agatcgcctg gagacgccat ccacgctgtt ttgacctcca tagaagacac
      601 cgggaccgat ccagcctccg gactctagag gatccggtac tagaggaact gaaaaaccag
      661 aaagttaact ggtaagttta gtctttttgt cttttatttc aggtcccgga tccggtggtg
      721 gtgcaaatca aagaactgct cctcagtgga tgttgccttt acttctaggc ctgtacggaa
      781 gtgttacttc tgctctaaaa gctgcggaat tgtacccgcg ggcccaccat gtacccatac
      841 gatgttccag attacgctct tatggccatg gaggcccgaa ttcgcatgca gatcttcgtg
      901 aagaccctga ctggtaagac catcactctc gaagtggagc cgagtgacac cattgagaat
      961 gtcaaggcaa agatccaaga caaggaaggc atccctcctg accagcagag gttgatcttt
     1021 gctgggaaac agctggaaga tggacgcacc ctgtctgact acaacatcca gaaagagtcc
     1081 accctgcacc tggtcctccg tctcagaggt gggagtgcgg taccgcggcc gcggggatcc
     1141 agacatgata agatacattg atgagtttgg acaaaccaca actagaatgc agtgaaaaaa
     1201 atgctttatt tgtgaaattt gtgatgctat tgctttattt gtaaccatta taagctgcaa
     1261 taaacaagtt aacaacaaca attgcattca ttttatgttt caggttcagg gggaggtgtg
     1321 ggaggttttt tcggatcctc tagagtcgat ctgcaggcat gctagcttgg cgtaatcatg
     1381 gtcatagctg tttcctgtgt gaaattgtta tccgctcaca attccacaca acatacgagc
     1441 cggaagcata aagtgtaaag cctggggtgc ctaatgagtg agctaactca cattaattgc
     1501 gttgcgctca ctgcccgctt tccagtcggg aaacctgtcg tgccagctgc attaatgaat
     1561 cggccaacgc gcggggagag gcggtttgcg tattgggcgc tcttccgctt cctcgctcac
     1621 tgactcgctg cgctcggtcg ttcggctgcg gcgagcggta tcagctcact caaaggcggt
     1681 aatacggtta tccacagaat caggggataa cgcaggaaag aacatgtgag caaaaggcca
     1741 gcaaaaggcc aggaaccgta aaaaggccgc gttgctggcg tttttccata ggctccgccc
     1801 ccctgacgag catcacaaaa atcgacgctc aagtcagagg tggcgaaacc cgacaggact
     1861 ataaagatac caggcgtttc cccctggaag ctccctcgtg cgctctcctg ttccgaccct
     1921 gccgcttacc ggatacctgt ccgcctttct cccttcggga agcgtggcgc tttctcatag
     1981 ctcacgctgt aggtatctca gttcggtgta ggtcgttcgc tccaagctgg gctgtgtgca
     2041 cgaacccccc gttcagcccg accgctgcgc cttatccggt aactatcgtc ttgagtccaa
     2101 cccggtaaga cacgacttat cgccactggc agcagccact ggtaacagga ttagcagagc
     2161 gaggtatgta ggcggtgcta cagagttctt gaagtggtgg cctaactacg gctacactag
     2221 aagaacagta tttggtatct gcgctctgct gaagccagtt accttcggaa aaagagttgg
     2281 tagctcttga tccggcaaac aaaccaccgc tggtagcggt ggtttttttg tttgcaagca
     2341 gcagattacg cgcagaaaaa aaggatctca agaagatcct ttgatctttt ctacggggtc
     2401 tgacgctcag tggaacgaaa actcacgtta agggattttg gtcatgagat tatcaaaaag
     2461 gatcttcacc tagatccttt taaattaaaa atgaagtttt aaatcaatct aaagtatata
     2521 tgagtaaact tggtctgaca gttaccaatg cttaatcagt gaggcaccta tctcagcgat
     2581 ctgtctattt cgttcatcca tagttgcctg actccccgtc gtgtagataa ctacgatacg
     2641 ggagggctta ccatctggcc ccagtgctgc aatgataccg cgagacccac gctcaccggc
     2701 tccagattta tcagcaataa accagccagc cggaagggcc gagcgcagaa gtggtcctgc
     2761 aactttatcc gcctccatcc agtctattaa ttgttgccgg gaagctagag taagtagttc
     2821 gccagttaat agtttgcgca acgttgttgc cattgctaca ggcatcgtgg tgtcacgctc
     2881 gtcgtttggt atggcttcat tcagctccgg ttcccaacga tcaaggcgag ttacatgatc
     2941 ccccatgttg tgcaaaaaag cggttagctc cttcggtcct ccgatcgttg tcagaagtaa
     3001 gttggccgca gtgttatcac tcatggttat ggcagcactg cataattctc ttactgtcat
     3061 gccatccgta agatgctttt ctgtgactgg tgagtactca accaagtcat tctgagaata
     3121 gtgtatgcgg cgaccgagtt gctcttgccc ggcgtcaata cgggataata ccgcgccaca
     3181 tagcagaact ttaaaagtgc tcatcattgg aaaacgttct tcggggcgaa aactctcaag
     3241 gatcttaccg ctgttgagat ccagttcgat gtaacccact cgtgcaccca actgatcttc
     3301 agcatctttt actttcacca gcgtttctgg gtgagcaaaa acaggaaggc aaaatgccgc
     3361 aaaaaaggga ataagggcga cacggaaatg ttgaatactc atactcttcc tttttcaata
     3421 ttattgaagc atttatcagg gttattgtct catgagcgga tacatatttg aatgtattta
     3481 gaaaaataaa caaatagggg ttccgcgcac atttccccga aaagtgccac ctgacgtcta
     3541 agaaaccatt attatcatga cattaaccta taaaaatagg cgtatcacga ggccctttcg
     3601 tctcgcgcgt ttcggtgatg acggtgaaaa cctctgacac atgcagctcc cggagacggt
     3661 cacagcttgt ctgtaagcgg atgccgggag cagacaagcc cgtcagggcg cgtcagcggg
     3721 tgttggcggg tgtcggggct ggcttaacta tgcggcatca gagcagattg tactgagagt
     3781 gcaccatatg cggtgtgaaa taccgcacag atgcgtaagg agaaaatacc gcatcaggcg
     3841 ccattcgcca ttcaggctgc gcaactgttg ggaagggcga tcggtgcggg cctcttcgct
     3901 attacgccag ctggcgaaag ggggatgtgc tgcaaggcga ttaagttggg taacgccagg
     3961 gttttcccag tcacgacgtt gtaaaacgac ggccagt
//
 

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P3878/pCMV-SPORT6-DVL2人源基因质粒

P3879/pCMV-SPORT6-GAS2L1（1同义突变）人源基因质粒

P3880/pCMV-SPORT6-LYAR人源基因质粒

P3881/pCMV-SPORT6-GPRASP2人源基因质粒

P3882/pCMV-SPORT6-PSMD3（1点突变1同义突变）人源基因质粒

P3883/pCMV-SPORT6-MLXIPL人源基因质粒

P3884/pCMV-SPORT6-PUS7（1同义突变)人源基因质粒

P3885/pCMV-SPORT6-DISP1人源基因质粒

P3886/pCMV-SPORT6-SH2B1人源基因质粒

P3887/pCMV-SPORT6-BCL2（1同义突变）人源基因质粒

P3888/pCMV-SPORT6-PUF60(2点突变）人源基因质粒

P3889/pCMV-SPORT6-EIF2B5（1点突变）人源基因质粒