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- 上海
- P1191
- 2025年07月08日
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- 详细信息
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
NFE2L2
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pT7-His-Nrf2人源基因质粒
别称: NFE2L2
复制子:pBR322
原核抗性: Kan
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：大肠杆菌
载体用途：
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Kan
真核抗性：
荧光蛋白：
质粒简介
pT7-His-Nrf2是一个人源基因大肠表达质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 7099 bp ds-DNA circular SYN 28-九月-2017
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..7099
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
promoter 141..159
/note="T7 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
protein_bind 160..184
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
CDS 240..257
/codon_start=1
/product="6xHis affinity tag"
/note="6xHis"
/translation="HHHHHH"
CDS 276..2093
/codon_start=1
/note="Nrf2"
/translation="MMDLELPPPGLPSQQDMDLIDILWRQDIDLGVSREVFDFSQRRKE
YELEKQKKLEKERQEQLQKEQEKAFFAQLQLDEETGEFLPIQPAQHIQSETSGSANYSQ
VAHIPKSDALYFDDCMQLLAQTFPFVDDNEVSSATFQSLVPDIPGHIESPVFIATNQAQ
SPETSVAQVAPVDLDGMQQDIEQVWEELLSIPELQCLNIENDKLVETTMVPSPEAKLTE
VDNYHFYSSIPSMEKEVGNCSPHFLNAFEDSFSSILSTEDPNQLTVNSLNSDATVNTDF
GDEFYSAFIAEPSISNSMPSPATLSHSLSELLNGPIDVSDLSLCKAFNQNHPESTAEFN
DSDSGISLNTSPSVASPEHSVESSSYGDTLLGL-SDSEVEELDSAPGSVKQNGPKTPVHS
SGDMVQPLSPSQGQSTHVHDAQCENTPEKELPVSPGHRKTPFTKDKHSSRLEAHLTRDE
LRAKALHIPFPVEKIINLPVVDFNEMMSKEQFNEAQLALIRDIRRRGKNKVAAQNCRKR
KLENIVELEQDLDHLKDEKEKLLKEKGENDKSLHLLKKQLSTLYLEVFSMLRDEDGKPY
SPSEYSLQQTRDGNVFLVPKSKKPDVKKN"
CDS 2100..2117
/codon_start=1
/product="6xHis affinity tag"
/note="6xHis"
/translation="HHHHHH"
terminator 2184..2231
/note="T7 terminator"
/note="transcription terminator for bacteriophage T7 RNA
polymerase"
rep_origin 2268..2723
/direction=RIGHT
/note="f1 ori"
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
CDS complement(2816..3631)
/codon_start=1
/gene="aph(3')-Ia"
/product="aminoglycoside phosphotransferase"
/note="KanR"
/note="confers resistance to kanamycin"
/translation="MSHIQRETSCSRPRLNSNMDADLYGYKWARDNVGQSGATIYRLYG
KPDAPELFLKHGKGSVANDVTDEMVRLNWLTEFMPLPTIKHFIRTPDDAWLLTTAIPGK
TAFQVLEEYPDSGENIVDALAVFLRRLHSIPVCNCPFNSDRVFRLAQAQSRMNNGLVDA
SDFDDERNGWPVEQVWKEMHKLLPFSPDSVVTHGDFSLDNLIFDEGKLIGCIDVGRVGI
ADRYQDLAILWNCLGEFSPSLQKRLFQKYGIDNPDMNKLQFHLMLDEFF"
rep_origin 3753..4341
/direction=RIGHT
/note="ori"
/note="high-copy-number colE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(4771..4962)
/codon_start=1
/gene="rop"
/product="Rop protein"
/note="rop"
/translation="MTKQEKTALNMARFIRSQTLTLLEKLNELDADEQADICESLHDHA
DELYRSCLARFGDDGENL"
CDS complement(5771..6853)
/codon_start=1
/gene="lacI"
/product="lac repressor"
/note="lacI"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
/translation="MKPVTLYDVAEYAGVSYQTVSRVVNQASHVSAKTREKVEAAMAEL
NYIPNRVAQQLAGKQSLLIGVATSSLALHAPSQIVAAIKSRADQLGASVVVSMVERSGV
EACKAAVHNLLAQRVSGLIINYPLDDQDAIAVEAACTNVPALFLDVSDQTPINSIIFSH
EDGTRLGVEHLVALGHQQIALLAGPLSSVSARLRLAGWHKYLTRNQIQPIAEREGDWSA
MSGFQQTMQMLNEGIVPTAMLVANDQMALGAMRAITESGLRVGADISVVGYDDTEDSSC
YIPPLTTIKQDFRLLGQTSVDRLLQLSQGQAVKGNQLLPVSLVKRKTTLAPNTQTASPR
ALADSLMQLARQVSRLESGQ"
promoter complement(6854..6931)
/gene="lacI"
/note="lacI promoter"
ORIGIN
1 tcatgagccc gaagtggcga gcccgatctt ccccatcggt gatgtcggcg atataggcgc
61 cagcaaccgc acctgtggcg ccggtgatgc cggccacgat gcgtccggcg tagaggatcg
121 agatctcgat cccgcgaaat taatacgact cactataggg gaattgtgag cggataacaa
181 ttcccctcta gaaataattt tgtttaactt taagaaggag atataccatg ggcagcagcc
241 atcatcatca tcatcacagc agcggccgcg gatccatgat ggacttggag ctgccgccgc
301 cgggactccc gtcccagcag gacatggatt tgattgacat actttggagg caagatatag
361 atcttggagt aagtcgagaa gtatttgact tcagtcagcg acggaaagag tatgagctgg
421 aaaaacagaa aaaacttgaa aaggaaagac aagaacaact ccaaaaggag caagagaaag
481 cctttttcgc tcagttacaa ctagatgaag agacaggtga atttctccca attcagccag
541 cccagcacat ccagtcagaa accagtggat ctgccaacta ctcccaggtt gcccacattc
601 ccaaatcaga tgctttgtac tttgatgact gcatgcagct tttggcgcag acattcccgt
661 ttgtagatga caatgaggtt tcttcggcta cgtttcagtc acttgttcct gatattcccg
721 gtcacatcga gagcccagtc ttcattgcta ctaatcaggc tcagtcacct gaaacttctg
781 ttgctcaggt agcccctgtt gatttagacg gtatgcaaca ggacattgag caagtttggg
841 aggagctatt atccattcct gagttacagt gtcttaatat tgaaaatgac aagctggttg
901 agactaccat ggttccaagt ccagaagcca aactgacaga agttgacaat tatcattttt
961 actcatctat accctcaatg gaaaaagaag taggtaactg tagtccacat tttcttaatg
1021 cttttgagga ttccttcagc agcatcctct ccacagaaga ccccaaccag ttgacagtga
1081 actcattaaa ttcagatgcc acagtcaaca cagattttgg tgatgaattt tattctgctt
1141 tcatagctga gcccagtatc agcaacagca tgccctcacc tgctacttta agccattcac
1201 tctctgaact tctaaatggg cccattgatg tttctgatct atcactttgc aaagctttca
1261 accaaaacca ccctgaaagc acagcagaat tcaatgattc tgactccggc atttcactaa
1321 acacaagtcc cagtgtggca tcaccagaac actcagtgga atcttccagc tatggagaca
1381 cactacttgg cctcagtgat tctgaagtgg aagagctaga tagtgcccct ggaagtgtca
1441 aacagaatgg tcctaaaaca ccagtacatt cttctgggga tatggtacaa cccttgtcac
1501 catctcaggg gcagagcact cacgtgcatg atgcccaatg tgagaacaca ccagagaaag
1561 aattgcctgt aagtcctggt catcggaaaa ccccattcac aaaagacaaa cattcaagcc
1621 gcttggaggc tcatctcaca agagatgaac ttagggcaaa agctctccat atcccattcc
1681 ctgtagaaaa aatcattaac ctccctgttg ttgacttcaa cgaaatgatg tccaaagagc
1741 agttcaatga agctcaactt gcattaattc gggatatacg taggaggggt aagaataaag
1801 tggctgctca gaattgcaga aaaagaaaac tggaaaatat agtagaacta gagcaagatt
1861 tagatcattt gaaagatgaa aaagaaaaat tgctcaaaga aaaaggagaa aatgacaaaa
1921 gccttcacct actgaaaaaa caactcagca ccttatatct cgaagttttc agcatgctac
1981 gtgatgaaga tggaaaacct tattctccta gtgaatactc cctgcagcaa acaagagatg
2041 gcaatgtttt ccttgttccc aaaagtaaga agccagatgt taagaaaaac tagctcgagc
2101 accaccacca ccaccactga gatccggctg ctaacaaagc ccgaaaggaa gctgagttgg
2161 ctgctgccac cgctgagcaa taactagcat aaccccttgg ggcctctaaa cgggtcttga
2221 ggggtttttt gctgaaagga ggaactatat ccggattggc gaatgggacg cgccctgtag
2281 cggcgcatta agcgcggcgg gtgtggtggt tacgcgcagc gtgaccgcta cacttgccag
2341 cgccctagcg cccgctcctt tcgctttctt cccttccttt ctcgccacgt tcgccggctt
2401 tccccgtcaa gctctaaatc gggggctccc tttagggttc cgatttagtg ctttacggca
2461 cctcgacccc aaaaaacttg attagggtga tggttcacgt agtgggccat cgccctgata
2521 gacggttttt cgccctttga cgttggagtc cacgttcttt aatagtggac tcttgttcca
2581 aactggaaca acactcaacc ctatctcggt ctattctttt gatttataag ggattttgcc
2641 gatttcggcc tattggttaa aaaatgagct gatttaacaa aaatttaacg cgaattttaa
2701 caaaatatta acgtttacaa tttcaggtgg cacttttcgg ggaaatgtgc gcggaacccc
2761 tatttgttta tttttctaaa tacattcaaa tatgtatccg ctcatgaatt aattcttaga
2821 aaaactcatc gagcatcaaa tgaaactgca atttattcat atcaggatta tcaataccat
2881 atttttgaaa aagccgtttc tgtaatgaag gagaaaactc accgaggcag ttccatagga
2941 tggcaagatc ctggtatcgg tctgcgattc cgactcgtcc aacatcaata caacctatta
3001 atttcccctc gtcaaaaata aggttatcaa gtgagaaatc accatgagtg acgactgaat
3061 ccggtgagaa tggcaaaagt ttatgcattt ctttccagac ttgttcaaca ggccagccat
3121 tacgctcgtc atcaaaatca ctcgcatcaa ccaaaccgtt attcattcgt gattgcgcct
3181 gagcgagacg aaatacgcga tcgctgttaa aaggacaatt acaaacagga atcgaatgca
3241 accggcgcag gaacactgcc agcgcatcaa caatattttc acctgaatca ggatattctt
3301 ctaatacctg gaatgctgtt ttcccgggga tcgcagtggt gagtaaccat gcatcatcag
3361 gagtacggat aaaatgcttg atggtcggaa gaggcataaa ttccgtcagc cagtttagtc
3421 tgaccatctc atctgtaaca tcattggcaa cgctaccttt gccatgtttc agaaacaact
3481 ctggcgcatc gggcttccca tacaatcgat agattgtcgc acctgattgc ccgacattat
3541 cgcgagccca tttataccca tataaatcag catccatgtt ggaatttaat cgcggcctag
3601 agcaagacgt ttcccgttga atatggctca taacacccct tgtattactg tttatgtaag
3661 cagacagttt tattgttcat gaccaaaatc ccttaacgtg agttttcgtt ccactgagcg
3721 tcagaccccg tagaaaagat caaaggatct tcttgagatc ctttttttct gcgcgtaatc
3781 tgctgcttgc aaacaaaaaa accaccgcta ccagcggtgg tttgtttgcc ggatcaagag
3841 ctaccaactc tttttccgaa ggtaactggc ttcagcagag cgcagatacc aaatactgtc
3901 cttctagtgt agccgtagtt aggccaccac ttcaagaact ctgtagcacc gcctacatac
3961 ctcgctctgc taatcctgtt accagtggct gctgccagtg gcgataagtc gtgtcttacc
4021 gggttggact caagacgata gttaccggat aaggcgcagc ggtcgggctg aacggggggt
4081 tcgtgcacac agcccagctt ggagcgaacg acctacaccg aactgagata cctacagcgt
4141 gagctatgag aaagcgccac gcttcccgaa gggagaaagg cggacaggta tccggtaagc
4201 ggcagggtcg gaacaggaga gcgcacgagg gagcttccag ggggaaacgc ctggtatctt
4261 tatagtcctg tcgggtttcg ccacctctga cttgagcgtc gatttttgtg atgctcgtca
4321 ggggggcgga gcctatggaa aaacgccagc aacgcggcct ttttacggtt cctggccttt
4381 tgctggcctt ttgctcacat gttctttcct gcgttatccc ctgattctgt ggataaccgt
4441 attaccgcct ttgagtgagc tgataccgct cgccgcagcc gaacgaccga gcgcagcgag
4501 tcagtgagcg aggaagcgga agagcgcctg atgcggtatt ttctccttac gcatctgtgc
4561 ggtatttcac accgcatata tggtgcactc tcagtacaat ctgctctgat gccgcatagt
4621 taagccagta tacactccgc tatcgctacg tgactgggtc atggctgcgc cccgacaccc
4681 gccaacaccc gctgacgcgc cctgacgggc ttgtctgctc ccggcatccg cttacagaca
4741 agctgtgacc gtctccggga gctgcatgtg tcagaggttt tcaccgtcat caccgaaacg
4801 cgcgaggcag ctgcggtaaa gctcatcagc gtggtcgtga agcgattcac agatgtctgc
4861 ctgttcatcc gcgtccagct cgttgagttt ctccagaagc gttaatgtct ggcttctgat
4921 aaagcgggcc atgttaaggg cggttttttc ctgtttggtc actgatgcct ccgtgtaagg
4981 gggatttctg ttcatggggg taatgatacc gatgaaacga gagaggatgc tcacgatacg
5041 ggttactgat gatgaacatg cccggttact ggaacgttgt gagggtaaac aactggcggt
5101 atggatgcgg cgggaccaga gaaaaatcac tcagggtcaa tgccagcgct tcgttaatac
5161 agatgtaggt gttccacagg gtagccagca gcatcctgcg atgcagatcc ggaacataat
5221 ggtgcagggc gctgacttcc gcgtttccag actttacgaa acacggaaac cgaagaccat
5281 tcatgttgtt gctcaggtcg cagacgtttt gcagcagcag tcgcttcacg ttcgctcgcg
5341 tatcggtgat tcattctgct aaccagtaag gcaaccccgc cagcctagcc gggtcctcaa
5401 cgacaggagc acgatcatgc gcacccgtgg ggccgccatg ccggcgataa tggcctgctt
5461 ctcgccgaaa cgtttggtgg cgggaccagt gacgaaggct tgagcgaggg cgtgcaagat
5521 tccgaatacc gcaagcgaca ggccgatcat cgtcgcgctc cagcgaaagc ggtcctcgcc
5581 gaaaatgacc cagagcgctg ccggcacctg tcctacgagt tgcatgataa agaagacagt
5641 cataagtgcg gcgacgatag tcatgccccg cgcccaccgg aaggagctga ctgggttgaa
5701 ggctctcaag ggcatcggtc gagatcccgg tgcctaatga gtgagctaac ttacattaat
5761 tgcgttgcgc tcactgcccg ctttccagtc gggaaacctg tcgtgccagc tgcattaatg
5821 aatcggccaa cgcgcgggga gaggcggttt gcgtattggg cgccagggtg gtttttcttt
5881 tcaccagtga gacgggcaac agctgattgc ccttcaccgc ctggccctga gagagttgca
5941 gcaagcggtc cacgctggtt tgccccagca ggcgaaaatc ctgtttgatg gtggttaacg
6001 gcgggatata acatgagctg tcttcggtat cgtcgtatcc cactaccgag atatccgcac
6061 caacgcgcag cccggactcg gtaatggcgc gcattgcgcc cagcgccatc tgatcgttgg
6121 caaccagcat cgcagtggga acgatgccct cattcagcat ttgcatggtt tgttgaaaac
6181 cggacatggc actccagtcg ccttcccgtt ccgctatcgg ctgaatttga ttgcgagtga
6241 gatatttatg ccagccagcc agacgcagac gcgccgagac agaacttaat gggcccgcta
6301 acagcgcgat ttgctggtga cccaatgcga ccagatgctc cacgcccagt cgcgtaccgt
6361 cttcatggga gaaaataata ctgttgatgg gtgtctggtc agagacatca agaaataacg
6421 ccggaacatt agtgcaggca gcttccacag caatggcatc ctggtcatcc agcggatagt
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6541 cgacgccgct tcgttctacc atcgacacca ccacgctggc acccagttga tcggcgcgag
6601 atttaatcgc cgcgacaatt tgcgacggcg cgtgcagggc cagactggag gtggcaacgc
6661 caatcagcaa cgactgtttg cccgccagtt gttgtgccac gcggttggga atgtaattca
6721 gctccgccat cgccgcttcc actttttccc gcgttttcgc agaaacgtgg ctggcctggt
6781 tcaccacgcg ggaaacggtc tgataagaga caccggcata ctctgcgaca tcgtataacg
6841 ttactggttt cacattcacc accctgaatt gactctcttc cgggcgctat catgccatac
6901 cgcgaaaggt tttgcgccat tcgatggtgt ccgggatctc gacgctctcc cttatgcgac
6961 tcctgcatta ggaagcagcc cagtagtagg ttgaggccgt tgagcaccgc cgccgcaagg
7021 aatggtgcat gcaaggagat ggcgcccaac agtcccccgg ccacggggcc tgccaccata
7081 cccacgccga aacaagcgc
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pT7-His-Nrf2人源基因质粒
别称: NFE2L2
| 启动子: | T7 |
|---|
原核抗性: Kan
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：大肠杆菌
载体用途：
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Kan
真核抗性：
荧光蛋白：
质粒简介
pT7-His-Nrf2是一个人源基因大肠表达质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 7099 bp ds-DNA circular SYN 28-九月-2017
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..7099
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
promoter 141..159
/note="T7 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
protein_bind 160..184
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
CDS 240..257
/codon_start=1
/product="6xHis affinity tag"
/note="6xHis"
/translation="HHHHHH"
CDS 276..2093
/codon_start=1
/note="Nrf2"
/translation="MMDLELPPPGLPSQQDMDLIDILWRQDIDLGVSREVFDFSQRRKE
YELEKQKKLEKERQEQLQKEQEKAFFAQLQLDEETGEFLPIQPAQHIQSETSGSANYSQ
VAHIPKSDALYFDDCMQLLAQTFPFVDDNEVSSATFQSLVPDIPGHIESPVFIATNQAQ
SPETSVAQVAPVDLDGMQQDIEQVWEELLSIPELQCLNIENDKLVETTMVPSPEAKLTE
VDNYHFYSSIPSMEKEVGNCSPHFLNAFEDSFSSILSTEDPNQLTVNSLNSDATVNTDF
GDEFYSAFIAEPSISNSMPSPATLSHSLSELLNGPIDVSDLSLCKAFNQNHPESTAEFN
DSDSGISLNTSPSVASPEHSVESSSYGDTLLGL-SDSEVEELDSAPGSVKQNGPKTPVHS
SGDMVQPLSPSQGQSTHVHDAQCENTPEKELPVSPGHRKTPFTKDKHSSRLEAHLTRDE
LRAKALHIPFPVEKIINLPVVDFNEMMSKEQFNEAQLALIRDIRRRGKNKVAAQNCRKR
KLENIVELEQDLDHLKDEKEKLLKEKGENDKSLHLLKKQLSTLYLEVFSMLRDEDGKPY
SPSEYSLQQTRDGNVFLVPKSKKPDVKKN"
CDS 2100..2117
/codon_start=1
/product="6xHis affinity tag"
/note="6xHis"
/translation="HHHHHH"
terminator 2184..2231
/note="T7 terminator"
/note="transcription terminator for bacteriophage T7 RNA
polymerase"
rep_origin 2268..2723
/direction=RIGHT
/note="f1 ori"
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
CDS complement(2816..3631)
/codon_start=1
/gene="aph(3')-Ia"
/product="aminoglycoside phosphotransferase"
/note="KanR"
/note="confers resistance to kanamycin"
/translation="MSHIQRETSCSRPRLNSNMDADLYGYKWARDNVGQSGATIYRLYG
KPDAPELFLKHGKGSVANDVTDEMVRLNWLTEFMPLPTIKHFIRTPDDAWLLTTAIPGK
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SDFDDERNGWPVEQVWKEMHKLLPFSPDSVVTHGDFSLDNLIFDEGKLIGCIDVGRVGI
ADRYQDLAILWNCLGEFSPSLQKRLFQKYGIDNPDMNKLQFHLMLDEFF"
rep_origin 3753..4341
/direction=RIGHT
/note="ori"
/note="high-copy-number colE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(4771..4962)
/codon_start=1
/gene="rop"
/product="Rop protein"
/note="rop"
/translation="MTKQEKTALNMARFIRSQTLTLLEKLNELDADEQADICESLHDHA
DELYRSCLARFGDDGENL"
CDS complement(5771..6853)
/codon_start=1
/gene="lacI"
/product="lac repressor"
/note="lacI"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
/translation="MKPVTLYDVAEYAGVSYQTVSRVVNQASHVSAKTREKVEAAMAEL
NYIPNRVAQQLAGKQSLLIGVATSSLALHAPSQIVAAIKSRADQLGASVVVSMVERSGV
EACKAAVHNLLAQRVSGLIINYPLDDQDAIAVEAACTNVPALFLDVSDQTPINSIIFSH
EDGTRLGVEHLVALGHQQIALLAGPLSSVSARLRLAGWHKYLTRNQIQPIAEREGDWSA
MSGFQQTMQMLNEGIVPTAMLVANDQMALGAMRAITESGLRVGADISVVGYDDTEDSSC
YIPPLTTIKQDFRLLGQTSVDRLLQLSQGQAVKGNQLLPVSLVKRKTTLAPNTQTASPR
ALADSLMQLARQVSRLESGQ"
promoter complement(6854..6931)
/gene="lacI"
/note="lacI promoter"
ORIGIN
1 tcatgagccc gaagtggcga gcccgatctt ccccatcggt gatgtcggcg atataggcgc
61 cagcaaccgc acctgtggcg ccggtgatgc cggccacgat gcgtccggcg tagaggatcg
121 agatctcgat cccgcgaaat taatacgact cactataggg gaattgtgag cggataacaa
181 ttcccctcta gaaataattt tgtttaactt taagaaggag atataccatg ggcagcagcc
241 atcatcatca tcatcacagc agcggccgcg gatccatgat ggacttggag ctgccgccgc
301 cgggactccc gtcccagcag gacatggatt tgattgacat actttggagg caagatatag
361 atcttggagt aagtcgagaa gtatttgact tcagtcagcg acggaaagag tatgagctgg
421 aaaaacagaa aaaacttgaa aaggaaagac aagaacaact ccaaaaggag caagagaaag
481 cctttttcgc tcagttacaa ctagatgaag agacaggtga atttctccca attcagccag
541 cccagcacat ccagtcagaa accagtggat ctgccaacta ctcccaggtt gcccacattc
601 ccaaatcaga tgctttgtac tttgatgact gcatgcagct tttggcgcag acattcccgt
661 ttgtagatga caatgaggtt tcttcggcta cgtttcagtc acttgttcct gatattcccg
721 gtcacatcga gagcccagtc ttcattgcta ctaatcaggc tcagtcacct gaaacttctg
781 ttgctcaggt agcccctgtt gatttagacg gtatgcaaca ggacattgag caagtttggg
841 aggagctatt atccattcct gagttacagt gtcttaatat tgaaaatgac aagctggttg
901 agactaccat ggttccaagt ccagaagcca aactgacaga agttgacaat tatcattttt
961 actcatctat accctcaatg gaaaaagaag taggtaactg tagtccacat tttcttaatg
1021 cttttgagga ttccttcagc agcatcctct ccacagaaga ccccaaccag ttgacagtga
1081 actcattaaa ttcagatgcc acagtcaaca cagattttgg tgatgaattt tattctgctt
1141 tcatagctga gcccagtatc agcaacagca tgccctcacc tgctacttta agccattcac
1201 tctctgaact tctaaatggg cccattgatg tttctgatct atcactttgc aaagctttca
1261 accaaaacca ccctgaaagc acagcagaat tcaatgattc tgactccggc atttcactaa
1321 acacaagtcc cagtgtggca tcaccagaac actcagtgga atcttccagc tatggagaca
1381 cactacttgg cctcagtgat tctgaagtgg aagagctaga tagtgcccct ggaagtgtca
1441 aacagaatgg tcctaaaaca ccagtacatt cttctgggga tatggtacaa cccttgtcac
1501 catctcaggg gcagagcact cacgtgcatg atgcccaatg tgagaacaca ccagagaaag
1561 aattgcctgt aagtcctggt catcggaaaa ccccattcac aaaagacaaa cattcaagcc
1621 gcttggaggc tcatctcaca agagatgaac ttagggcaaa agctctccat atcccattcc
1681 ctgtagaaaa aatcattaac ctccctgttg ttgacttcaa cgaaatgatg tccaaagagc
1741 agttcaatga agctcaactt gcattaattc gggatatacg taggaggggt aagaataaag
1801 tggctgctca gaattgcaga aaaagaaaac tggaaaatat agtagaacta gagcaagatt
1861 tagatcattt gaaagatgaa aaagaaaaat tgctcaaaga aaaaggagaa aatgacaaaa
1921 gccttcacct actgaaaaaa caactcagca ccttatatct cgaagttttc agcatgctac
1981 gtgatgaaga tggaaaacct tattctccta gtgaatactc cctgcagcaa acaagagatg
2041 gcaatgtttt ccttgttccc aaaagtaaga agccagatgt taagaaaaac tagctcgagc
2101 accaccacca ccaccactga gatccggctg ctaacaaagc ccgaaaggaa gctgagttgg
2161 ctgctgccac cgctgagcaa taactagcat aaccccttgg ggcctctaaa cgggtcttga
2221 ggggtttttt gctgaaagga ggaactatat ccggattggc gaatgggacg cgccctgtag
2281 cggcgcatta agcgcggcgg gtgtggtggt tacgcgcagc gtgaccgcta cacttgccag
2341 cgccctagcg cccgctcctt tcgctttctt cccttccttt ctcgccacgt tcgccggctt
2401 tccccgtcaa gctctaaatc gggggctccc tttagggttc cgatttagtg ctttacggca
2461 cctcgacccc aaaaaacttg attagggtga tggttcacgt agtgggccat cgccctgata
2521 gacggttttt cgccctttga cgttggagtc cacgttcttt aatagtggac tcttgttcca
2581 aactggaaca acactcaacc ctatctcggt ctattctttt gatttataag ggattttgcc
2641 gatttcggcc tattggttaa aaaatgagct gatttaacaa aaatttaacg cgaattttaa
2701 caaaatatta acgtttacaa tttcaggtgg cacttttcgg ggaaatgtgc gcggaacccc
2761 tatttgttta tttttctaaa tacattcaaa tatgtatccg ctcatgaatt aattcttaga
2821 aaaactcatc gagcatcaaa tgaaactgca atttattcat atcaggatta tcaataccat
2881 atttttgaaa aagccgtttc tgtaatgaag gagaaaactc accgaggcag ttccatagga
2941 tggcaagatc ctggtatcgg tctgcgattc cgactcgtcc aacatcaata caacctatta
3001 atttcccctc gtcaaaaata aggttatcaa gtgagaaatc accatgagtg acgactgaat
3061 ccggtgagaa tggcaaaagt ttatgcattt ctttccagac ttgttcaaca ggccagccat
3121 tacgctcgtc atcaaaatca ctcgcatcaa ccaaaccgtt attcattcgt gattgcgcct
3181 gagcgagacg aaatacgcga tcgctgttaa aaggacaatt acaaacagga atcgaatgca
3241 accggcgcag gaacactgcc agcgcatcaa caatattttc acctgaatca ggatattctt
3301 ctaatacctg gaatgctgtt ttcccgggga tcgcagtggt gagtaaccat gcatcatcag
3361 gagtacggat aaaatgcttg atggtcggaa gaggcataaa ttccgtcagc cagtttagtc
3421 tgaccatctc atctgtaaca tcattggcaa cgctaccttt gccatgtttc agaaacaact
3481 ctggcgcatc gggcttccca tacaatcgat agattgtcgc acctgattgc ccgacattat
3541 cgcgagccca tttataccca tataaatcag catccatgtt ggaatttaat cgcggcctag
3601 agcaagacgt ttcccgttga atatggctca taacacccct tgtattactg tttatgtaag
3661 cagacagttt tattgttcat gaccaaaatc ccttaacgtg agttttcgtt ccactgagcg
3721 tcagaccccg tagaaaagat caaaggatct tcttgagatc ctttttttct gcgcgtaatc
3781 tgctgcttgc aaacaaaaaa accaccgcta ccagcggtgg tttgtttgcc ggatcaagag
3841 ctaccaactc tttttccgaa ggtaactggc ttcagcagag cgcagatacc aaatactgtc
3901 cttctagtgt agccgtagtt aggccaccac ttcaagaact ctgtagcacc gcctacatac
3961 ctcgctctgc taatcctgtt accagtggct gctgccagtg gcgataagtc gtgtcttacc
4021 gggttggact caagacgata gttaccggat aaggcgcagc ggtcgggctg aacggggggt
4081 tcgtgcacac agcccagctt ggagcgaacg acctacaccg aactgagata cctacagcgt
4141 gagctatgag aaagcgccac gcttcccgaa gggagaaagg cggacaggta tccggtaagc
4201 ggcagggtcg gaacaggaga gcgcacgagg gagcttccag ggggaaacgc ctggtatctt
4261 tatagtcctg tcgggtttcg ccacctctga cttgagcgtc gatttttgtg atgctcgtca
4321 ggggggcgga gcctatggaa aaacgccagc aacgcggcct ttttacggtt cctggccttt
4381 tgctggcctt ttgctcacat gttctttcct gcgttatccc ctgattctgt ggataaccgt
4441 attaccgcct ttgagtgagc tgataccgct cgccgcagcc gaacgaccga gcgcagcgag
4501 tcagtgagcg aggaagcgga agagcgcctg atgcggtatt ttctccttac gcatctgtgc
4561 ggtatttcac accgcatata tggtgcactc tcagtacaat ctgctctgat gccgcatagt
4621 taagccagta tacactccgc tatcgctacg tgactgggtc atggctgcgc cccgacaccc
4681 gccaacaccc gctgacgcgc cctgacgggc ttgtctgctc ccggcatccg cttacagaca
4741 agctgtgacc gtctccggga gctgcatgtg tcagaggttt tcaccgtcat caccgaaacg
4801 cgcgaggcag ctgcggtaaa gctcatcagc gtggtcgtga agcgattcac agatgtctgc
4861 ctgttcatcc gcgtccagct cgttgagttt ctccagaagc gttaatgtct ggcttctgat
4921 aaagcgggcc atgttaaggg cggttttttc ctgtttggtc actgatgcct ccgtgtaagg
4981 gggatttctg ttcatggggg taatgatacc gatgaaacga gagaggatgc tcacgatacg
5041 ggttactgat gatgaacatg cccggttact ggaacgttgt gagggtaaac aactggcggt
5101 atggatgcgg cgggaccaga gaaaaatcac tcagggtcaa tgccagcgct tcgttaatac
5161 agatgtaggt gttccacagg gtagccagca gcatcctgcg atgcagatcc ggaacataat
5221 ggtgcagggc gctgacttcc gcgtttccag actttacgaa acacggaaac cgaagaccat
5281 tcatgttgtt gctcaggtcg cagacgtttt gcagcagcag tcgcttcacg ttcgctcgcg
5341 tatcggtgat tcattctgct aaccagtaag gcaaccccgc cagcctagcc gggtcctcaa
5401 cgacaggagc acgatcatgc gcacccgtgg ggccgccatg ccggcgataa tggcctgctt
5461 ctcgccgaaa cgtttggtgg cgggaccagt gacgaaggct tgagcgaggg cgtgcaagat
5521 tccgaatacc gcaagcgaca ggccgatcat cgtcgcgctc cagcgaaagc ggtcctcgcc
5581 gaaaatgacc cagagcgctg ccggcacctg tcctacgagt tgcatgataa agaagacagt
5641 cataagtgcg gcgacgatag tcatgccccg cgcccaccgg aaggagctga ctgggttgaa
5701 ggctctcaag ggcatcggtc gagatcccgg tgcctaatga gtgagctaac ttacattaat
5761 tgcgttgcgc tcactgcccg ctttccagtc gggaaacctg tcgtgccagc tgcattaatg
5821 aatcggccaa cgcgcgggga gaggcggttt gcgtattggg cgccagggtg gtttttcttt
5881 tcaccagtga gacgggcaac agctgattgc ccttcaccgc ctggccctga gagagttgca
5941 gcaagcggtc cacgctggtt tgccccagca ggcgaaaatc ctgtttgatg gtggttaacg
6001 gcgggatata acatgagctg tcttcggtat cgtcgtatcc cactaccgag atatccgcac
6061 caacgcgcag cccggactcg gtaatggcgc gcattgcgcc cagcgccatc tgatcgttgg
6121 caaccagcat cgcagtggga acgatgccct cattcagcat ttgcatggtt tgttgaaaac
6181 cggacatggc actccagtcg ccttcccgtt ccgctatcgg ctgaatttga ttgcgagtga
6241 gatatttatg ccagccagcc agacgcagac gcgccgagac agaacttaat gggcccgcta
6301 acagcgcgat ttgctggtga cccaatgcga ccagatgctc cacgcccagt cgcgtaccgt
6361 cttcatggga gaaaataata ctgttgatgg gtgtctggtc agagacatca agaaataacg
6421 ccggaacatt agtgcaggca gcttccacag caatggcatc ctggtcatcc agcggatagt
6481 taatgatcag cccactgacg cgttgcgcga gaagattgtg caccgccgct ttacaggctt
6541 cgacgccgct tcgttctacc atcgacacca ccacgctggc acccagttga tcggcgcgag
6601 atttaatcgc cgcgacaatt tgcgacggcg cgtgcagggc cagactggag gtggcaacgc
6661 caatcagcaa cgactgtttg cccgccagtt gttgtgccac gcggttggga atgtaattca
6721 gctccgccat cgccgcttcc actttttccc gcgttttcgc agaaacgtgg ctggcctggt
6781 tcaccacgcg ggaaacggtc tgataagaga caccggcata ctctgcgaca tcgtataacg
6841 ttactggttt cacattcacc accctgaatt gactctcttc cgggcgctat catgccatac
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6961 tcctgcatta ggaagcagcc cagtagtagg ttgaggccgt tgagcaccgc cgccgcaagg
7021 aatggtgcat gcaaggagat ggcgcccaac agtcccccgg ccacggggcc tgccaccata
7081 cccacgccga aacaagcgc
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P4351/pECMV-3×FLAG-DECR2人源基因质粒 |
| P4352/pECMV-3×FLAG-DHRS1人源基因质粒 |
| P4353/pECMV-3×FLAG-EIF2S2人源基因质粒 |
| P4354/pECMV-3×FLAG-EMC2人源基因质粒 |
| P4355/pECMV-3×FLAG-ERP27人源基因质粒 |
| P4356/pECMV-3×FLAG-FAM118B人源基因质粒 |
| P4357/pECMV-3×FLAG-FKBPL人源基因质粒 |
| P4358/pECMV-3×FLAG-FOXA3人源基因质粒 |
| P4359/pECMV-3×FLAG-GNB1L人源基因质粒 |
| P4360/pECMV-3×FLAG-TSGA13人源基因质粒 |
| P4361/pECMV-3×FLAG-PEF1(1同义突变）人源基因质粒 |
| P4362/pECMV-3×FLAG-ZBED6CL人源基因质粒 |
| P4363/pCDNA3.1-HA-STAT2-p-Myc人源基因质粒 |
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