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- 2026年01月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
R3;CD1A
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pT7-His-CD1D人源基因质粒
别称: R3;CD1A
复制子: pBR322
原核抗性: Kan
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：大肠杆菌
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Kan
真核抗性：
荧光蛋白：
质粒简介
pT7-His-CD1D是一个人源基因大肠表达质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 6289 bp ds-DNA circular SYN 30-九月-2017
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6289
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
promoter 141..159
/note="T7 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
protein_bind 160..184
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
CDS 240..257
/codon_start=1
/product="6xHis affinity tag"
/note="6xHis"
/translation="HHHHHH"
CDS 276..1283
/codon_start=1
/note="CD1D"
/translation="MGCLLFLLLWALLQAWGSAEVPQRLFPLRCLQISSFANSSWTRTD
GLAWLGELQTHSWSNDSDTVRSLKPWSQGTFSDQQWETLQHIFRVYRSSFTRDVKEFAK
MLRLSYPLELQVSAGCEVHPGNASNNFFHVAFQGKDILSFQGTSWEPTQEAPLWVNLAI
QVLNQDKWTRETVQWLLNGTC-PQFVSGLLESGKSELKKQVKPKAWLSRGPSPGPGRLLL
VCHVSGFYPKPVWVKWMRGEQEQQGTQPGDILPNADETWYLRATLDVVAGEAAGLSCRV
KHSSLEGQDIVLYWGGSYTSMGLIALAVLACLLFLLIVGFTSRFKRQTSYQGVL"
CDS 1290..1307
/codon_start=1
/product="6xHis affinity tag"
/note="6xHis"
/translation="HHHHHH"
terminator 1374..1421
/note="T7 terminator"
/note="transcription terminator for bacteriophage T7 RNA
polymerase"
rep_origin 1458..1913
/direction=RIGHT
/note="f1 ori"
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
CDS complement(2006..2821)
/codon_start=1
/gene="aph(3')-Ia"
/product="aminoglycoside phosphotransferase"
/note="KanR"
/note="confers resistance to kanamycin"
/translation="MSHIQRETSCSRPRLNSNMDADLYGYKWARDNVGQSGATIYRLYG
KPDAPELFLKHGKGSVANDVTDEMVRLNWLTEFMPLPTIKHFIRTPDDAWLLTTAIPGK
TAFQVLEEYPDSGENIVDALAVFLRRLHSIPVCNCPFNSDRVFRLAQAQSRMNNGLVDA
SDFDDERNGWPVEQVWKEMHKLLPFSPDSVVTHGDFSLDNLIFDEGKLIGCIDVGRVGI
ADRYQDLAILWNCLGEFSPSLQKRLFQKYGIDNPDMNKLQFHLMLDEFF"
rep_origin 2943..3531
/direction=RIGHT
/note="ori"
/note="high-copy-number colE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(3961..4152)
/codon_start=1
/gene="rop"
/product="Rop protein"
/note="rop"
/translation="MTKQEKTALNMARFIRSQTLTLLEKLNELDADEQADICESLHDHA
DELYRSCLARFGDDGENL"
CDS complement(4961..6043)
/codon_start=1
/gene="lacI"
/product="lac repressor"
/note="lacI"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
/translation="MKPVTLYDVAEYAGVSYQTVSRVVNQASHVSAKTREKVEAAMAEL
NYIPNRVAQQLAGKQSLLIGVATSSLALHAPSQIVAAIKSRADQLGASVVVSMVERSGV
EACKAAVHNLLAQRVSGLIINYPLDDQDAIAVEAACTNVPALFLDVSDQTPINSIIFSH
EDGTRLGVEHLVALGHQQIALLAGPLSSVSARLRLAGWHKYLTRNQIQPIAEREGDWSA
MSGFQQTMQMLNEGIVPTAMLVANDQMALGAMRAITESGLRVGADISVVGYDDTEDSSC
YIPPLTTIKQDFRLLGQTSVDRLLQLSQGQAVKGNQLLPVSLVKRKTTLAPNTQTASPR
ALADSLMQLARQVSRLESGQ"
promoter complement(6044..6121)
/gene="lacI"
/note="lacI promoter"
ORIGIN
1 tcatgagccc gaagtggcga gcccgatctt ccccatcggt gatgtcggcg atataggcgc
61 cagcaaccgc acctgtggcg ccggtgatgc cggccacgat gcgtccggcg tagaggatcg
121 agatctcgat cccgcgaaat taatacgact cactataggg gaattgtgag cggataacaa
181 ttcccctcta gaaataattt tgtttaactt taagaaggag atataccatg ggcagcagcc
241 atcatcatca tcatcacagc agcggccgcg gatccatggg gtgcctgctg tttctgctgc
301 tctgggcgct cctccaggct tggggaagcg ctgaagtccc gcaaaggctt ttccccctcc
361 gctgcctcca gatctcgtcc ttcgccaata gcagctggac gcgcaccgac ggcttggcgt
421 ggctggggga gctgcagacg cacagctgga gcaacgactc ggacaccgtc cgctctctga
481 agccttggtc ccagggcacg ttcagcgacc agcagtggga gacgctgcag catatatttc
541 gggtttatcg aagcagcttc accagggacg tgaaggaatt cgccaaaatg ctacgcttat
601 cctatccctt ggagctccag gtgtccgctg gctgtgaggt gcaccctggg aacgcctcaa
661 ataacttctt ccatgtagca tttcaaggaa aagatatcct gagtttccaa ggaacttctt
721 gggagccaac ccaagaggcc ccactttggg taaacttggc cattcaagtg ctcaaccagg
781 acaagtggac gagggaaaca gtgcagtggc tccttaatgg cacctgcccc caatttgtca
841 gtggcctcct tgagtcaggg aagtcggaac tgaagaagca agtgaagccc aaggcctggc
901 tgtcccgtgg ccccagtcct ggccctggcc gtctgctgct ggtgtgccat gtctcaggat
961 tctacccaaa gcctgtatgg gtgaagtgga tgcggggtga gcaggagcag cagggcactc
1021 agccagggga catcctgccc aatgctgacg agacatggta tctccgagca accctggatg
1081 tggtggctgg ggaggcagct ggcctgtcct gtcgggtgaa gcacagcagt ctagagggcc
1141 aggacatcgt cctctactgg ggtgggagct acacctccat gggcttgatt gccttggcag
1201 tcctggcgtg cttgctgttc ctcctcattg tgggctttac ctcccggttt aagaggcaaa
1261 cttcctatca gggcgtcctg tgactcgagc accaccacca ccaccactga gatccggctg
1321 ctaacaaagc ccgaaaggaa gctgagttgg ctgctgccac cgctgagcaa taactagcat
1381 aaccccttgg ggcctctaaa cgggtcttga ggggtttttt gctgaaagga ggaactatat
1441 ccggattggc gaatgggacg cgccctgtag cggcgcatta agcgcggcgg gtgtggtggt
1501 tacgcgcagc gtgaccgcta cacttgccag cgccctagcg cccgctcctt tcgctttctt
1561 cccttccttt ctcgccacgt tcgccggctt tccccgtcaa gctctaaatc gggggctccc
1621 tttagggttc cgatttagtg ctttacggca cctcgacccc aaaaaacttg attagggtga
1681 tggttcacgt agtgggccat cgccctgata gacggttttt cgccctttga cgttggagtc
1741 cacgttcttt aatagtggac tcttgttcca aactggaaca acactcaacc ctatctcggt
1801 ctattctttt gatttataag ggattttgcc gatttcggcc tattggttaa aaaatgagct
1861 gatttaacaa aaatttaacg cgaattttaa caaaatatta acgtttacaa tttcaggtgg
1921 cacttttcgg ggaaatgtgc gcggaacccc tatttgttta tttttctaaa tacattcaaa
1981 tatgtatccg ctcatgaatt aattcttaga aaaactcatc gagcatcaaa tgaaactgca
2041 atttattcat atcaggatta tcaataccat atttttgaaa aagccgtttc tgtaatgaag
2101 gagaaaactc accgaggcag ttccatagga tggcaagatc ctggtatcgg tctgcgattc
2161 cgactcgtcc aacatcaata caacctatta atttcccctc gtcaaaaata aggttatcaa
2221 gtgagaaatc accatgagtg acgactgaat ccggtgagaa tggcaaaagt ttatgcattt
2281 ctttccagac ttgttcaaca ggccagccat tacgctcgtc atcaaaatca ctcgcatcaa
2341 ccaaaccgtt attcattcgt gattgcgcct gagcgagacg aaatacgcga tcgctgttaa
2401 aaggacaatt acaaacagga atcgaatgca accggcgcag gaacactgcc agcgcatcaa
2461 caatattttc acctgaatca ggatattctt ctaatacctg gaatgctgtt ttcccgggga
2521 tcgcagtggt gagtaaccat gcatcatcag gagtacggat aaaatgcttg atggtcggaa
2581 gaggcataaa ttccgtcagc cagtttagtc tgaccatctc atctgtaaca tcattggcaa
2641 cgctaccttt gccatgtttc agaaacaact ctggcgcatc gggcttccca tacaatcgat
2701 agattgtcgc acctgattgc ccgacattat cgcgagccca tttataccca tataaatcag
2761 catccatgtt ggaatttaat cgcggcctag agcaagacgt ttcccgttga atatggctca
2821 taacacccct tgtattactg tttatgtaag cagacagttt tattgttcat gaccaaaatc
2881 ccttaacgtg agttttcgtt ccactgagcg tcagaccccg tagaaaagat caaaggatct
2941 tcttgagatc ctttttttct gcgcgtaatc tgctgcttgc aaacaaaaaa accaccgcta
3001 ccagcggtgg tttgtttgcc ggatcaagag ctaccaactc tttttccgaa ggtaactggc
3061 ttcagcagag cgcagatacc aaatactgtc cttctagtgt agccgtagtt aggccaccac
3121 ttcaagaact ctgtagcacc gcctacatac ctcgctctgc taatcctgtt accagtggct
3181 gctgccagtg gcgataagtc gtgtcttacc gggttggact caagacgata gttaccggat
3241 aaggcgcagc ggtcgggctg aacggggggt tcgtgcacac agcccagctt ggagcgaacg
3301 acctacaccg aactgagata cctacagcgt gagctatgag aaagcgccac gcttcccgaa
3361 gggagaaagg cggacaggta tccggtaagc ggcagggtcg gaacaggaga gcgcacgagg
3421 gagcttccag ggggaaacgc ctggtatctt tatagtcctg tcgggtttcg ccacctctga
3481 cttgagcgtc gatttttgtg atgctcgtca ggggggcgga gcctatggaa aaacgccagc
3541 aacgcggcct ttttacggtt cctggccttt tgctggcctt ttgctcacat gttctttcct
3601 gcgttatccc ctgattctgt ggataaccgt attaccgcct ttgagtgagc tgataccgct
3661 cgccgcagcc gaacgaccga gcgcagcgag tcagtgagcg aggaagcgga agagcgcctg
3721 atgcggtatt ttctccttac gcatctgtgc ggtatttcac accgcatata tggtgcactc
3781 tcagtacaat ctgctctgat gccgcatagt taagccagta tacactccgc tatcgctacg
3841 tgactgggtc atggctgcgc cccgacaccc gccaacaccc gctgacgcgc cctgacgggc
3901 ttgtctgctc ccggcatccg cttacagaca agctgtgacc gtctccggga gctgcatgtg
3961 tcagaggttt tcaccgtcat caccgaaacg cgcgaggcag ctgcggtaaa gctcatcagc
4021 gtggtcgtga agcgattcac agatgtctgc ctgttcatcc gcgtccagct cgttgagttt
4081 ctccagaagc gttaatgtct ggcttctgat aaagcgggcc atgttaaggg cggttttttc
4141 ctgtttggtc actgatgcct ccgtgtaagg gggatttctg ttcatggggg taatgatacc
4201 gatgaaacga gagaggatgc tcacgatacg ggttactgat gatgaacatg cccggttact
4261 ggaacgttgt gagggtaaac aactggcggt atggatgcgg cgggaccaga gaaaaatcac
4321 tcagggtcaa tgccagcgct tcgttaatac agatgtaggt gttccacagg gtagccagca
4381 gcatcctgcg atgcagatcc ggaacataat ggtgcagggc gctgacttcc gcgtttccag
4441 actttacgaa acacggaaac cgaagaccat tcatgttgtt gctcaggtcg cagacgtttt
4501 gcagcagcag tcgcttcacg ttcgctcgcg tatcggtgat tcattctgct aaccagtaag
4561 gcaaccccgc cagcctagcc gggtcctcaa cgacaggagc acgatcatgc gcacccgtgg
4621 ggccgccatg ccggcgataa tggcctgctt ctcgccgaaa cgtttggtgg cgggaccagt
4681 gacgaaggct tgagcgaggg cgtgcaagat tccgaatacc gcaagcgaca ggccgatcat
4741 cgtcgcgctc cagcgaaagc ggtcctcgcc gaaaatgacc cagagcgctg ccggcacctg
4801 tcctacgagt tgcatgataa agaagacagt cataagtgcg gcgacgatag tcatgccccg
4861 cgcccaccgg aaggagctga ctgggttgaa ggctctcaag ggcatcggtc gagatcccgg
4921 tgcctaatga gtgagctaac ttacattaat tgcgttgcgc tcactgcccg ctttccagtc
4981 gggaaacctg tcgtgccagc tgcattaatg aatcggccaa cgcgcgggga gaggcggttt
5041 gcgtattggg cgccagggtg gtttttcttt tcaccagtga gacgggcaac agctgattgc
5101 ccttcaccgc ctggccctga gagagttgca gcaagcggtc cacgctggtt tgccccagca
5161 ggcgaaaatc ctgtttgatg gtggttaacg gcgggatata acatgagctg tcttcggtat
5221 cgtcgtatcc cactaccgag atatccgcac caacgcgcag cccggactcg gtaatggcgc
5281 gcattgcgcc cagcgccatc tgatcgttgg caaccagcat cgcagtggga acgatgccct
5341 cattcagcat ttgcatggtt tgttgaaaac cggacatggc actccagtcg ccttcccgtt
5401 ccgctatcgg ctgaatttga ttgcgagtga gatatttatg ccagccagcc agacgcagac
5461 gcgccgagac agaacttaat gggcccgcta acagcgcgat ttgctggtga cccaatgcga
5521 ccagatgctc cacgcccagt cgcgtaccgt cttcatggga gaaaataata ctgttgatgg
5581 gtgtctggtc agagacatca agaaataacg ccggaacatt agtgcaggca gcttccacag
5641 caatggcatc ctggtcatcc agcggatagt taatgatcag cccactgacg cgttgcgcga
5701 gaagattgtg caccgccgct ttacaggctt cgacgccgct tcgttctacc atcgacacca
5761 ccacgctggc acccagttga tcggcgcgag atttaatcgc cgcgacaatt tgcgacggcg
5821 cgtgcagggc cagactggag gtggcaacgc caatcagcaa cgactgtttg cccgccagtt
5881 gttgtgccac gcggttggga atgtaattca gctccgccat cgccgcttcc actttttccc
5941 gcgttttcgc agaaacgtgg ctggcctggt tcaccacgcg ggaaacggtc tgataagaga
6001 caccggcata ctctgcgaca tcgtataacg ttactggttt cacattcacc accctgaatt
6061 gactctcttc cgggcgctat catgccatac cgcgaaaggt tttgcgccat tcgatggtgt
6121 ccgggatctc gacgctctcc cttatgcgac tcctgcatta ggaagcagcc cagtagtagg
6181 ttgaggccgt tgagcaccgc cgccgcaagg aatggtgcat gcaaggagat ggcgcccaac
6241 agtcccccgg ccacggggcc tgccaccata cccacgccga aacaagcgc
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pT7-His-CD1D人源基因质粒
别称: R3;CD1A
| 启动子: | T7 |
|---|
原核抗性: Kan
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：大肠杆菌
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Kan
真核抗性：
荧光蛋白：
质粒简介
pT7-His-CD1D是一个人源基因大肠表达质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 6289 bp ds-DNA circular SYN 30-九月-2017
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6289
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
promoter 141..159
/note="T7 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
protein_bind 160..184
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
CDS 240..257
/codon_start=1
/product="6xHis affinity tag"
/note="6xHis"
/translation="HHHHHH"
CDS 276..1283
/codon_start=1
/note="CD1D"
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GLAWLGELQTHSWSNDSDTVRSLKPWSQGTFSDQQWETLQHIFRVYRSSFTRDVKEFAK
MLRLSYPLELQVSAGCEVHPGNASNNFFHVAFQGKDILSFQGTSWEPTQEAPLWVNLAI
QVLNQDKWTRETVQWLLNGTC-PQFVSGLLESGKSELKKQVKPKAWLSRGPSPGPGRLLL
VCHVSGFYPKPVWVKWMRGEQEQQGTQPGDILPNADETWYLRATLDVVAGEAAGLSCRV
KHSSLEGQDIVLYWGGSYTSMGLIALAVLACLLFLLIVGFTSRFKRQTSYQGVL"
CDS 1290..1307
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polymerase"
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indicates direction of (+) strand synthesis"
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/codon_start=1
/gene="aph(3')-Ia"
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/note="KanR"
/note="confers resistance to kanamycin"
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ADRYQDLAILWNCLGEFSPSLQKRLFQKYGIDNPDMNKLQFHLMLDEFF"
rep_origin 2943..3531
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replication"
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/gene="lacI"
/product="lac repressor"
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inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
/translation="MKPVTLYDVAEYAGVSYQTVSRVVNQASHVSAKTREKVEAAMAEL
NYIPNRVAQQLAGKQSLLIGVATSSLALHAPSQIVAAIKSRADQLGASVVVSMVERSGV
EACKAAVHNLLAQRVSGLIINYPLDDQDAIAVEAACTNVPALFLDVSDQTPINSIIFSH
EDGTRLGVEHLVALGHQQIALLAGPLSSVSARLRLAGWHKYLTRNQIQPIAEREGDWSA
MSGFQQTMQMLNEGIVPTAMLVANDQMALGAMRAITESGLRVGADISVVGYDDTEDSSC
YIPPLTTIKQDFRLLGQTSVDRLLQLSQGQAVKGNQLLPVSLVKRKTTLAPNTQTASPR
ALADSLMQLARQVSRLESGQ"
promoter complement(6044..6121)
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ORIGIN
1 tcatgagccc gaagtggcga gcccgatctt ccccatcggt gatgtcggcg atataggcgc
61 cagcaaccgc acctgtggcg ccggtgatgc cggccacgat gcgtccggcg tagaggatcg
121 agatctcgat cccgcgaaat taatacgact cactataggg gaattgtgag cggataacaa
181 ttcccctcta gaaataattt tgtttaactt taagaaggag atataccatg ggcagcagcc
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301 tctgggcgct cctccaggct tggggaagcg ctgaagtccc gcaaaggctt ttccccctcc
361 gctgcctcca gatctcgtcc ttcgccaata gcagctggac gcgcaccgac ggcttggcgt
421 ggctggggga gctgcagacg cacagctgga gcaacgactc ggacaccgtc cgctctctga
481 agccttggtc ccagggcacg ttcagcgacc agcagtggga gacgctgcag catatatttc
541 gggtttatcg aagcagcttc accagggacg tgaaggaatt cgccaaaatg ctacgcttat
601 cctatccctt ggagctccag gtgtccgctg gctgtgaggt gcaccctggg aacgcctcaa
661 ataacttctt ccatgtagca tttcaaggaa aagatatcct gagtttccaa ggaacttctt
721 gggagccaac ccaagaggcc ccactttggg taaacttggc cattcaagtg ctcaaccagg
781 acaagtggac gagggaaaca gtgcagtggc tccttaatgg cacctgcccc caatttgtca
841 gtggcctcct tgagtcaggg aagtcggaac tgaagaagca agtgaagccc aaggcctggc
901 tgtcccgtgg ccccagtcct ggccctggcc gtctgctgct ggtgtgccat gtctcaggat
961 tctacccaaa gcctgtatgg gtgaagtgga tgcggggtga gcaggagcag cagggcactc
1021 agccagggga catcctgccc aatgctgacg agacatggta tctccgagca accctggatg
1081 tggtggctgg ggaggcagct ggcctgtcct gtcgggtgaa gcacagcagt ctagagggcc
1141 aggacatcgt cctctactgg ggtgggagct acacctccat gggcttgatt gccttggcag
1201 tcctggcgtg cttgctgttc ctcctcattg tgggctttac ctcccggttt aagaggcaaa
1261 cttcctatca gggcgtcctg tgactcgagc accaccacca ccaccactga gatccggctg
1321 ctaacaaagc ccgaaaggaa gctgagttgg ctgctgccac cgctgagcaa taactagcat
1381 aaccccttgg ggcctctaaa cgggtcttga ggggtttttt gctgaaagga ggaactatat
1441 ccggattggc gaatgggacg cgccctgtag cggcgcatta agcgcggcgg gtgtggtggt
1501 tacgcgcagc gtgaccgcta cacttgccag cgccctagcg cccgctcctt tcgctttctt
1561 cccttccttt ctcgccacgt tcgccggctt tccccgtcaa gctctaaatc gggggctccc
1621 tttagggttc cgatttagtg ctttacggca cctcgacccc aaaaaacttg attagggtga
1681 tggttcacgt agtgggccat cgccctgata gacggttttt cgccctttga cgttggagtc
1741 cacgttcttt aatagtggac tcttgttcca aactggaaca acactcaacc ctatctcggt
1801 ctattctttt gatttataag ggattttgcc gatttcggcc tattggttaa aaaatgagct
1861 gatttaacaa aaatttaacg cgaattttaa caaaatatta acgtttacaa tttcaggtgg
1921 cacttttcgg ggaaatgtgc gcggaacccc tatttgttta tttttctaaa tacattcaaa
1981 tatgtatccg ctcatgaatt aattcttaga aaaactcatc gagcatcaaa tgaaactgca
2041 atttattcat atcaggatta tcaataccat atttttgaaa aagccgtttc tgtaatgaag
2101 gagaaaactc accgaggcag ttccatagga tggcaagatc ctggtatcgg tctgcgattc
2161 cgactcgtcc aacatcaata caacctatta atttcccctc gtcaaaaata aggttatcaa
2221 gtgagaaatc accatgagtg acgactgaat ccggtgagaa tggcaaaagt ttatgcattt
2281 ctttccagac ttgttcaaca ggccagccat tacgctcgtc atcaaaatca ctcgcatcaa
2341 ccaaaccgtt attcattcgt gattgcgcct gagcgagacg aaatacgcga tcgctgttaa
2401 aaggacaatt acaaacagga atcgaatgca accggcgcag gaacactgcc agcgcatcaa
2461 caatattttc acctgaatca ggatattctt ctaatacctg gaatgctgtt ttcccgggga
2521 tcgcagtggt gagtaaccat gcatcatcag gagtacggat aaaatgcttg atggtcggaa
2581 gaggcataaa ttccgtcagc cagtttagtc tgaccatctc atctgtaaca tcattggcaa
2641 cgctaccttt gccatgtttc agaaacaact ctggcgcatc gggcttccca tacaatcgat
2701 agattgtcgc acctgattgc ccgacattat cgcgagccca tttataccca tataaatcag
2761 catccatgtt ggaatttaat cgcggcctag agcaagacgt ttcccgttga atatggctca
2821 taacacccct tgtattactg tttatgtaag cagacagttt tattgttcat gaccaaaatc
2881 ccttaacgtg agttttcgtt ccactgagcg tcagaccccg tagaaaagat caaaggatct
2941 tcttgagatc ctttttttct gcgcgtaatc tgctgcttgc aaacaaaaaa accaccgcta
3001 ccagcggtgg tttgtttgcc ggatcaagag ctaccaactc tttttccgaa ggtaactggc
3061 ttcagcagag cgcagatacc aaatactgtc cttctagtgt agccgtagtt aggccaccac
3121 ttcaagaact ctgtagcacc gcctacatac ctcgctctgc taatcctgtt accagtggct
3181 gctgccagtg gcgataagtc gtgtcttacc gggttggact caagacgata gttaccggat
3241 aaggcgcagc ggtcgggctg aacggggggt tcgtgcacac agcccagctt ggagcgaacg
3301 acctacaccg aactgagata cctacagcgt gagctatgag aaagcgccac gcttcccgaa
3361 gggagaaagg cggacaggta tccggtaagc ggcagggtcg gaacaggaga gcgcacgagg
3421 gagcttccag ggggaaacgc ctggtatctt tatagtcctg tcgggtttcg ccacctctga
3481 cttgagcgtc gatttttgtg atgctcgtca ggggggcgga gcctatggaa aaacgccagc
3541 aacgcggcct ttttacggtt cctggccttt tgctggcctt ttgctcacat gttctttcct
3601 gcgttatccc ctgattctgt ggataaccgt attaccgcct ttgagtgagc tgataccgct
3661 cgccgcagcc gaacgaccga gcgcagcgag tcagtgagcg aggaagcgga agagcgcctg
3721 atgcggtatt ttctccttac gcatctgtgc ggtatttcac accgcatata tggtgcactc
3781 tcagtacaat ctgctctgat gccgcatagt taagccagta tacactccgc tatcgctacg
3841 tgactgggtc atggctgcgc cccgacaccc gccaacaccc gctgacgcgc cctgacgggc
3901 ttgtctgctc ccggcatccg cttacagaca agctgtgacc gtctccggga gctgcatgtg
3961 tcagaggttt tcaccgtcat caccgaaacg cgcgaggcag ctgcggtaaa gctcatcagc
4021 gtggtcgtga agcgattcac agatgtctgc ctgttcatcc gcgtccagct cgttgagttt
4081 ctccagaagc gttaatgtct ggcttctgat aaagcgggcc atgttaaggg cggttttttc
4141 ctgtttggtc actgatgcct ccgtgtaagg gggatttctg ttcatggggg taatgatacc
4201 gatgaaacga gagaggatgc tcacgatacg ggttactgat gatgaacatg cccggttact
4261 ggaacgttgt gagggtaaac aactggcggt atggatgcgg cgggaccaga gaaaaatcac
4321 tcagggtcaa tgccagcgct tcgttaatac agatgtaggt gttccacagg gtagccagca
4381 gcatcctgcg atgcagatcc ggaacataat ggtgcagggc gctgacttcc gcgtttccag
4441 actttacgaa acacggaaac cgaagaccat tcatgttgtt gctcaggtcg cagacgtttt
4501 gcagcagcag tcgcttcacg ttcgctcgcg tatcggtgat tcattctgct aaccagtaag
4561 gcaaccccgc cagcctagcc gggtcctcaa cgacaggagc acgatcatgc gcacccgtgg
4621 ggccgccatg ccggcgataa tggcctgctt ctcgccgaaa cgtttggtgg cgggaccagt
4681 gacgaaggct tgagcgaggg cgtgcaagat tccgaatacc gcaagcgaca ggccgatcat
4741 cgtcgcgctc cagcgaaagc ggtcctcgcc gaaaatgacc cagagcgctg ccggcacctg
4801 tcctacgagt tgcatgataa agaagacagt cataagtgcg gcgacgatag tcatgccccg
4861 cgcccaccgg aaggagctga ctgggttgaa ggctctcaag ggcatcggtc gagatcccgg
4921 tgcctaatga gtgagctaac ttacattaat tgcgttgcgc tcactgcccg ctttccagtc
4981 gggaaacctg tcgtgccagc tgcattaatg aatcggccaa cgcgcgggga gaggcggttt
5041 gcgtattggg cgccagggtg gtttttcttt tcaccagtga gacgggcaac agctgattgc
5101 ccttcaccgc ctggccctga gagagttgca gcaagcggtc cacgctggtt tgccccagca
5161 ggcgaaaatc ctgtttgatg gtggttaacg gcgggatata acatgagctg tcttcggtat
5221 cgtcgtatcc cactaccgag atatccgcac caacgcgcag cccggactcg gtaatggcgc
5281 gcattgcgcc cagcgccatc tgatcgttgg caaccagcat cgcagtggga acgatgccct
5341 cattcagcat ttgcatggtt tgttgaaaac cggacatggc actccagtcg ccttcccgtt
5401 ccgctatcgg ctgaatttga ttgcgagtga gatatttatg ccagccagcc agacgcagac
5461 gcgccgagac agaacttaat gggcccgcta acagcgcgat ttgctggtga cccaatgcga
5521 ccagatgctc cacgcccagt cgcgtaccgt cttcatggga gaaaataata ctgttgatgg
5581 gtgtctggtc agagacatca agaaataacg ccggaacatt agtgcaggca gcttccacag
5641 caatggcatc ctggtcatcc agcggatagt taatgatcag cccactgacg cgttgcgcga
5701 gaagattgtg caccgccgct ttacaggctt cgacgccgct tcgttctacc atcgacacca
5761 ccacgctggc acccagttga tcggcgcgag atttaatcgc cgcgacaatt tgcgacggcg
5821 cgtgcagggc cagactggag gtggcaacgc caatcagcaa cgactgtttg cccgccagtt
5881 gttgtgccac gcggttggga atgtaattca gctccgccat cgccgcttcc actttttccc
5941 gcgttttcgc agaaacgtgg ctggcctggt tcaccacgcg ggaaacggtc tgataagaga
6001 caccggcata ctctgcgaca tcgtataacg ttactggttt cacattcacc accctgaatt
6061 gactctcttc cgggcgctat catgccatac cgcgaaaggt tttgcgccat tcgatggtgt
6121 ccgggatctc gacgctctcc cttatgcgac tcctgcatta ggaagcagcc cagtagtagg
6181 ttgaggccgt tgagcaccgc cgccgcaagg aatggtgcat gcaaggagat ggcgcccaac
6241 agtcccccgg ccacggggcc tgccaccata cccacgccga aacaagcgc
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P4165/pECMV-3×FLAG-ATG7人源基因质粒 |
| P4166/pECMV-3×FLAG-ARAF人源基因质粒 |
| P4167/pECMV-3×FLAG-C5AR1人源基因质粒 |
| P4168/pECMV-3×FLAG-HAX1（1同义突变）人源基因质粒 |
| P4169/pECMV-3×FLAG-NRBP1人源基因质粒 |
| P4170/pECMV-3×FLAG-HDAC11人源基因质粒 |
| P4171/pECMV-3×FLAG-WBP11人源基因质粒 |
| P4172/pECMV-3×FLAG-STAT1人源基因质粒 |
| P4173/pECMV-3×FLAG-USHBP1（1同义突变）人源基因质粒 |
| P4174/pECMV-3×FLAG-INKA2（2同义突变）人源基因质粒 |
| P4175/pECMV-3×FLAG-PFKM人源基因质粒 |
| P4176/pECMV-3×FLAG-PIAS3人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
shinesnowing 想构建一个能通过接合作用进入野生型弧菌并在其中表达外源基因的质粒，现在找到一个名为pBOR8的质粒，只有质粒简图，没找到全序列，质粒上的元件为ori R6K、mob RP4、Ap、lacIq，如下图: 现有两个问题想请教各位高人 （1）该质粒能否直接作为表达载体，将外源基因克隆到该质粒上，如果可以通常外源基因应该克隆到哪个位点？ （2）如果不能直接进行外源基因克隆和表达，那么应该
分，一是未稳定整合的，一是稳定整合的，所以开始时亮度要高。 2.为什么筛选后单克隆无荧光：首先，经过G418筛选，外源质粒不能整合入染色体的细胞死亡；其次，稳定整合的细胞外源质粒整合的位置存在位置效应，即整合于不利于外源基因表达的位置，从而使外源基因沉默；第三，我不知道你的质粒中是否加入了核糖体进入位点序列，如果有的话，研究显示该位点前后的基因表达水平存在不同，可以查查相关文献 3.有无好的办法：我认为没有，稳定转染筛选时有运气的成分，假如外源质粒恰好整合到了利于表达的染色体部位，这时筛
一、实验目的 学习和掌握外源基因导入真核细胞的主要方法——脂质体介导的转染。了解外源基因进入的一般性方法，观测外源蛋白的表达（绿色荧光蛋白），为染色准备实验材料。 二、实验原理 上图所示是脂质体介导转染的示意图，它显示了外源质粒进入细胞的一般过程。 外源基因进入细胞主要有四种方法：电击法、磷酸钙法和脂质体介导法和病毒介导法。电击法是在细胞上短时间暂时性的穿孔让外源质粒进入；磷酸钙法和脂质体法是利用不同的载体物质携带质粒通过直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因进入
pT7-His-CD1D人源基因质粒
￥100 - 1000
