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- Xybio
- 上海
- P2937
- 2026年01月13日
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![pGL4.84[hRlucCP Puro]哺乳报告质粒](https://img1.dxycdn.com/2021/1019/673/0422386278475230153-14.jpg!wh200)
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
BC126898.1;KIAA1063
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：pCR-BluntII-TOPO-USP22人源基因质粒
别称: BC126898.1;KIAA1063
复制子: pUC
原核抗性: Kan
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：大肠杆菌
载体用途：PCR模板
基因种属：人
基因类型：cDNA
原核抗性：Kan
真核抗性：
荧光蛋白：
质粒简介
pCR-BluntII-TOPO-USP22人源基因质粒。
质粒图谱
质粒序列
1 atggcgccgg gttggccctc actatcagcg ggctcccgac aggaggcgcc ccagcttgcg
61 gccgggggca gcgcctacca ggcagttggc aggcagttcc agccccgggc cacggcactg
121 cagggcccga gccaggccaa gtcctgtatc tgccatgtct gtggcgtcca cctcaacagg
181 ctgcattcct gcctctactg tgtcttcttc ggctgtttaa caaagaagca tattcacgag
241 catgcgaagg cgaagcggca caacctggcc attgatctga tgtatggagg catctactgt
301 tttctgtgcc aggactacat ctatgacaaa gacatggaaa taatcgccaa ggaggagcag
361 cgaaaagctt ggaaaatgca aggcgttgga gagaagtttt caacttggga accaaccaaa
421 cgggagcttg aactgctgaa gcacaacccg aaaaggagaa agatcacctc gaactgcacc
481 ataggtctgc gtgggctgat caaccttggg aacacatgct tcatgaactg catcgtgcag
541 gccctgaccc acacgccact tctgcgggac ttcttcctgt ctgacaggca ccgctgtgag
601 atgcagagcc ccagctcctg tctggtctgt gagatgtcct cactgtttca ggagttttac
661 tctggacacc ggtcccctca catcccgtat aagttgctgc acctggtgtg gacccacgcg
721 aggcacctag caggctacga gcagcaggac gcccacgagt tcctcatcgc ggccctggac
781 gtgctccacc gacactgcaa aggtgatgac aatgggaaga aggccaacaa ccccaaccac
841 tgcaactgca tcatagacca gatcttcaca ggcgggttgc agtcagacgt cacctgccaa
901 gtctgccatg gagtctccac caccatcgac cccttctggg acatcagctt ggatctcccc
961 ggctcttcca ccccattctg gcccctgagc ccagggagcg agggcaacgt ggtaaacggg
1021 gaaagccacg tgtcgggaac caccacgctc acggactgcc tgcgacgatt caccagacca
1081 gagcacttgg gcagcagcgc caagatcaag tgcagcggtt gccatagcta ccaggagtcc
1141 acaaagcagc tcactatgaa gaaactgccc atcgtagcct gttttcatct caaacgattt
1201 gaacactcag ccaagctgcg gcggaagatc accacgtatg tgtccttccc cctggagctg
1261 gacatgaccc ctttcatggc ctccagcaaa gagagcagga tgaatggaca gtaccagcag
1321 cccacggaca gtctcaacaa tgacaacaag tattccctgt ttgctgttgt taaccatcaa
1381 gggaccttgg agagtggcca ctacaccagc tttatccggc agcacaaaga ccagtggttc
1441 aagtgtgacg atgccatcat caccaaggcc agcatcaagg acgtcctgga cagcgaaggg
1501 tacttgctgt tctatcacaa acagttcctg gaatacgagt ag
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P3805/pCMV-SPORT6-SRD5A1（1同义突变）人源基因质粒 |
| P3806/pCMV-SPORT6-ZNF85人源基因质粒 |
| P3807/pCMV-SPORT6-SFRP2（1点突变1同义突变）人源基因质粒 |
| P3808/pCMV-SPORT6-MARK4人源基因质粒 |
| P3809/pCMV-SPORT6-NEUROG1人源基因质粒 |
| P3810/pCMV-SPORT6-ABHD11人源基因质粒 |
| P3811/pCMV-SPORT6-PRR11人源基因质粒 |
| P3812/pCMV-SPORT6-RNF146人源基因质粒 |
| P3813/pCMV-SPORT6-NMB人源基因质粒 |
| P3814/pCMV-SPORT6-CREG1人源基因质粒 |
| P3815/pCMV-SPORT6-HLA-DQA1人源基因质粒 |
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文献和实验比起其它公司的原核表达系列来说Invitrogen有个非常突出的地方就是它的重组克隆技术。像之前Novagen大部分载体都是用传统的酶切、链接方式做重组质粒，但是Invitrogen的表达系统大量运用了它的TOPO技术和Gateway技术。 虽然现在在许多做科研的学生看来，能出实验结果是最重要的，中间的过程不是那么重要。可是只有创新的技术才能推动科学不断的进步，比如：如果我们一直采用手工法测序，那真是不知道要猴年马月才能有人类基因组测序图谱，更难以进行
TOPO克隆提供高效的一步法克隆策略，可以定向克隆平端PCR产物到入门载体。平端PCR产物定向克隆的效率>90%，从而简化了筛选。同时不再需要连接酶、PCR后续步骤或者限制性内切酶。目前有两种定向TOPO克隆载体。pENTR/D-TOPO 和pENTR/SD/ D-TOPO（表2和图3）有以下特点： 位于PCR产物插入位点两侧的attL重组位点可以与Gateway目的载体进行有效重组 通用M13位点便于测序 基于pUC的ori位点提供高产量质粒 大肠杆菌中卡那霉素（kanamycin
浓度不同，两种引物浓度相差 100 倍。在最初 20 各循环中，主要产物是双链 DNA。当低浓度引物被耗尽后，高浓度引物引导的 PCR 就会产生大量单链 DNA，单链 DNA 可用于序列测定。 三、主要试剂 1. DNA 模板（1ng/μL）（质粒 R-pGEX-4T-1，R 指代外源基因） 2. 2.5mmol/LdNTP (TaKaRa) 3. 10×PCR 缓冲液(TaKaRa) 4. 25mmol/L MgCl 2 (TaKaRa) 5. 引物 1、引物 2（5pmol/μL） 引物
