pCR-BluntII-TOPO-USP22人源基因质粒

基本信息
名称：pCR-BluntII-TOPO-USP22人源基因质粒
别称: BC126898.1;KIAA1063
复制子: pUC
原核抗性: Kan
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度

质粒属性
载体宿主：大肠杆菌
载体用途：PCR模板
基因种属：人
基因类型：cDNA
原核抗性：Kan
真核抗性：
荧光蛋白：

质粒简介
   pCR-BluntII-TOPO-USP22人源基因质粒。

质粒图谱


质粒序列
1 atggcgccgg gttggccctc actatcagcg ggctcccgac aggaggcgcc ccagcttgcg
       61 gccgggggca gcgcctacca ggcagttggc aggcagttcc agccccgggc cacggcactg
      121 cagggcccga gccaggccaa gtcctgtatc tgccatgtct gtggcgtcca cctcaacagg
      181 ctgcattcct gcctctactg tgtcttcttc ggctgtttaa caaagaagca tattcacgag
      241 catgcgaagg cgaagcggca caacctggcc attgatctga tgtatggagg catctactgt
      301 tttctgtgcc aggactacat ctatgacaaa gacatggaaa taatcgccaa ggaggagcag
      361 cgaaaagctt ggaaaatgca aggcgttgga gagaagtttt caacttggga accaaccaaa
      421 cgggagcttg aactgctgaa gcacaacccg aaaaggagaa agatcacctc gaactgcacc
      481 ataggtctgc gtgggctgat caaccttggg aacacatgct tcatgaactg catcgtgcag
      541 gccctgaccc acacgccact tctgcgggac ttcttcctgt ctgacaggca ccgctgtgag
      601 atgcagagcc ccagctcctg tctggtctgt gagatgtcct cactgtttca ggagttttac
      661 tctggacacc ggtcccctca catcccgtat aagttgctgc acctggtgtg gacccacgcg
      721 aggcacctag caggctacga gcagcaggac gcccacgagt tcctcatcgc ggccctggac
      781 gtgctccacc gacactgcaa aggtgatgac aatgggaaga aggccaacaa ccccaaccac
      841 tgcaactgca tcatagacca gatcttcaca ggcgggttgc agtcagacgt cacctgccaa
      901 gtctgccatg gagtctccac caccatcgac cccttctggg acatcagctt ggatctcccc
      961 ggctcttcca ccccattctg gcccctgagc ccagggagcg agggcaacgt ggtaaacggg
     1021 gaaagccacg tgtcgggaac caccacgctc acggactgcc tgcgacgatt caccagacca
     1081 gagcacttgg gcagcagcgc caagatcaag tgcagcggtt gccatagcta ccaggagtcc
     1141 acaaagcagc tcactatgaa gaaactgccc atcgtagcct gttttcatct caaacgattt
     1201 gaacactcag ccaagctgcg gcggaagatc accacgtatg tgtccttccc cctggagctg
     1261 gacatgaccc ctttcatggc ctccagcaaa gagagcagga tgaatggaca gtaccagcag
     1321 cccacggaca gtctcaacaa tgacaacaag tattccctgt ttgctgttgt taaccatcaa
     1381 gggaccttgg agagtggcca ctacaccagc tttatccggc agcacaaaga ccagtggttc
     1441 aagtgtgacg atgccatcat caccaaggcc agcatcaagg acgtcctgga cagcgaaggg
     1501 tacttgctgt tctatcacaa acagttcctg gaatacgagt ag
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P3805/pCMV-SPORT6-SRD5A1（1同义突变）人源基因质粒

P3806/pCMV-SPORT6-ZNF85人源基因质粒

P3807/pCMV-SPORT6-SFRP2（1点突变1同义突变）人源基因质粒

P3808/pCMV-SPORT6-MARK4人源基因质粒

P3809/pCMV-SPORT6-NEUROG1人源基因质粒

P3810/pCMV-SPORT6-ABHD11人源基因质粒

P3811/pCMV-SPORT6-PRR11人源基因质粒

P3812/pCMV-SPORT6-RNF146人源基因质粒

P3813/pCMV-SPORT6-NMB人源基因质粒

P3814/pCMV-SPORT6-CREG1人源基因质粒

P3815/pCMV-SPORT6-HLA-DQA1人源基因质粒