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- 文献和实验
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负20℃
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3个月
- 英文名:
pAAV-cTNT-CasRx-U6-gRNA1-gRNA2
- 库存:
50
- 供应商:
LSM BIO
- 规格:
2ug
pAAV-cTNT-CasRx-U6-gRNA1-gRNA2
PVT33708 2ug
pAAV-cTNT-CasRx-U6-gRNA1-gRNA2 Description
Promoter:cTNT,U6Replicator:pUC
Clone strain:Stbl3
Culture conditions:37centigrade
Host:mammalian cells,Adeno associated virus
Use:Gene editing
Species:Empty vector
Gene type:CRISPR,sgRNA
Prokaryotic resistance:Amp
Eukaryotic resistance:
Fluorescent protein:
Caution:
1. This product is FOR RESEARCH USE ONLY!
2. The item is lyophilized form, Please take the powder plasmid by centrifugation at 5000rpm/min for 1min. Add 20ul ddH2O in to the tube of plasmid.
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文献和实验CRISPR-Cas9 全程实操教程:从 gRNA 设计到挑单克隆全程指导
的原件与表达 Cas9 的原件相连接,得到可以同时表达两者的质粒,将其转染细胞,便能够对目的基因进行基因操作,在 PAM (5'-NGG) 上游~3bp 进行切割,如下图所示。因此本实验的关键步骤是设计一对 20bp(不包括 NGG 在内的)完全互补的 oligo 插入到如上图所示的 filler。另 U6 启动子需要 5' 端的 G 起始转录,因此若设计的 oligo 第一个碱基非 G,需额外增加一个 G。操作详细流程1. 设计 sgRNA关于 sgRNA 的设计我们有专门开过一篇文章《一文掌握
9创建FREP1基因敲除冈比亚疟原虫株系。简言之,他们交叉两个转基因蚊子株系来产生生殖系基因敲除物:1)在VASA2启动子下的Cas9表达系和2)在U6聚合酶III启动子下的FREP1靶向rna(gRNA)转基因系。后者的后代通过3XP3-TFP报告基因在幼虫或成虫眼睛中显示稳定的蓝色荧光,用于识别突变体以供进一步研究。与3个对照蚊虫株系(WT、Cas9表达株系和FREP1-gRNA株系)相比,由此产生的FREP1基因敲除表明对恶性疟原虫和伯氏疟原虫感染的易感性显著降低。此外,在卵囊期和子孢子期
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