耐热M-MLV逆转录酶2000U（50U/μl）

产品名称：耐热MMLVReverse Transcriptase (RNase H-)

产品浓度：50U/μl

贮存条件：-20℃保存，有效期一年。

产品说明：逆转录酶能以RNA或单链DNA为模板起始合成互补的DNA链。MMLV Reverse Transcriptase (RNase H-)是M-MLV逆转录酶的突变型，通过多个点突变去除了RNase H的活性中心，提高了酶的热稳定性，增强了与模板的亲和力，减少了逆转录反应中RNA的降解，使cDNA第一链的得率增加，更容易获得全长cDNA。

来源：E.coli菌株，含有突变型莫洛尼氏鼠白血病病毒（M-MLV）逆转录酶基因。

产品应用：第一链cDNA的合成；RT-PCR反应。

产品纯度：200U的本酶和1μg的16S、23S rRNA在37℃下孵育1h，电泳条带无肉眼可见的变化。

推荐的反应条件：

cDNA第一链的合成

1)在无RNase的PCR管中加入：Oligo dT12-18(1μg/μl)或随机引物(50-250ng)1μl；Total RNA (10ng-5μg)或mRNA(1-500ng)xμl；dNTP (10mM each)1μl；DEPC ddOH2(13-x)μl。

2)70℃保温10分钟后迅速冰浴2-10分钟。

3)离心数秒使反应液聚集于PCR管底部。

4)向上述反应液中加入：5×RT Buffer 4μl；RNasin (40U/μl) 1μl；轻轻吸打混匀。

5) 50℃保温2分钟（Oligo dT12-18或基因特异引物）；如果是随机引物则25℃保温10分钟。

6)加入1μl MMLV逆转录酶，混匀后50℃保温50分钟。

7)70℃保温15分钟后置冰上冷却，得到cDNA。该产物可直接用于第二链的合成或RT- PCR扩增反应，保存请置于-20℃。