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晶莱生物
MTT增殖检测（包含试剂盒）
板
MTT法又称MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan)并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。它的特点是灵敏度高、经济。
检测步骤
◆ 1.将细胞板放置于无菌操作台中（细菌可以导致MTT比色OD值的升高）
◆ 2.在每管MTT(5 mg/每管)中加入1 mL MTT Solvent溶解。在细胞板中每孔加入10%体积的MTT溶液。
注：MTT 对光敏感。重溶的MTT溶液冻存于0℃以下时的稳定性可至少保持6个月。重溶的MTT溶液如保存于2 - 8℃超过2周，则可能会降解，导致错误的结果。
◆ 3.将细胞板放回培养箱中继续孵育3 - 4小时。做对比试验时，孵育时间需一致。
◆ 4.孵育后将细胞板从培养箱中拿出，按照下面的方法溶解产生的MTT甲臜结晶物。
a. 如果是贴壁细胞，则弃去培养基。加入与初始体积等量的Formazan Solvent。每孔的溶解液体积可能不同，但为了方便比较，总体积须保持一致。
b. 如果是非贴壁细胞先离心去除上清液，再加入与初始体积等量的Formazan Solvent。
c. 加入 Formazan Solvent后，须在1小时内完成读数。
◆ 5.在摇床中温和地振荡可增强溶解。某些情况下，尤其是细胞密度较高时，需要反复吹打使 MTT甲臜结晶物完全溶解。
◆ 6.将细胞板放置于无菌操作台中（细菌可以导致MTT比色OD值的升高）。
注意事项
◆ 1. 一般情况下，96孔培养板内贴壁细胞长满时约有105个细胞。但由于不同细胞贴壁后面积差异很大，因此，在进行MTT试验前，要进行预实验检测其贴壁率、倍增时间以及不同接种细胞数条件下的生长曲线，确定试验中每孔的接种细胞数和培养时间，保证MTT结晶形成的量与细胞数呈线性关系；
◆ 2. 为了得到结果，细胞数量应在对数生长期进行测定。每次检测需包括不含细胞的培养基作为空白对照；
◆ 3. 细胞消化会影响细胞的活性，进而影响OD值。容易消化的细胞，消化时胰蛋白酶中不添加EDTA，消化时也仅需胰酶浸润数秒即可；难以消化的细胞，胰蛋白酶中需添加浓度为0.25%的EDTA；
◆ 4. MTT转化为甲臜是依赖于细胞类型的。由于相同细胞系不同细胞株之间的差异，以及细胞的生理状态影响，因此推荐研究者建立自己的吸光度/细胞数量曲线；
◆ 5.细菌、支原体和其他微生物污染可能会使MTT四唑环断裂，不能用该方法测定；
◆ 6. 用含15%胎牛血清培养液培养细胞时，高的血清物质会影响试验孔的光吸收值，增加试验本底。因此，一般选含小于10%胎牛血清的培养液进行。在呈色后，尽量吸净培养孔内残余培养液。
◆ 7. CCK-8法也是常见的细胞增殖检测方法，底物被细胞中的脱氢酶还原，生成黄色的产物(甲瓒)，可溶于培养基。相较于MTT，CCK-8具有如下优点：①单一组分，无需预混，即开即用；②操作简便，只需一步即可得到结果；③无需放射性同位素和有机溶剂，对细胞毒性低；④水溶液，无需换液，尤其适合悬浮细胞。
晶莱生物服务流程
晶莱生物实验服务项目
| 动物实验 | 细胞生物学 | 病理实验 |
| 消化系统模型 | 细胞培养 | 病理染色 |
| 胃酸分泌模型 | 普通细胞株 | HE染色 |
| 脓毒症模型 | 细胞缺氧培养 | 油红O染色 |
| 胃溃疡模型 | 细胞培养+支架 | 番红固绿染色 |
| 胰腺炎模型 | 干细胞培养 | Masson染色 |
| 肝纤维化模型 | 原代细胞分离/提取/培养 | 天狼猩红染色 |
| DIO肥胖模型 | 细胞转染/病毒感染 | PAS糖原染色 |
| 胆结石模型 | Trans well共培养 | 阿利新蓝染色 |
| 结肠炎(UC)模型 | 细胞增殖 | 甲苯胺蓝染色 |
| 脂肪肝模型 | 细胞计数 | 尼氏染色 |
| 急性肝损伤模型 | 生长曲线测定 | LFB髓鞘染色 |
| 免疫、代谢系统疾病模型 | 存活曲线测定 | 普鲁士蓝染色 |
| 骨质疏松模型 | ccK-8增殖检测 | VG染色 |
| 糖尿病模型 | MTT增殖检测 | EVG染色 |
| 高尿酸血症模型 | CFSE检测增殖-流式检测 | VonKossa染色 |
| 呼吸系统模型 | BrDU检测-免疫荧光法 | 刚果红染色 |
| 肺纤维化模型 | 细胞凋亡 | 苏丹黑B染色 |
| 慢性肺阻塞模型 | Annexin V/PI流式检测细胞凋亡 | Trap染色 |
| 急性肺损伤模型 | WB检测凋亡相关蛋白 | 抗酸染色 |
| 哮喘模型 | 透射电镜观察凋亡小体 | 革兰氏染色 |
| 肺栓塞模型 | Tunel染色(POD法,DAB显色) | AB-PAS染色 |
| 支气管炎模型 | Tunel(荧光法,含试剂盒) | 亚甲基蓝染色 |
| 泌尿生殖系统模型 | DNA ladder法 | 苯胺蓝染色 |
| 慢性肾衰模型 | 细胞周期 | 荧光 DAPI染色 |
| 急性肾衰模型 | 细胞显微计数 | 普鲁士蓝染色 |
| 肾间质纤维化模型 | PI染色 | 间苯二酚碱性品红染色 |
| 肾结石模型 | BrdU渗入法 | 银染 |
| 肾炎模型 | 免疫荧光染色 | 黑色素染色 |
| 子宫内膜异位症模型 | PI流式检测细胞周期 | 镀银染色 |
| 心血管系统模型 | 细胞运动 | PASM 六胺银染色 |
| 冠心病模型 | Transwell检测细胞迁移 | VG染色 |
| 心肌梗死模型 | Transwell检测细胞侵袭 | 富尔根染色 |
| 心脏骤停模型 | 细胞划痕 | 亚甲基蓝染色 |
| 慢性心力衰竭模型 | 细胞克隆 | 碘-碘化钾染色 |
| 动脉粥样硬化模型 | 集落形成法/稀释铺板方法 | Goldner三色法染色 |
| 白血病模型 | 软琼脂克隆法 | PAS-萘酚磺S染色 |
| 高血压模型 | 毛细管克隆法 | 改良苯酚品红染色 |
| 神经系统模型 | 体外实验血管生成 | 网状纤维染色 |
| 脑卒中模型 | 磁珠分选细胞 | β-半乳糖苷酶染色 |
| 栓塞性脑梗死模型 | 流式分选细胞 | 镀银染色 |
| 脑出血模型 | 开机费 | movat五色染色 |
| 脑损伤模型 | 单色 | 维多利亚蓝染色 |
| 脊髓损伤模型 | 双色 | 免疫组化 |
| 帕金森模型 | CBA多细胞因子流式检测 | 免疫组化预式 |
| 老年痴呆模型 | 组织/血液细胞制备 | 免疫组化正式 |
| 应激模型 | 组织单细胞制备 | 免疫荧光（石蜡-单标） |
| 骨骼疾病模型 | 中性粒细胞提取 | 免疫荧光（石蜡-双标） |
| 骨折模型 | 其他样本细胞制备（如血液等） | 免疫荧光（石蜡-三标） |
| 骨缺损模型 | 外周血PBMC分离 | 免疫荧光（冰冻-单标） |
| 风湿免疫性关节炎模型 | 线粒体组学 | 免疫荧光（冰冻-双标） |
| 骨关节炎模型 | 线粒体膜电位检测-流式法 | 制片前处理 |
| 五官疾病模型 | 线粒体膜电位检测-免疫荧光法 | 石蜡组织包埋 |
| 眼科疾病模型 | 线粒体ROS生物含量检测--流式 | 特殊包埋（细胞、材料、眼球等） |
| 鼻腔疾病模型 | 线粒体ROS生物含量检测--免疫荧光 | 软化（肝硬化、皮肤结痂、植物等） |
| 皮肤疾病模型 | 线粒体通透性转换孔（mPTP） | 骨组织脱钙（小） |
| 皮肤损伤模型 | 溶酶体免疫荧光法 | 骨组织脱钙（大） |
| 肿瘤疾病模型 | 线粒体+溶酶体共定位 | 骨组织EDTA脱钙（小） |
| 原位瘤模型 | 内质网 | 骨组织EDTA脱钙（大） |
| 转移瘤模型 | 线粒体钙瞬时变化检测-流式 | 石蜡白片 |
| 皮下植瘤模型 | ATP检测 | 细胞爬片 |
| ADP检测 | ||
| AMP检测 | ||
| 流式 | DNA/RNA半定量检测 | 基因编辑工具 |
| 组织细胞悬液处理 | pcr检测mRNA | 合成（3保1）片段/质粒/引物合成 |
| 细胞处理 | microRNA检测 | 质粒载体构建 |
| 血液标本处理 | LncRNA表达量的检测 | 过表达腺病毒载体构建包装 |
| 细胞刺激培养 | CirRNA表达量的检测 | shRNA腺病毒载体构建包装 |
| 单色检测 | 凝胶电泳 | 过表达慢病毒载体构建包装 |
| 双色检测 | 基因合成 | shRNA慢病毒载体构建包装 |
| Annexin V/PI凋亡 | ＜300 | 过表达腺相关病毒载体构建包装 |
| 细胞周期 | 300-1,500 | shRNA腺病毒载体构建包装 |
| 1500 - 5000 | 稳转细胞株 | |
| >5000 | ||
| 特殊序列 | ||
| ELISA | WB | qPCR |
| 组织匀浆处理 | 蛋白提取及定量一 | RNA抽提 |
| ELISA（不含试剂盒）48T/kit | WB检测一（10孔膜/指标） | mRNA引物设计及合成 |
| ELISA（不含试剂盒）96T/kit | 灰度值分析及作图一（10孔膜/指标） | miRNA引物设计及合成 |
| ELISA（含国产试剂盒）48T/kit | 蛋白提取及定量二 | LncRNA引物设计及合成 |
| ELISA（含国产试剂盒）96T/kit | WB检测二（15孔膜/指标） | CircRNA引物设计及合成 |
| 灰度值分析及作图二（15孔膜/指标） | mRNA RT-qPCR | |
| miRNA RT-qPCR | ||
| LncRNA RT-qPCR | ||
| CircRNA RT-qPCR |
收费标准/服务周期/提供结果：
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科研机构
2023.09.15-2023.10.31
2023.09.08-2023.10.31
2023.09.08-2023.10.30
