WB发光结果异常

WB发光结果异常

grass010 28 评论 547 阅读

我做WB也不算是新手,自己觉得整个过程也没有什么明显的问题,可是最后发光的时候内参整个是晕开的,分子还连成了一条线,之前没出现过这种情况,所以想请大家帮忙分析下,是胶的问题,蛋白的问题,还是什么别的,谢啦!

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28 条评论
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  • 我之前跑的条带经常晕开,在丁香园上问了很多人都没有好的解释,现在跑的基本不会出现这个问题。我的改善主要在1、配层积胶前把液封的异丙醇彻底晾干,2、把PVDF膜剪的大点,剪的小,很容易在夹三明治时把空气从膜边边挤进去,3、三明治不能太紧也不能太松,4、转膜盒内放两块生物冰,确保转的时候液体不热。我自己感觉以前主要是第2条没做好,导致条带晕开,你那个晕开也比较像是气泡作祟。至于条带连成一条,可能是你的loading buffer的问题,建议重新配一次试试,还有就是上样量是否太大,浓度够的话建议降低上样量。

  • zhengfuggs 2015-05-25  2

    1,上样量太大2,转膜时间太长3,浓缩胶和分离胶中间可能连接的不好。4,如果分子量较小,建议不必跑到胶的很下面,小分子跑开即可。

  • 应该是胶的问题,你看看是不是配胶的丙烯酰胺没问题吧或者Tris的PH值,要不然分离胶的浓度是不是合适,感觉蛋白样扩散了

  • Tjmu-lotus 2014-10-09  1

    最可能的是配胶的问题,鉴定完毕。

  • 第一:假设分离胶和浓缩胶缓冲液没有问题的情况下(PH),极有可能是胶凝固时间不够第二:假设凝固时间足够,出现这种情况你应该考虑下缓冲液是否有问题仅为个人意见,祝好运!

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