我来回答  

我做WB也不算是新手,自己觉得整个过程也没有什么明显的问题,可是最后发光的时候内参整个是晕开的,分子还连成了一条线,之前没出现过这种情况,所以想请大家帮忙分析下,是胶的问题,蛋白的问题,还是什么别的,谢啦!

grass010  提问于 2014-09-02

共35个答案

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    wuyichen1103 回答于 2018-09-15

    我之前跑的条带经常晕开,在丁香园上问了很多人都没有好的解释,现在跑的基本不会出现这个问题。我的改善主要在1、配层积胶前把液封的异丙醇彻底晾干,2、把PVDF膜剪的大点,剪的小,很容易在夹三明治时把空气从膜边边挤进去,3、三明治不能太紧也不能太松,4、转膜盒内放两块生物冰,确保转的时候液体不热。我自己感觉以前主要是第2条没做好,导致条带晕开,你那个晕开也比较像是气泡作祟。至于条带连成一条,可能是你的loading buffer的问题,建议重新配一次试试,还有就是上样量是否太大,浓度够的话建议降低上样量。  

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    zhengfuggs 回答于 2016-12-01

    1,上样量太大
    2,转膜时间太长
    3,浓缩胶和分离胶中间可能连接的不好。
    4,如果分子量较小,建议不必跑到胶的很下面,小分子跑开即可。
      

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    lxp19891221 回答于 2014-10-16

    最可能的是配胶的问题,鉴定完毕。  

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    xiaoxiaolinyeah 回答于 2016-04-22

    应该是胶的问题,你看看是不是配胶的丙烯酰胺没问题吧或者Tris的PH值,要不然分离胶的浓度是不是合适,感觉蛋白样扩散了  

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    dxy_id1nki4 回答于 2018-06-01

    这个您可以咨询武汉华联科生物技术有限公司,电话是4009909795,网站www.hlkbio.cn  

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    阿wing1874 回答于 2016-02-22

    可以隔空上样2  

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    chloemica 回答于 2016-02-02

    胶的浓度问题吧! CP  

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    sistis 回答于 2014-10-07

    胶的问题,重买重配  

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    mingwang23 回答于 2014-10-06

    我认为是胶的问题,也有可能是没垂直拔梳子拔吧!  

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    远古的早晨 回答于 2014-10-06

    分离胶的浓度问题  

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    liqingjiang66 回答于 2014-10-03

    脚的问题吧  

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    yhe00 回答于 2014-10-02

    我之前也试过,是胶的问题  

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    maoshiyun888 回答于 2014-10-02

    分子连成一条线多半是上样量太大,内参晕开了首要考虑胶的问题,但是目的蛋白却没有晕,那就可能是转膜操作问题了  

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    我们来唱歌 回答于 2014-09-30

    以前做的时候也出现过这种问题,个人感觉是蛋白浓度太高,还有就是转膜时三明治的松紧问题。看了一下楼上的回答,感觉你把所有提到的问题都注意一下,重新做次实验试试。Wish you luck!

      

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    贺六浑 回答于 2014-09-29

    胶没有配匀  

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    wangyao1989 回答于 2014-09-29

    我也认为是胶的问题,同时也有课能是拔梳子没垂直拔吧。  

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    嗨a静香 回答于 2014-09-28

    你是不是跑得时间太久了,这个条带快要跑到胶的最下面了,这样的话容易出现这种情况  

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    yongbing 回答于 2014-09-28

    那要看你之前同样配的胶有没有出现过这个问题,如果同样出现晕开的现象,配胶的问题可能性很大;如果这次晕开只是偶然现象,上样量大应该是最可能的问题症结。
      

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    gedongx 回答于 2014-09-28

    上样量太大  

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    小凌33 回答于 2014-09-27

    我也觉得是浓缩胶的问题,没凝固好就跑了 容易出现连线样,建议下次浓缩胶时间延长,就跑内参试试。  

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