我觉得是显色液没有加均匀,加了显色液以后的曝光时间也不同,所以出现这种情况
其实问题出在方法学上,ap显色和ECL成像,都属于酶促进动力学反应,采用终点法检测动力学反应,一定是得不到准确的结果!请联系您身边的基因公司人员,借用近红外荧光二抗,解决WB重复性问题!
转膜时,膜与凝胶未能紧紧贴在一起(比如有很小的气泡未赶出来),贴的好的地方,转上的蛋白就多,显色时颜色自然就深,反之则浅。
wb的可能性太多了1.胶浓度是否一致,浓缩胶位置是否一致,30%AB用前有没有混匀;2.run胶时间长短是否一致;3.转膜时间条件,滤纸铺的有无气泡,是否造成转膜不均匀;4.孵抗体是否均匀,稀释抗体时由于 比例问题原液取得准确与否;5.发光液是否吹的均匀;最简单的办法就是再重复一次
应该是曝光时间的问题哈,还有一个在进行显色的时候膜没有铺平,导致显色液不能够均匀接触膜