换了不同浓度的IPTG,用不同温度,不同诱导时间都做了,但都没有我的蛋白,菌落PCR,双酶切,测序都是对的,为什么不表达呢?
做个mRNA,如果mRNA水平就有问题加融合伙伴,尝试在C端(优先)和N端加入融合伙伴,有时候是某些蛋白的mRNA在你的表达系统中不稳定
换载体或者换表达系统
你的蛋白是膜蛋白吗?如果是,或者你可以试试构建个domain mapping 的质粒看看表不表达
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