双重染色法免疫荧光组织化学染色步骤
双重染色法免疫荧光组织化学染色步骤 若在同一标本中有A和B两种抗原需要同时显示,A抗原的抗体用FITC标记,B抗原的抗体用TRITC标记,可采用以下染色方法:免疫荧光细胞化学双重染鱼法原代培养胚胎14天大鼠端脑细胞:在骨发生形态蛋白―{诱导下,乙酰胆碱转移酶(呈绿色荧光)和同源域蛋白Islet―1(呈红色荧光)共存于细胞质内(激光扫描共聚焦显微镜观察) 1.一步双染色法先将两种荧 ...
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荧光的淬灭及抗淬灭
荧光的淬灭及抗淬灭 1)荧光的淬灭:荧光淬灭(quench)是指荧光分子由内部因素和外部因素同时作用造成的不可逆破坏。内部因素主要是分子从激发态回到基态以非辐射跃迁形式释放能量。外部因素则包含多方面,主要有: ①光照射是致荧光淬灭的最常见原因,荧光的产生需要光照射,但同时光照射也会促进激发态分子与其他分子相互作用而引起碰撞,使荧光淬灭; ②荧光物质的分子与外部分子(或离子)形 ...
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增强化学发光法(ECL)
Ecl 显色原理:鲁米诺在免疫测定中既可用作标记物,也可用作过氧化物酶的底物。在Ecl底物中,含有H2O2和鲁米诺,在HRP(辣根过氧化物酶)的作用下,发出荧光来。试验步骤:1)将两种显色底物1:1等体积混合(一般各1ml/membrane)。2)将混合物覆盖在膜表面,1-2分钟,摇晃使均匀。3)用保鲜膜把膜包起来,放入夹板中。4)在暗室中将X光片,覆盖在膜的上面,夹好夹子,曝光1mi ...
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HRP显色
显色(HRP酶)1.增强化学发光法(ECL)Ecl 显色原理:氨基苯二酰肼类主要是鲁米诺及异鲁米诺衍生物,是最常用的一类化学发光剂。鲁米诺(luminol,5'-氨基-2,3-二氢-1,4-酞嗪二酮)的分子结构及化学反应式如下:鲁米诺在免疫测定中既可用作标记物,也可用作过氧化物酶的底物。在Ecl底物中,含有H2O2和鲁米诺,在HRP(辣根过氧化物酶)的作用下,发出荧光来。试验步骤:1) ...
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