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细胞免疫荧光步骤

标签: 细胞 免疫荧光

细胞免疫荧光可应用于:组织或细胞内抗原物质的定位。

详细
实验方法
  • 细胞免疫荧光步骤
实验方法原理 细胞免疫荧光可以观察蛋白在细胞中的定位,以及一些特殊信号分子蛋白的出核/入核的定位变化。在进行细胞免疫荧光过程中,需要用到细胞爬片,通过将爬片浸在细胞培养基内,细胞在爬片上生长,进而进行细胞的免疫荧光。
实验材料
试剂、试剂盒
仪器、耗材
实验步骤
细胞爬片免疫荧光实验步骤

第一天:

1. 在培养板中将已爬好细胞的玻片用PBS浸洗3次,每次3min;

2. 用4%的多聚甲醛固定爬片15min, PBS浸洗玻片3次,每次3min;

3. 0.5%Triton X-100( PBS配制 )室温通透20min(细胞膜上表达的抗原省略此步骤);

4. PBS浸洗玻片3次,每次3 min,吸水纸吸干PBS,在玻片上滴加正常山羊血清,室温封闭30min;

5. 吸水纸吸掉封闭液,不洗,每张玻片滴加足够量的稀释好的一抗并放入湿盒,4℃孵育过夜;

第二天:

6. 加荧光二抗: PBST 浸洗爬片3次,每次3min,吸水纸吸干爬片上多余液体后滴加稀释好的荧光二抗,湿盒中20-37℃孵育1h,PBST浸洗切片3次,每次3min;注意:从加荧光二抗起,后面所有操作步骤都尽量在较暗处进行。

7. 复染核:滴加DAPI避光孵育5min,对标本进行染核,PBST 5min×4次洗去多余的DAPI;8. 用吸水纸吸干爬片上的液体,用含抗荧光淬灭剂的封片液封片,然后在荧光显微镜下观察采集图像。
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注意事项

1.取细胞爬片时,动作应轻柔,防止将细胞爬片夹碎,影响实验进程。


2.种细胞过程中,要注意将细胞轻柔混匀,“八”字或者“十”字形摇晃,防止细胞局部生长过密。

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实验问答
(共18个问题)
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更多 谁做这个实验?
  • linyanwei615

    linyanwei615

    3个月前 觉得简单

    学习了!感觉步骤还好,只是出来好的结果不容易。

  • 宇文稼轩

    宇文稼轩

    3个月前 觉得难

    初学者,上手有点难度。

  • lulizhen

    lulizhen

    3个月前 觉得难

    挺好,也详细

  • drjohnny

    drjohnny

    3个月前 觉得很简单

    还行

  • 黄泽凯123

    黄泽凯123

    3个月前 觉得一般

    太简约

  • ANZHAOXI

    ANZHAOXI

    3个月前 觉得很难

    还可以 不难

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