[分享]oligo退火的条件
Ambion公司的protocol:将合成的DNA(长度约55nt)溶解成1ug/ul,各取2ul,加46ul退火缓冲液(100mM乙酸钾,30mMHEPES-KOH pH7.4,2mM乙酸镁),90度30min,37度1h,然后可以用来联接,或贮存于-20度。我们实验室有人按此方法成功了,我正在做。其他的非RNAi专用的退火条件有:TaKaRa:1.用STE缓冲液(10mM Tris pH8.0,50mM NaCl, 1mM EDTA)溶解DNA ...
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双酶切的一点心得
1、双酶切时如果两种酶反应温度一致而buffer不同时,可查阅内切酶供应商在目录后的附录中提供的各种酶在不同buffer中的活力表,如果有一种buffer能同时使2种酶的活力都超过70%的话,就可以用这种buffer作为反应buffer,如在TaKaRa公司的目录,就提供了很好的Buffer参照表,比如Sac Ⅱ和Hind Ⅲ就没有通用Buffer,但是,可以用T+BSA来酶切,而且效率还可以;如 ...
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如何阅读质粒图谱
载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。一、一个合格质粒的组成要素复制起始位点Ori,即控制复制起始的位点。原核生物DNA分子中只有一个复制起始点。而真核生物DNA分子有多个复制起始位点。抗生素抗性基因:可以便于加以检测,如Amp+ ,Kan+多l克隆位点:MCS克隆携带外源基因片段P/E:启动子/增强子Terms:终止信号加poly(A)信号:可以起到稳定mRNA ...
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Folin-酚(福林酚)试剂配方
在2升磨口回流瓶中,加入100克钨酸钠(Na2WO4•2H2O)25克钼酸钠(Na2MoO4•2H2O)及700毫升蒸馏水,再加50毫升85%磷酸,100毫升浓盐酸,充分混合,接上回流管,以小火回流10小时,回流结束时,加入150克硫酸锂(Li2SO4),50毫升蒸馏水及数滴液体溴,开口继续沸腾15分钟,以便驱除过量的溴。冷却后溶液呈黄色(如仍呈绿色,须再重复滴加液体溴的步骤) ...
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