分子实验方法5:重组质粒的连接、转化及筛选
第五章 重组质粒的连接、转化及筛选第一节 概 述 质粒具有稳定可靠和操作简便的优点。如果要克隆较小的DNA片段(<10kb)且结构简单质粒要比其它任何载体都要好。在质粒载体上进行克隆从原理上说是很简单的,先用限制性内切酶切割质粒DNA和目的DNA片段 然后体外使两者相连接 再用所得到重组质粒转化细菌即可完成。但在实际工作中 如何区分插入有外源DNA的重组质粒和无插入而自身环化的载体分子是较为困难 ...
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DNA重组技术(Recombinant DNA)
掌握DNA重组技术的基本原理和基本方法和熟悉质粒DNA的小量制备及酶切鉴定方法
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质粒稳定性测试
Immediately before indcution it is advisable to test the culture to determine the fraction of cells that still carry the target plasmid. This in ...
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质粒小量提取之煮沸法
试验原理:煮沸法是根据Holmex和Quigley(1985)的方法改进而成的。在基因工程中, DNA 分子的切割是由限制性内切酶来完成的。限制性内切酶能识别特定的 DNA 序列,在一定的条件下切断双链 DNA 。限制性内切酶的作用效率是受多方面因素影响的,如反应温度,缓冲体系,离子种类与浓度, DNA 的纯度和甲基化程度等。对 DNA 进行酶切时,首先要选择适合的缓冲液。对于单酶切,应选用该酶 ...
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