【原创】OMEGA质粒提取试剂盒说明书: 给刚进实验室,又需要做质粒提取的XDJM
自己的实验刚刚开始,又涉及到质粒的提取。翻译了OMEGA 的大/小规模质粒提取试剂盒的说明书(D6922-01和D6942-01)。希望能给和我一样的新手一点帮助,同时请大家指正多给建议,特别是自己的心得啊。全是自己打的,帮顶让大家都能下啊:)E.Z.N.A Plasmid Miniprep Protocol 质粒小规模提取试剂盒Product Number D6942 and D6943,D6944注意:1.使用之前,把试剂盒中的一小管RNA酶加入溶液 . ...
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【资源】自己整理的慢病毒质粒的知识
慢病毒——基因转移的潜在新载体 用于基因治疗的载体系统可分为病毒性载体和非病毒性载体两类。目前常用的病毒载体包括逆转录病毒载体、腺病毒载体、腺相关病毒载体、疱疹病毒载体、痘苗病毒载体等,但是这些载体均存在不足之处,严重影响了基因治疗的有效性及安全性。在基因治疗中广泛应用的逆转录病毒载体存在的主要问题,是无法高效转导非分裂期细胞,而腺病毒载体虽然能转导非分裂期细胞,但在体内不能实现目的基因稳定的长期表达,且反复应用容 ...
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【原创】表达载体的选择及构建方法
表达载体的构建方法及步骤一、载体的选择及如何阅读质粒图谱目前,载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒 DNA 是一种新的非病毒转基因载体。一个合格质粒的组成要素:(1)复制起始位点 Ori 即控制复制起始的位点。原核生物 DNA 分子中只有一个复制起始点。而真核生物 DNA 分子有多个复制起始位点。(2)抗生素抗性基因可以便于加以检测,如 Amp+ ,Kan+(3)多克隆位点 MCS 克隆携带外源基因片段(4) P/E 启动子/增强子(5)Terms 终止信号(6)加 poly(A)信 ...
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【交流】质粒大抽心得
最近做大抽,用的是Qiagen Maxi kit, 一开始抽提产量少,因为是公认的昂贵而好用的试剂盒,觉得是自己操作的不好。就仔细研究了说明书,及整个提取过程,得出一些经验。(high copy plasmid)1.摇菌:菌摇得好不好十分重要。整个过程,其他步骤完全按试剂盒说明操作,一般没有问题,唯独摇菌得自己操作。a.个人觉得还是先活化摇菌8h,在稀释后扩大培养较好,不要偷懒。b.摇菌量问题:试剂盒有推荐cultrue volume,我的推荐 ...
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