共生Nakaseomyces glabratus迁移进入前列腺肿瘤以加速癌症进展

Commensal Nakaseomyces glabratus migrates into prostate tumors to accelerate cancer progression

作者信息Ping Lai, Lei Liu, Nicolò Pernigoni, Yingxi Du, Daniele Braga, Martina Troiani, Giuseppe Attanasio, Yuxin Li, Pan Song, Emiliano Pasquini, Tanja Rezzonico Jost, Xiaowen Huang, Martino Maddalena, Simone Mosole, Andrea Rinaldi, Giovanna Pecoraro, Martino Pedrani, Aurora Valdata, Nicolò Bancaro, Luisa Maraccani, Alessandra De Giani, Wei Yuan, Lewis Gallagher, Khobe Chandran, Penny Flohr, Pasquale Rescigno, Giuseppe Reitano, Alessandro Morlacco, Fabrizio Dal Moro, Isabella Giacomini, Monica Montopoli, Matteo Brunelli, Serena Pedron, Ricardo Pereira Mestre, Raad Z Gharaibeh, Christian Jobin, Silke Gillessen Sommer, Johann de Bono, Andrea Alimonti

PMID42716968

期刊Nat Cancer

发布时间2026-10

DOI10.1038/s43018-026-01229-9

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实验完整度

高

含患者粪便/血液/肿瘤样本、两种小鼠模型、体外细胞与类器官、基因敲除及骨髓嵌合验证

主要模型

TRAMP-C1同种移植瘤去势小鼠模型 Ptenpc−/−基因工程前列腺癌小鼠模型 CRPC患者粪便、血液及肿瘤样本小鼠骨髓来源MDSCs（BM-MDSCs）与人源MDSCs AR阳性与AR阴性人前列腺癌类器官

重点核对

N. glabratus口服剂量为100 μl含108 c.f.u.，于去势后给药 TRAMP-C1细胞接种量为2.5×10^6，肿瘤约100 mm3时去势抗生素鸡尾酒：新霉素1 g/l、氨苄青霉素1 g/l、万古霉素0.5 g/l饮水，联合口服甲硝唑2 mg每周3次 PMN-MDSC清除：腹腔注射anti-Ly6G抗体（克隆1A8）150 μg，每周3次 A83-01使用浓度0.5 μM（部分实验1 μM），activin A为50 ng/ml

摘要

近期研究表明，肠道真菌群在多种肿瘤中发挥关键作用。然而，共生真菌对前列腺癌发生和进展的贡献仍研究不足。在此我们发现，Nakaseomyces glabratus在去势抵抗性前列腺癌患者的粪便、血液和肿瘤样本中富集，并与患者较差的总生存期相关。对去势小鼠口服给予N. glabratus可通过促进多形核髓源性抑制细胞（PMN-MDSCs）的浸润和活化加速癌症进展。机制上，雄激素剥夺治疗增加肠道通透性，导致N. glabratus从肠道泄漏至肿瘤部位，通过Dectin-2受体激活PMN-MDSCs。用带负电荷的肠道水凝胶处理小鼠可阻断N. glabratus向肿瘤的易位，减少PMN-MDSCs的瘤内浸润和活化。总之，这些发现揭示N. glabratus从肠道向肿瘤的易位通过增强这些肿瘤的免疫抑制微环境促进前列腺癌的内分泌抵抗。

患者样本中真菌群分析

评估前列腺癌患者肠道、血液和肿瘤中N. glabratus的存在及其与生存的关联

对HSPC和CRPC患者粪便行ITS测序及鸟枪法宏基因组测序，对血液行qPCR，对新鲜冷冻肿瘤活检行PCR并Sanger测序排除污染

口服N. glabratus的体内促瘤实验

验证N. glabratus是否促进去势后前列腺癌进展

TRAMP-C1同种移植及Ptenpc−/−小鼠行假手术或去势，抗生素预处理后口服N. glabratus，监测肿瘤体积、重量、生存及病理和Ki67

免疫微环境与PMN-MDSC功能分析

确定N. glabratus是否通过PMN-MDSCs发挥促瘤作用

流式细胞术分析肿瘤浸润免疫细胞，anti-Ly6G清除PMN-MDSC，体外T细胞抑制实验及RT-qPCR/RNA-seq检测Nos2、Arg1等

Dectin-2受体机制验证

明确识别N. glabratus的C型凝集素受体及下游信号

scRNA-seq与RT-qPCR筛选受体，siRNA敲低及Clec7a−/−、Clec4n−/− BM-MDSCs验证SYK、P38、ERK磷酸化，mannan刺激及骨髓嵌合小鼠体内验证

activin A下游效应验证

确定PMN-MDSC来源activin A及其对肿瘤细胞的作用

RNA-seq筛选分泌因子，RT-qPCR与ELISA检测Inhba/activin A，FAD培养TRAMP-C1加BM-MDSC条件培养基及A83-01，类器官实验，Inhbafl/flLyz2Cre+小鼠体内验证

肠道屏障与真菌易位验证

验证雄激素剥夺导致肠道通透性增加及N. glabratus由肠道向肿瘤易位

FITC-dextran肠道通透性检测，紧密连接蛋白RT-qPCR/免疫荧光/Western blot，GFP标记N. glabratus的qPCR与共聚焦定位，皮下注射与氟康唑处理对照

IT-水凝胶干预实验

验证恢复肠道屏障能否阻断真菌易位并抑制肿瘤

去势TRAMP-C1荷瘤小鼠口服N. glabratus并给予IT-水凝胶，检测肿瘤生长、瘤内真菌载量和PMN-MDSC浸润

实验环节	名称	品牌	货号
PMN-MDSC清除	抗Ly6G抗体（克隆1A8）	Bio X Cell	BP0075-1
同型对照	InVivoPlus大鼠IgG2a同型对照（克隆2A3）	Bio X Cell	BP0089
免疫检测PMN-MDSCs	抗小鼠Ly6G抗体（克隆S19018G）	BioLegend	164504
细胞培养	TRAMP-C1细胞	ATCC	CRL-2730
LNCaP细胞	ATCC	CRL-1740
支原体检测	MycoAlert支原体检测试剂盒	Lonza	LT07-218
真菌培养	Nakaseomyces glabratus（光滑念珠菌）	ATCC	2001TM
白色念珠菌	Leibniz Institute DSMZ	11943
粪便DNA提取	QIAamp粪便快速DNA提取试剂盒	QIAGEN	51604
InhibitEX缓冲液	QIAGEN	19593
16S测序建库	AMPure XP试剂盒	Beckman Coulter	--
肿瘤组织DNA提取	DNeasy血液与组织DNA提取试剂盒	QIAGEN	--
Sanger测序克隆	pMD19-T Easy载体	TaKaRa	3271
血浆游离DNA提取	MagMAX游离DNA提取试剂盒	Thermo Fisher Scientific	A29319
骨髓细胞裂解	ACK缓冲液	Gibco	A1049201
类器官培养	GlutaMAX添加剂	Gibco	35050-068
人NRG1重组蛋白	Peprotech	100-03
Matrigel基质胶	Corning	356231
96孔光学板	Corning	3904
类器官增殖检测	Incucyte S3活细胞分析系统	SARTORIUS	--
T细胞增殖标记	羧基荧光素琥珀酰亚胺酯	Thermo Fisher Scientific	C34554
T细胞活化	抗CD3/抗CD28磁珠	Gibco	11452D
人T细胞活化	抗CD3/抗CD28磁珠	Gibco	11132D
免疫荧光封片	含DAPI封片剂	Invitrogen	P36931
RNA提取	TRIzol试剂	Ambion	15596026
cDNA合成	ImProm-II试剂盒	Promega	A3800
RT-qPCR	GoTaq qPCR预混液	Promega	A6002
肠道通透性检测	FITC-葡聚糖	Sigma-Aldrich	--
细胞分离	Ficoll分离液	Sigma-Aldrich	--

实验环节

名称

品牌

货号

PMN-MDSC清除

抗Ly6G抗体（克隆1A8）

Bio X Cell

BP0075-1

同型对照

InVivoPlus大鼠IgG2a同型对照（克隆2A3）

Bio X Cell

BP0089

免疫检测PMN-MDSCs

抗小鼠Ly6G抗体（克隆S19018G）

BioLegend

164504

细胞培养

TRAMP-C1细胞

ATCC

CRL-2730

LNCaP细胞

ATCC

CRL-1740

支原体检测

MycoAlert支原体检测试剂盒

Lonza

LT07-218

真菌培养

Nakaseomyces glabratus（光滑念珠菌）

ATCC

2001TM

白色念珠菌

Leibniz Institute DSMZ

11943

粪便DNA提取

QIAamp粪便快速DNA提取试剂盒

QIAGEN

51604

InhibitEX缓冲液

QIAGEN

19593

16S测序建库

AMPure XP试剂盒

Beckman Coulter

肿瘤组织DNA提取

DNeasy血液与组织DNA提取试剂盒

QIAGEN

Sanger测序克隆

pMD19-T Easy载体

TaKaRa

3271

血浆游离DNA提取

MagMAX游离DNA提取试剂盒

Thermo Fisher Scientific

A29319

骨髓细胞裂解

ACK缓冲液

Gibco

A1049201

类器官培养

GlutaMAX添加剂

Gibco

35050-068

人NRG1重组蛋白

Peprotech

100-03

Matrigel基质胶

Corning

356231

96孔光学板

Corning

3904

类器官增殖检测

Incucyte S3活细胞分析系统

SARTORIUS

T细胞增殖标记

羧基荧光素琥珀酰亚胺酯

Thermo Fisher Scientific

C34554

T细胞活化

抗CD3/抗CD28磁珠

Gibco

11452D

人T细胞活化

抗CD3/抗CD28磁珠

Gibco

11132D

免疫荧光封片

含DAPI封片剂

Invitrogen

P36931

RNA提取

TRIzol试剂

Ambion

15596026

cDNA合成

ImProm-II试剂盒

Promega

A3800

RT-qPCR

GoTaq qPCR预混液

Promega

A6002

肠道通透性检测

FITC-葡聚糖

Sigma-Aldrich

细胞分离

Ficoll分离液

Sigma-Aldrich

环节	核对要点
口服N. glabratus体内实验	真菌剂量100 μl 108 c.f.u.、去势时机（肿瘤约100 mm3）、ABX组成与预处理7天、每组样本量阅读提示：Methods的In vivo experiments小节及Fig. 1f–h图注
PMN-MDSC清除实验	anti-Ly6G剂量150 μg、每周3次、同型对照克隆2A3 阅读提示：Methods的In vivo experiments小节及Fig. 2g,h图注
Dectin-2机制实验	N. glabratus MOI=5、mannan 5 μg/ml、siRNA靶基因与时间点阅读提示：Methods的Cell stimulation小节及Fig. 3图注、Extended Data Fig. 5
activin A通路实验	A83-01浓度0.5 μM（部分1 μM）、activin A 50 ng/ml、FAD处理时长、条件培养基比例1:3 阅读提示：Methods的Cell stimulation与Human organoids小节及Fig. 4图注
肠道通透性与水凝胶实验	FITC-dextran 50 mg/kg、4 h检测、IT-水凝胶4% w/v及口服100 μl 阅读提示：Methods的In vivo permeability assay与In vivo experiments小节及Fig. 6图注

环节

核对要点

口服N. glabratus体内实验

真菌剂量100 μl 108 c.f.u.、去势时机（肿瘤约100 mm3）、ABX组成与预处理7天、每组样本量

阅读提示：Methods的In vivo experiments小节及Fig. 1f–h图注

PMN-MDSC清除实验

anti-Ly6G剂量150 μg、每周3次、同型对照克隆2A3

阅读提示：Methods的In vivo experiments小节及Fig. 2g,h图注

Dectin-2机制实验

N. glabratus MOI=5、mannan 5 μg/ml、siRNA靶基因与时间点

阅读提示：Methods的Cell stimulation小节及Fig. 3图注、Extended Data Fig. 5

activin A通路实验

A83-01浓度0.5 μM（部分1 μM）、activin A 50 ng/ml、FAD处理时长、条件培养基比例1:3

阅读提示：Methods的Cell stimulation与Human organoids小节及Fig. 4图注

肠道通透性与水凝胶实验

FITC-dextran 50 mg/kg、4 h检测、IT-水凝胶4% w/v及口服100 μl

阅读提示：Methods的In vivo permeability assay与In vivo experiments小节及Fig. 6图注

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