基于PiggyBac转座子系统的HER2靶向CAR-T细胞抗肿瘤作用研究

背景：嵌合抗原受体T（CAR-T）细胞疗法在血液系统恶性肿瘤中显示出显著的临床疗效。然而，其在实体瘤中的应用仍受到多种挑战的实质性限制，包括脱靶效应的风险。因此，优化CAR-T细胞以实现更强的抗原结合至关重要。方法：在本研究中，我们采用了源自曲妥珠单抗的经典抗人内皮生长因子受体2（HER2）单链可变片段（scFv），以及从组合细胞CAR文库中鉴定出的抗HER2-13 scFv，用于构建第三代CAR-T细胞。同时，比较了通过PiggyBac转座子介导的基因转移转导两种scFv的CAR-T细胞的表型以及体外和体内功能。结果：在构建两种HER2靶向CAR-T细胞时，PiggyBac HER2-CAR-puro转座子与Super PiggyBac转座酶质粒的最佳比例不同。在使用优化比例质粒后，两组CAR-T细胞的扩增能力、CD3+CAR+群体、CD4+CAR+/CD8+CAR+比例以及记忆和耗竭标志物相似。两种CAR-T细胞均表现出显著的抗肿瘤活性，其中抗HER2-13 CAR-T细胞表现出更优的靶点特异性。在MDA-MB-231HER2+乳腺肿瘤异种移植模型中，两种CAR-T细胞和曲妥珠单抗均观察到治疗效果，其中抗HER2-13 CAR-T细胞显示出略微增强的疗效且无明显脱靶毒性。结论：这些结果凸显了抗HER2-13 CAR-T细胞作为HER2靶向治疗中更安全、更有效替代方案的潜力。