FCPP水提物制备
获得FCPP水提物以用于后续实验。
FCPP干粉与水混合后依次用石油醚、正丁醇、乙酸乙酯、乙醇、甲醇萃取,最终获得水层提取物,经旋转蒸发和冻干得到固体。
Gastroprotective Effects of the Aqueous Extract of Finger Citron Pickled Products against Ethanol-Induced Gastric Damage: In Vitro and In Vivo Studies.
包含体外细胞实验(GES-1)、体内大鼠模型、组织病理学、血清指标测定、Western blot及成分分析等多个独立证据层级,且包含功能验证和机制验证。
人胃黏膜上皮细胞系GES-1 急性酒精性胃溃疡SD大鼠模型
乙醇损伤浓度0.8 M,处理4小时 FCPP水提物剂量:低剂量100 mg/kg、中剂量400 mg/kg、高剂量800 mg/kg,灌胃给药,连续15天 阳性对照:奥美拉唑50 mg/kg,胃黏膜保护剂替普瑞酮80 μM 乙醇造模剂量:5 mL/kg无水乙醇 GES-1细胞划痕实验:乙醇沉淀物和上清液浓度100 μg/mL
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
获得FCPP水提物以用于后续实验。
FCPP干粉与水混合后依次用石油醚、正丁醇、乙酸乙酯、乙醇、甲醇萃取,最终获得水层提取物,经旋转蒸发和冻干得到固体。
评估FCPP水提物对乙醇损伤的GES-1细胞的保护和修复作用。
GES-1细胞接种于12孔板,分为正常对照组、乙醇组、FCPP水提物组和替普瑞酮组。细胞经0.8 M乙醇处理4小时后,更换含FCPP水提物或替普瑞酮的培养基继续培养24小时,收集上清液检测TFF2和TNF-α。
建立急性酒精性胃溃疡大鼠模型,评估FCPP水提物灌胃预处理对胃黏膜的保护作用。
60只SD大鼠随机分为6组(正常组、模型组、奥美拉唑组、FCPP低/中/高剂量组),连续给药15天后,禁食24小时,除正常组外灌胃无水乙醇造模。
宏观和微观评价FCPP水提物对大鼠胃黏膜损伤的保护效果。
取胃组织拍照,计算溃疡指数和溃疡抑制率;胃组织固定、包埋、切片,进行H&E染色和PAS染色,观察组织学变化。
检测FCPP水提物对大鼠血清氧化应激和炎症指标的影响。
腹主动脉取血,离心分离血清,用ELISA试剂盒测定TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10,用试剂盒测定SOD和MDA。
检测胃组织中NF-κB通路相关蛋白的表达变化。
提取胃组织总蛋白,SDS-PAGE电泳,转移至NC膜,孵育一抗和二抗,化学发光检测蛋白条带。
探究FCPP水提物中发挥胃保护活性的主要物质。
将FCPP水提物用80%乙醇沉淀,分离上清和沉淀,沉淀脱蛋白后,进行GES-1细胞划痕实验,并对沉淀进行化学成分分析(总糖、蛋白质、总酚和糖醛酸含量)。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| ELISA | TFF2 ELISA试剂盒 | Cusabio Biotech Co., Ltd | CSB-EL023432HU |
| TNF-α ELISA试剂盒 | NeoBioscience Biological Technology Co., Ltd. | EHC103a | |
| IL-6 ELISA试剂盒 | NeoBioscience Biological Technology Co., Ltd. | ERC003 | |
| IL-10 ELISA试剂盒 | NeoBioscience Biological Technology Co., Ltd. | ERC004 | |
| IL-1β ELISA试剂盒 | NeoBioscience Biological Technology Co., Ltd. | ERC007 | |
| 生化检测 | SOD检测试剂盒 | Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute | A001-1-2 |
| MDA检测试剂盒 | Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute | A003-1-2 | |
| Western blot | NF-κB (P65)抗体 | Proteintech | 66535-1-Ig |
| IκBα抗体 | Proteintech | 66418-1-Ig | |
| caspase-1抗体 | Proteintech | 22915-1-AP | |
| IL-1β抗体 | Proteintech | 16806-1-AP | |
| β-actin抗体 | Proteintech | 66009-1-Ig | |
| SuperECL Plus试剂盒 | Advansta Co. | -- |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| GES-1细胞实验 | 乙醇浓度0.8 M,处理时间4小时;FCPP水提物和替普瑞酮浓度80 μM;细胞密度4×10^5细胞/孔;每孔复孔数3个。 阅读提示:见Methods 2.3 |
| 动物实验 | 大鼠品系、性别、体重;FCPP水提物剂量100、400、800 mg/kg;给药方式灌胃,体积5 mL/kg;给药时间15天;无水乙醇剂量5 mL/kg;禁食时间24小时。 阅读提示:见Methods 2.4及表1 |
| 胃溃疡评价 | 溃疡面积计算方法、溃疡指数计算公式;ImageJ软件使用。 阅读提示:见Methods 2.5 |
| 组织病理 | 固定液10%福尔马林;染色方法H&E和PAS。 阅读提示:见Methods 2.6 |
| 血清指标 | 试剂盒品牌和货号;血清分离条件;测定方法。 阅读提示:见Methods 2.7 |
| Western blot | 抗体稀释比例:NF-κB 1:2000, IκBα 1:7000, caspase-1 1:1000, IL-1β 1:750;内参β-actin;曝光试剂。 阅读提示:见Methods 2.8 |
| 活性成分分析 | 乙醇沉淀浓度80%;离心条件4500 rpm 15分钟;沉淀和上清浓度100 μg/mL;划痕实验细胞密度2×10^5细胞/孔;培养时间24小时。 阅读提示:见Methods 2.9 |