营养补充剂和地中海低热量饮食对计算性脂肪肝指数和炎症的影响:临床和体外证据。

Effect of Nutraceutical Supplementation and Mediterranean Hypocaloric Diet on Calculated Steatosis Indices and Inflammation: Clinical and In Vitro Evidences.

作者信息Mariana Di Lorenzo, Luca Pipicelli, Laura Aurino, Concetta Sozio, Anna Palmiero, Domenico Palmieri, Marta Lombardi, Bruna Guida, Mariarosaria Santillo, Maria Serena Lonardo, Giuliana La Rosa, Simona Damiano
PMID40913543
发布时间2025-11
DOI10.1002/mnfr.70207

实验完整度

包含回顾性临床研究和HepG2细胞体外实验,有明确的干预、检测和机制验证,但缺乏动物模型等其他证据层级。

主要模型

HepG2人肝癌细胞系 超重/肥胖NAFLD患者队列

重点核对

MHD组(n=23)与MHD+NS组(n=22)的基线特征无显著差异 NS胶囊成分含量:Leucoselect Phytosome 300 mg,红曲米提取物99 mg,Monacolin K 2.97 mg,多廿烷醇10 mg,二十八烷醇9 mg,叶酸200 mcg 临床研究干预时长:3个月 体外实验TNFα刺激浓度:10 ng/mL;脂肪酸处理浓度:1 mM(油酸:棕榈酸=2:1)

摘要

本研究评估了营养补充剂(NS)和地中海低热量饮食(MHD)对患有高脂血症和非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的成年人的肝脏脂肪变性指数(HSIs)、γ-谷氨酰转移酶(γGT)和血脂谱的影响。体外研究在HepG2细胞上探索了潜在的分子机制。对45名超重/肥胖受试者(19名男性)进行了一项回顾性研究,这些受试者被处方MHD,并联合或不联合NS。在基线和3个月后采集人体测量数据、生化参数、HSIs和γGT。在体外,细胞用单一和混合的NS组分预处理,然后用肿瘤坏死因子α(TNFα)或脂肪酸(FAs)处理。通过荧光测定和定量聚合酶链反应或酶联免疫吸附测定评估抗氧化和抗炎活性;通过蛋白质印迹法评估抗凋亡作用。3个月后,所有受试者的人体测量和生化参数均有改善,但只有MHD和NS联合治疗显著降低了胰岛素抵抗、HSIs、低密度脂蛋白胆固醇和γGT。在体外,用混合NS组分处理降低了TNFα/FAs诱导的活性氧。联合治疗还通过降低白细胞介素-6和白细胞介素-1β,增加白细胞介素-10和前caspase 8的表达来调节炎症反应。这些发现表明,NS凭借其抗炎特性,代表了一种有前景的NAFLD管理策略。

实验结论

提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。

研究问题
评估营养补充剂(NS)联合地中海低热量饮食(MHD)对超重/肥胖高脂血症合并NAFLD患者肝脏脂肪变性指数、血脂及炎症指标的影响,并探讨其潜在的分子机制。
核心机制
NS通过降低TNFα和脂肪酸诱导的ROS产生,抑制促炎细胞因子IL-6和IL-1β的表达,增加抗炎细胞因子IL-10的表达,并抑制caspase 8介导的外源性凋亡通路。
主要证据
临床数据显示MHD+NS组在3个月后显著降低胰岛素抵抗、HSIs、LDL胆固醇和γGT;体外实验显示MIX2降低TNFα/脂肪酸诱导的ROS和IL-6,并调节炎症因子表达。
研究意义
作者提出NS凭借其抗氧化、抗炎和抗凋亡作用,可作为NAFLD治疗和预防的有价值工具。

研究路径

按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。

1

临床回顾性研究

评估MHD联合NS对NAFLD患者肝脏指标、血脂和炎症标志物的影响。

45名超重/肥胖NAFLD患者被处方MHD,其中22名联合使用NS,23名为对照组。在基线和3个月后测量人体测量、生化参数、HSIs和γGT。

2

体外抗氧化活性评估

评估NS的单一组分和混合组分对HepG2细胞ROS产生的影响。

HepG2细胞用单一组分或混合组分预处理24小时,然后用TNFα(10 ng/mL)刺激4小时,检测ROS水平。

3

体外抗炎和抗凋亡评估

评估MIX2对TNFα诱导的炎症因子表达和凋亡通路的影响。

HepG2细胞用MIX2预处理24小时,然后TNFα刺激1或6小时,检测IL-6、IL-1β、IL-10 mRNA表达;TNFα刺激18小时后检测pro-caspase 8蛋白水平。

4

体外脂肪变性模型评估

评估MIX2在脂肪酸诱导的脂肪变性细胞模型中的抗氧化和抗炎作用。

HepG2细胞用脂肪酸(油酸:棕榈酸=2:1,1 mM)处理24小时诱导脂肪变性,并与MIX2共处理,检测脂质积累、ROS水平和IL-6分泌。

研究方法

按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。

产品清单

实验环节名称品牌货号
DMEM培养基GIBCO, Thermo Fisher Scientific--
胎牛血清GIBCO, Thermo Fisher Scientific--
L-谷氨酰胺GIBCO, Thermo Fisher Scientific--
青霉素-链霉素----
莫纳可林KSigma-Aldrich75330-75-5
Leucoselect PhytosomeAgaton s.r.l.--
多廿烷醇Agaton s.r.l.--
叶酸Agaton s.r.l.--
肿瘤坏死因子αPrepoTech, Thermo Fisher Scientific--
油酸Sigma-AldrichO7501
棕榈酸Sigma-AldrichP9767
DCFH-DA探针Molecular Probes, Thermo Fisher Scientific--
二氢乙锭Molecular Probes, Thermo Fisher Scientific--
抗pro-caspase 8抗体Cell Signaling Technology4790
抗兔二抗Bio-Rad--
ECL底物Merck MilliporeWBKLS010055
抗GAPDH抗体ElabscienceE-AB-40337
PureZOL试剂Bio-Rad--
All-In-One 5X RT MasterMixABM--
iTaq Universal SYBR Green SupermixBio-Rad--
人IL-6 ELISA试剂盒ElabscienceE-EL-H6156
油红OSigma-AldrichO0625
BODIPY 493/503Sigma-Aldrich--
Leica DMi8荧光显微镜Leica--
Leica DMi1显微镜Leica--
iMark酶标仪Bio-Rad--
Fluoroskan Ascent FL荧光酶标仪Thermo Electron Oy--
ChemiDoc XRS+成像系统Bio-Rad--
CO2培养箱----

关键环节

汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。

环节核对要点
临床研究
分组:MHD组(n=23)与MHD+NS组(n=22);干预时长:3个月;NS剂量:每日1粒;纳入标准:BMI 25-40 kg/m2,总胆固醇220-270 mg/dL,LDL胆固醇130-160 mg/dL。
阅读提示:Methods: Subjects' Selection and Study Design
体外细胞处理
细胞:HepG2;预处理:MIX2浓度(LSP 20 µg/mL,OCT 620 ng/mL,MK 200 ng/mL,FA 14.2 ng/mL);TNFα刺激浓度:10 ng/mL,时间:4小时(ROS)、1或6小时(qPCR)、18小时(Western blot)。
阅读提示:Methods: In Vitro Treatment (Nutraceutical Mixes), Fluorometric Determination of ROS, Western Blotting Analysis, Gene Expression Analysis
脂肪变性模型
脂肪酸处理:油酸和棕榈酸比例2:1,浓度1 mM,处理时间24小时;脂质积累评估:油红O染色和BODIPY 493/503染色;ROS和IL-6检测。
阅读提示:Methods: Oil Red-O Staining, BODIPY 493/503 Analysis; Results: In Vitro Study, Antiinflammatory Effects of a Nutraceutical Mixture in a Cellular Model of Hepatic Steatosis