临床回顾性研究
评估MHD联合NS对NAFLD患者肝脏指标、血脂和炎症标志物的影响。
45名超重/肥胖NAFLD患者被处方MHD,其中22名联合使用NS,23名为对照组。在基线和3个月后测量人体测量、生化参数、HSIs和γGT。
Effect of Nutraceutical Supplementation and Mediterranean Hypocaloric Diet on Calculated Steatosis Indices and Inflammation: Clinical and In Vitro Evidences.
包含回顾性临床研究和HepG2细胞体外实验,有明确的干预、检测和机制验证,但缺乏动物模型等其他证据层级。
HepG2人肝癌细胞系 超重/肥胖NAFLD患者队列
MHD组(n=23)与MHD+NS组(n=22)的基线特征无显著差异 NS胶囊成分含量:Leucoselect Phytosome 300 mg,红曲米提取物99 mg,Monacolin K 2.97 mg,多廿烷醇10 mg,二十八烷醇9 mg,叶酸200 mcg 临床研究干预时长:3个月 体外实验TNFα刺激浓度:10 ng/mL;脂肪酸处理浓度:1 mM(油酸:棕榈酸=2:1)
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
评估MHD联合NS对NAFLD患者肝脏指标、血脂和炎症标志物的影响。
45名超重/肥胖NAFLD患者被处方MHD,其中22名联合使用NS,23名为对照组。在基线和3个月后测量人体测量、生化参数、HSIs和γGT。
评估NS的单一组分和混合组分对HepG2细胞ROS产生的影响。
HepG2细胞用单一组分或混合组分预处理24小时,然后用TNFα(10 ng/mL)刺激4小时,检测ROS水平。
评估MIX2对TNFα诱导的炎症因子表达和凋亡通路的影响。
HepG2细胞用MIX2预处理24小时,然后TNFα刺激1或6小时,检测IL-6、IL-1β、IL-10 mRNA表达;TNFα刺激18小时后检测pro-caspase 8蛋白水平。
评估MIX2在脂肪酸诱导的脂肪变性细胞模型中的抗氧化和抗炎作用。
HepG2细胞用脂肪酸(油酸:棕榈酸=2:1,1 mM)处理24小时诱导脂肪变性,并与MIX2共处理,检测脂质积累、ROS水平和IL-6分泌。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 细胞培养 | DMEM培养基 | GIBCO, Thermo Fisher Scientific | -- |
| 胎牛血清 | GIBCO, Thermo Fisher Scientific | -- | |
| L-谷氨酰胺 | GIBCO, Thermo Fisher Scientific | -- | |
| 青霉素-链霉素 | -- | -- | |
| 药物处理 | 莫纳可林K | Sigma-Aldrich | 75330-75-5 |
| Leucoselect Phytosome | Agaton s.r.l. | -- | |
| 多廿烷醇 | Agaton s.r.l. | -- | |
| 叶酸 | Agaton s.r.l. | -- | |
| 肿瘤坏死因子α | PrepoTech, Thermo Fisher Scientific | -- | |
| 油酸 | Sigma-Aldrich | O7501 | |
| 棕榈酸 | Sigma-Aldrich | P9767 | |
| 氧化应激检测 | DCFH-DA探针 | Molecular Probes, Thermo Fisher Scientific | -- |
| 二氢乙锭 | Molecular Probes, Thermo Fisher Scientific | -- | |
| Western blot | 抗pro-caspase 8抗体 | Cell Signaling Technology | 4790 |
| 抗兔二抗 | Bio-Rad | -- | |
| ECL底物 | Merck Millipore | WBKLS010055 | |
| 抗GAPDH抗体 | Elabscience | E-AB-40337 | |
| qPCR | PureZOL试剂 | Bio-Rad | -- |
| All-In-One 5X RT MasterMix | ABM | -- | |
| iTaq Universal SYBR Green Supermix | Bio-Rad | -- | |
| ELISA | 人IL-6 ELISA试剂盒 | Elabscience | E-EL-H6156 |
| 脂质染色 | 油红O | Sigma-Aldrich | O0625 |
| BODIPY 493/503 | Sigma-Aldrich | -- | |
| 荧光显微镜 | Leica DMi8荧光显微镜 | Leica | -- |
| Leica DMi1显微镜 | Leica | -- | |
| 酶标仪 | iMark酶标仪 | Bio-Rad | -- |
| 荧光检测 | Fluoroskan Ascent FL荧光酶标仪 | Thermo Electron Oy | -- |
| Western blot | ChemiDoc XRS+成像系统 | Bio-Rad | -- |
| 细胞培养 | CO2培养箱 | -- | -- |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 临床研究 | 分组:MHD组(n=23)与MHD+NS组(n=22);干预时长:3个月;NS剂量:每日1粒;纳入标准:BMI 25-40 kg/m2,总胆固醇220-270 mg/dL,LDL胆固醇130-160 mg/dL。 阅读提示:Methods: Subjects' Selection and Study Design |
| 体外细胞处理 | 细胞:HepG2;预处理:MIX2浓度(LSP 20 µg/mL,OCT 620 ng/mL,MK 200 ng/mL,FA 14.2 ng/mL);TNFα刺激浓度:10 ng/mL,时间:4小时(ROS)、1或6小时(qPCR)、18小时(Western blot)。 阅读提示:Methods: In Vitro Treatment (Nutraceutical Mixes), Fluorometric Determination of ROS, Western Blotting Analysis, Gene Expression Analysis |
| 脂肪变性模型 | 脂肪酸处理:油酸和棕榈酸比例2:1,浓度1 mM,处理时间24小时;脂质积累评估:油红O染色和BODIPY 493/503染色;ROS和IL-6检测。 阅读提示:Methods: Oil Red-O Staining, BODIPY 493/503 Analysis; Results: In Vitro Study, Antiinflammatory Effects of a Nutraceutical Mixture in a Cellular Model of Hepatic Steatosis |