HPLC分析验证α-倒捻子素成分
确认LBT提取物中含有α-倒捻子素。
采用HPLC对LBT提取物和α-倒捻子素标准品进行分析，比较保留时间。
关于丁香通
公司信息
个人用户
企业机构
无忧采购 轻松科研
- 移动端
α-倒捻子素通过调控Nrf2/HO-1和NF-κB/NLRP3/caspase-1信号通路及肠道微生物群抑制乙醇诱导的胃溃疡
α-Mangostin suppresses ethanol-induced gastric ulceration by regulating the Nrf2/HO-1 and NF-κB/NLRP3/caspase-1 signaling pathways and gut microbiota.
实验完整度
高包含体内大鼠模型、体外GES-1和RAW264.7细胞模型，以及16S rRNA测序和SCFAs分析，并进行功能验证（氧化应激、炎症、自噬）和机制验证（信号通路蛋白表达）。
主要模型
乙醇诱导的Sprague-Dawley大鼠胃溃疡模型 乙醇诱导的GES-1细胞氧化应激模型 LPS诱导的RAW264.7细胞炎症模型
重点核对
α-mangostin剂量：32、64、96 mg/kg（灌胃，每日一次，持续7天） 乙醇诱导：95%乙醇（5 mL/kg）单次灌胃，1小时后处死 细胞处理：α-mangostin浓度10、20、40 μM，分别与1%乙醇或100 ng/mL LPS共处理 样本量：动物每组10只；细胞实验每组3次独立重复 统计显著性：p < 0.05 和 p < 0.01
摘要
α-倒捻子素是一种从Camellia atrophy (CA)（俗称利川红茶）中分离的天然氧杂蒽酮衍生物。本研究探讨了α-倒捻子素对大鼠酒精性胃溃疡的改善作用及其机制。体内实验中，α-倒捻子素缓解了病理症状。此外，α-倒捻子素调控了核因子E2相关因子2/血红素加氧酶1和核因子κB/NLR家族pyrin结构域蛋白3/caspase-1通路的激活。活性氧、肿瘤坏死因子-α和白细胞介素-1β显著降低，IL-10升高，微管相关蛋白轻链3-II/LC3-I比值升高，p62蛋白表达降低，诱导型一氧化氮合酶和环氧合酶2蛋白表达下调。体外模型中，使用GSE-1和RAW264.7细胞验证了相关机制。此外，α-倒捻子素增加了Ligilactobacillus和Muribaculum的丰度以及丙酸和丁酸的含量。因此，α-倒捻子素具有抗氧化和抗炎特性，并通过可能涉及调节Nrf2/HO-1通路和NF-κB/NLRP3/caspase-1通路的机制重塑肠道菌群失调，还能增加丙酸和丁酸的含量。本研究为使用α-倒捻子素治疗胃溃疡提供了新的证据。
实验结论
提炼研究问题、关键发现与证据，快速把握文章的核心贡献。
- 研究问题
- α-倒捻子素是否可以缓解乙醇诱导的胃溃疡，其潜在机制是否涉及氧化应激、炎症、自噬和肠道微生物群调节？
- 核心机制
- α-倒捻子素通过激活Nrf2/HO-1通路、抑制NF-κB/NLRP3/caspase-1通路、调节自噬以及重塑肠道菌群（增加Ligilactobacillus和Muribaculum丰度，提高丙酸和丁酸含量）发挥胃保护作用。
- 主要证据
- 体内大鼠模型显示α-倒捻子素减轻胃黏膜损伤、降低ROS和促炎细胞因子、激活Nrf2/HO-1、抑制NF-κB/NLRP3/caspase-1、增加LC3-II/LC3-I比值并降低p62；体外GES-1和RAW264.7细胞模型验证了氧化应激和炎症相关蛋白表达的变化；16S rRNA测序和SCFAs分析显示肠道菌群和代谢产物改善。
- 研究意义
- 该研究首次证明α-倒捻子素通过调节肠道菌群和SCFAs水平具有治疗胃溃疡的潜力，为胃溃疡治疗提供了新的策略。
研究路径
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
建立乙醇诱导的胃溃疡大鼠模型并评估胃保护作用
评估α-倒捻子素对乙醇诱导胃溃疡的宏观和微观保护作用。
SD大鼠随机分为6组，分别给予不同剂量α-倒捻子素或阳性药雷尼替丁，连续7天，然后灌胃95%乙醇诱导溃疡。1小时后处死，采集胃组织进行肉眼观察、H&E染色和PAS染色。
检测胃组织氧化应激指标和Nrf2/HO-1通路及自噬蛋白
评估α-倒捻子素对乙醇诱导的氧化应激和自噬的影响。
通过ROS染色、ELISA检测MDA、SOD、GSH水平，Western blot检测Nrf2、HO-1、p62、LC3蛋白表达。
检测胃组织炎症因子和NF-κB/NLRP3/caspase-1通路蛋白
评估α-倒捻子素对炎症反应及信号通路的影响。
ELISA检测TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-10、PGE2、NO；Western blot检测iNOS、COX-2、p-IKKα/IKKα、p-p65/p65、NLRP3、caspase-1蛋白表达。
体外细胞模型验证机制
在体外验证α-倒捻子素对氧化应激和炎症的调控作用。
GES-1细胞用1%乙醇诱导，RAW264.7细胞用LPS（100 ng/mL）诱导，分别用不同浓度α-倒捻子素（10, 20, 40 μM）处理，检测氧化应激指标、炎症因子和通路蛋白。
16S rRNA基因测序分析肠道菌群
评估α-倒捻子素对乙醇诱导胃溃疡大鼠肠道菌群多样性和组成的影响。
提取粪便DNA，扩增16S rRNA V4区，利用Illumina NovaSeq 6000测序，分析α多样性、β多样性、物种组成和差异菌群。
气相色谱分析短链脂肪酸
测定粪便中短链脂肪酸（丙酸、丁酸等）的含量。
收集粪便样本，处理后用气相色谱（TRACE 1300）配TR-FAME色谱柱分析SCFAs。
研究方法
按研究目的归类文中使用的方法，便于定位所需技术。
产品清单
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 药物处理 | α-倒捻子素 | Millipore Sigma | MFCD00135200 |
| 阳性对照药物 | 雷尼替丁 | Absin Bioscience | abs814762 |
| ELISA检测 | IL-1β ELISA试剂盒 | Neobioscience Technology | EMC001b.48 |
| IL-6 ELISA试剂盒 | Neobioscience Technology | EMC004.48 | |
| IL-10 ELISA试剂盒 | Neobioscience Technology | EMC005.48 | |
| TNF-α ELISA试剂盒 | Neobioscience Technology | EMC102a.48 | |
| PGE2 ELISA试剂盒 | Elabscience Biotechnology | E-EL-0034c | |
| 造模剂 | 乙醇（95%） | Sinopharm Chemical Reagent Co. | 10009128 |
| 蛋白定量 | BCA蛋白定量试剂盒 | Beyotime Biotechnology | P0012S |
| 蛋白提取 | RIPA裂解液 | Beyotime Biotechnology | P0013 |
| 氧化应激检测 | SOD检测试剂盒 | Beyotime Biotechnology | S0086 |
| GSH检测试剂盒 | Beyotime Biotechnology | S0057S | |
| MDA检测试剂盒 | Beyotime Biotechnology | S0131S | |
| Western blot | 抗p-IKKα抗体 | Cell Signaling Technology | 7355 |
| 抗IKKα抗体 | Cell Signaling Technology | 9242 | |
| 抗p-p65抗体 | Cell Signaling Technology | 3033 | |
| 抗p65抗体 | Cell Signaling Technology | 6956 | |
| 抗Nrf2抗体 | ABclonal Technology | A1244 | |
| 抗p62抗体 | ABclonal Technology | A19700 | |
| 抗β-actin抗体 | ABclonal Technology | AC026 | |
| 抗LC3抗体 | ABclonal Technology | A5618 | |
| HRP标记的山羊抗兔IgG | ABclonal Technology | AS014 | |
| 抗HO-1抗体 | ABclonal Technology | A19062 | |
| 抗COX-2抗体 | Servicebio Biotechnology | GB111037-100 | |
| 抗NLRP3抗体 | Servicebio Biotechnology | GB114320-100 | |
| 抗caspase-1抗体 | Servicebio Biotechnology | GB11383-100 | |
| 细胞培养 | RPMI-1640培养基 | HyClone | SH30027.01 |
| 高糖DMEM | HyClone | SH30243 | |
| 磷酸盐缓冲液 | HyClone | SH30256 | |
| 青霉素-链霉素 | Gibco Life Technologies | 15140122 | |
| 胰蛋白酶 | Gibco Life Technologies | 25200056 | |
| 胎牛血清 | Gibco Life Technologies | 26010066 | |
| 细胞活力检测 | MTT | Shanghai YuanYe Biotechnology | R20227 |
| 吸光度检测 | 酶标仪（Spark 20 M Sunrise） | Tecan Trading | -- |
| Western blot | 电泳仪 | Liuyi Biotechnology | -- |
| 小型转印槽 | Liuyi Biotechnology | -- | |
| 电泳电源 | Liuyi Biotechnology | -- | |
| HPLC分析 | HPLC色谱柱（Nucleosil C18） | Dionex-Ultimate | -- |
| 显微镜观察 | 光学显微镜（AE2000） | Motic | -- |
| 荧光显微镜观察 | 荧光显微镜（ECLIPSE Ti2） | Nikon | -- |
| 16S rRNA测序 | DNA提取试剂盒（MN NucleoSpin 96 Soi） | Macherey-Nagel | -- |
| Illumina NovaSeq 6000测序平台 | Illumina | -- | |
| SCFA分析 | 气相色谱仪（TRACE 1300） | Thermo Fisher Scientific | -- |
关键环节
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 动物实验 | 大鼠品系、年龄、体重、饲养环境；分组（对照组、模型组、α-mangostin低/中/高剂量组、阳性对照组）；给药途径、剂量、频率和持续时间；乙醇诱导剂量和方式；禁食时间；麻醉和处死方法；样本收集方法 阅读提示：Materials and methods 2.3 和 2.4；Figure legends Fig.1 |
| 细胞实验（GES-1和RAW264.7） | 细胞系来源；培养基和添加剂；培养条件；接种密度；MTT实验的浓度范围和处理时间；α-mangostin浓度选择（10、20、40 μM）；乙醇或LPS诱导浓度和时间；对照组和处理组设置 阅读提示：Materials and methods 2.6；Supplementary Fig. S2 |
| 氧化应激和炎症指标检测 | 组织或细胞的处理和匀浆方法；ROS检测的染色步骤和时间；MDA、SOD、GSH检测试剂盒的具体操作步骤；ELISA试剂盒的型号和操作步骤；Western blot的抗体（名称、品牌、货号、稀释比例）、蛋白上样量、电泳和转膜条件 阅读提示：Materials and methods 2.7-2.10；Figure legends Figs.2-5 |
| 肠道菌群分析 | 粪便样本采集时间和保存方法；DNA提取试剂盒；16S rRNA引物序列；PCR条件；测序平台；生物信息学分析软件和参数（如OTU聚类阈值、α/β多样性分析）；差异菌群分析方法 阅读提示：Materials and methods 2.11；Figure legends Fig.6 |
| SCFA检测 | 粪便样本量；前处理步骤；色谱柱型号；GC参数（温度、流速、进样量）；标准品和定量方法 阅读提示：Materials and methods 2.12；Figure legends Fig.6 |