建立香烟烟雾诱导的小鼠肺炎模型
模拟吸烟引起的肺部炎症，评估EBN的预防效果。
BALB/c小鼠随机分为对照组、模型组、阳性药组、低剂量EBN组和高剂量EBN组，除对照组外，每日暴露于4支香烟烟雾一次，持续8天；从建模开始同时灌胃给药，持续15天。
关于丁香通
公司信息
个人用户
企业机构
无忧采购 轻松科研
- 移动端
食用燕窝通过TNFR1/NF-κB/NLRP3通路减轻烟草烟雾吸入引起的肺炎
Edible bird's nest alleviates pneumonia caused by tobacco smoke inhalation through the TNFR1/NF-κB/NLRP3 pathway.
实验完整度
高包含体内动物模型（BALB/c小鼠烟雾暴露）和体外细胞模型（A549细胞TNF-α刺激），并进行了组织病理学、免疫组化、Western blot、ELISA、CCK8等实验，验证了功能（减轻炎症）和机制（TNFR1/NF-κB/NLRP3通路）。
主要模型
BALB/c小鼠（香烟烟雾诱导肺炎模型） A549人肺泡基底上皮细胞（TNF-α诱导肺炎模型）
重点核对
小鼠模型：BALB/c小鼠，每日暴露于4支香烟烟雾，持续8天 EBN剂量：低剂量0.008 g，高剂量0.019 g，灌胃给药15天 体外模型：A549细胞，TNF-α（10 ng/mL）处理2小时，EBN预处理24小时 检测指标：血清和肺组织中IL-6、TNF-α、IL-8、IL-10水平，以及NLRP3、TNFR1、p-IκBα、p-p65蛋白表达
摘要
接触香烟烟雾会直接损伤肺部并引起肺部炎症。据报道，食用燕窝（EBN）具有抗炎特性。我们旨在确定EBN在暴露于香烟烟雾的小鼠模型中对肺炎的影响。将50只BALB/c小鼠随机分为对照组、模型组、阳性药组、低剂量EBN组和高剂量EBN组（每组n=10）。除对照组外，每组小鼠每天暴露于4支香烟烟雾中，持续8天。此外，我们验证了EBN对A549细胞的影响，并研究了EBN减轻肺部炎症的机制。食用燕窝（EBN）可以减轻小鼠肺组织的结构损伤和烟雾诱导的炎症反应。高剂量EBN（0.019克）效果最佳。与模型组相比，经EBN处理的小鼠抵抗香烟烟雾刺激的能力更强，表现为血清和肺部炎症标志物（白细胞介素6 [IL-6]、肿瘤坏死因子-α [TNF-α]和白细胞介素8 [IL-8]）降低，血清白细胞介素10（IL-10）水平升高，以及炎症小体NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NLRP3）表达降低。此外，我们的细胞实验表明，EBN主要通过抑制肿瘤坏死因子受体1（TNFR1）/核因子-κB（NF-κB）/NLRP3通路来减轻香烟烟雾诱导的肺部炎症。这些发现为EBN对肺部的积极营养品质提供了理论证据，证明其抑制TNFR1/NF-κB/NLRP3信号通路，从而阻止香烟烟雾诱导的肺部炎症的发展。
实验结论
提炼研究问题、关键发现与证据，快速把握文章的核心贡献。
- 研究问题
- 食用燕窝（EBN）是否能减轻香烟烟雾诱导的肺部炎症，其潜在机制是什么？
- 核心机制
- EBN通过抑制TNFR1/NF-κB/NLRP3信号通路减轻肺部炎症：抑制TNFR1表达，减少IκBα磷酸化，阻断NF-κB p65磷酸化，下调NLRP3炎症小体表达。
- 主要证据
- 动物实验中，EBN降低血清和肺组织中促炎细胞因子（IL-6、TNF-α、IL-8）水平，升高抗炎因子IL-10，并减少肺组织NLRP3表达（IHC和Western blot）。体外实验中，EBN促进A549细胞增殖，降低IL-6、IL-8，升高IL-10，并抑制NLRP3、TNFR1、p-IκBα和p-p65的表达（Western blot和免疫荧光）。
- 研究意义
- 研究首次证明EBN通过TNFR1/NF-κB/NLRP3通路减轻香烟烟雾诱导的肺炎，为EBN预防烟草危害和开发基于EBN的特殊医学用途食品提供了理论依据，也为慢性肺病干预提供了分子靶点。
研究路径
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
评估EBN对小鼠肺组织病理损伤的影响
观察EBN是否能减轻香烟烟雾引起的肺组织结构损伤。
通过H&E染色观察肺组织病理变化，并采用Smith肺损伤评分进行量化。
检测EBN对小鼠全身和肺部炎症因子的影响
评估EBN对香烟烟雾诱导的全身和局部炎症反应的调节作用。
采用ELISA检测血清中IL-6、TNF-α、IL-10水平，以及肺组织中IL-8和TNF-α水平。
检测EBN对小鼠肺组织NLRP3炎症小体表达的影响
探究EBN减轻炎症反应是否与抑制NLRP3炎症小体有关。
通过免疫组化染色检测肺组织NLRP3的表达，并进行阳性面积评分。
建立TNF-α诱导的A549细胞肺炎模型并评估EBN的细胞保护作用
在体外验证EBN对肺泡上皮细胞损伤的保护作用及其对细胞增殖的影响。
用不同浓度TNF-α处理A549细胞确定最适浓度，然后用不同浓度EBN预处理，再用TNF-α刺激，通过CCK8检测细胞活力。
检测EBN对A549细胞炎症因子表达的影响
确认EBN在体外对促炎和抗炎细胞因子的调节作用。
通过ELISA检测细胞培养上清中IL-6、IL-8和细胞裂解液中IL-10的水平。
检测EBN对A549细胞NLRP3炎症小体表达的影响
验证EBN在体外是否通过抑制NLRP3表达来减轻炎症。
通过免疫荧光染色和Western blot检测NLRP3蛋白表达。
检测EBN对A549细胞NF-κB通路相关蛋白表达的影响
揭示EBN抑制NLRP3表达的分子机制是否涉及NF-κB通路。
通过Western blot检测TNFR1、p-IκBα、IκBα、p-p65、p65的表达。
研究方法
按研究目的归类文中使用的方法，便于定位所需技术。
产品清单
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 样本制备 | 胃蛋白酶 | -- | -- |
| 胰蛋白酶 | -- | -- | |
| 动物实验 | 香烟 | Shanghai Tobacco Group Co., Ltd. | -- |
| 百合固金汤 | Tongrentang | JST68000061 | |
| 组织病理学 | 二甲苯 | Keao | S1763 |
| 乙醇 | LookChem | 213-3 | |
| 石蜡 | Leica | -- | |
| 伊红 | -- | -- | |
| 光学显微镜 | Yoke Instrument | XSP-8CA | |
| 免疫组织化学 | 山羊血清 | -- | -- |
| 抗NLRP3抗体 | Affinity | DF7438 | |
| 辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔IgG (H+L) | Beyotime | A0208 | |
| Western blot | RIPA裂解液 | Thermo Scientific | 89901 |
| 蛋白磷酸酶抑制剂 | Solarbio | P1260 | |
| SDS-PAGE上样缓冲液 | Solarbio | P1040 | |
| PVDF膜 | Millipore | -- | |
| 牛血清白蛋白 | -- | -- | |
| 抗TNFR1抗体 | Abcam | ab259817 | |
| 抗磷酸化IκBα抗体 | Cell Signaling Technology | 9246S | |
| 抗NF-κB磷酸化p65抗体 | Cell Signaling Technology | 3033S | |
| 抗IκBα抗体 | Cell Signaling Technology | 4812S | |
| 抗NF-κB p65抗体 | Abcam | ab16502 | |
| 抗β-肌动蛋白抗体 | Cell Signaling Technology | 3700S | |
| 辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔IgG (H+L) | Beyotime | A0208 | |
| 发光图像分析仪 | GE Healthcare Bio-Sciences AB | -- | |
| 免疫荧光 | 肿瘤坏死因子-α | PeproTech | 300-01A-50UG |
| Triton X-100 | -- | -- | |
| 二抗 | Beyotime | A0468 | |
| 4',6-二脒基-2-苯基吲哚 | Solarbio | C0065 | |
| 抗荧光淬灭封片液 | Beyotime | P0126 | |
| 共聚焦激光扫描显微镜 | Zeiss | LSM900 | |
| ELISA | 组织匀浆器 | MP Biomedicals | FastPrep-24 |
| 小鼠IL-8 ELISA试剂盒 | Keao | KA10943 | |
| 小鼠TNF-α ELISA试剂盒 | MultiSciences | EK282HS/3-96 | |
| 小鼠IL-6 ELISA试剂盒 | MultiSciences | EK206HS-96 | |
| 小鼠IL-10 ELISA试剂盒 | MultiSciences | EK210/4-96 | |
| 人IL-6 ELISA试剂盒 | MultiSciences | EK106HS-96 | |
| 人IL-8 ELISA试剂盒 | Sinoukbio | HY-H0008 | |
| 人IL-10 ELISA试剂盒 | MultiSciences | EK110HS-96 | |
| 细胞培养 | A549细胞系 | Procell Life Science & Technology Co., Ltd. | -- |
| 专用培养基 | Procell | CM-0016 | |
| 胰蛋白酶 | -- | -- | |
| CCK8检测 | 细胞计数试剂盒-8 | Dojindo | CK04 |
| 多功能微孔板检测仪 | BioTek Instruments | 16113019 |
关键环节
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 动物实验 | 小鼠品系、周龄、分组、每组样本量、烟雾暴露频率、持续时间、给药剂量和途径 阅读提示：2.2 Animal experiments; Figure 1(a) |
| EBN制备 | EBN来源、制备浓度、煮沸条件、模拟消化液成分、消化时间、pH、温度、酶活性 阅读提示：2.1 EBN sample preparation and simulated digestion |
| 细胞实验 | A549细胞培养条件、细胞接种密度、EBN处理浓度和时间、TNF-α浓度和时间 阅读提示：2.8 Cell culture and cell proliferation activity test |
| 炎症因子检测 | ELISA检测的样本类型（血清、肺组织、细胞上清）、细胞因子种类、试剂盒来源 阅读提示：2.7 Enzyme-linked immunosorbent assay |
| 蛋白表达检测 | Western blot抗体、稀释比例、蛋白上样量、电泳条件、转膜条件；免疫组化抗体、稀释比例、显色时间 阅读提示：2.4 Immunohistochemical staining; 2.5 Western blot |