人牙周膜干细胞成骨分化与巨噬细胞M2极化可能由EphB4/ephrinB2信号通路介导：直接共培养研究

背景：牙周组织再生可通过牙周膜干细胞（PDLSCs）调节免疫系统实现。然而，具体的信号或分子机制尚未报道。间充质干细胞（MSCs）与巨噬细胞（Mφ）的相互作用是近年来研究的焦点。本研究旨在探讨人牙周膜干细胞（hPDLSCs）与巨噬细胞直接共培养对hPDLSCs成骨分化和巨噬细胞极化的影响，并探讨EphB4/ephrinB2信号通路在共培养的hPDLSCs和巨噬细胞相互作用中的潜在参与。方法：从人牙周膜分离的hPDLSCs与由THP-1诱导的非活化M0巨噬细胞（M0-Mφ）共培养。采用定量逆转录聚合酶链反应（qRT-PCR）、碱性磷酸酶（ALP）染色和活性测定以及茜素红染色（ARS）评估hPDLSCs的成骨分化。采用qRT-PCR和酶联免疫吸附测定（ELISA）检测巨噬细胞极化相关因子的表达。采用Western Blot检测EphB4、ephrinB2、ERK1/2和STAT3的表达。结果：当M0-Mφ与hPDLSCs以5:1的比例直接共培养时，共培养系统显著促进hPDLSCs的成骨分化，表现为增强的ALP染色/活性、ARS矿化和成骨标志物（RUNX2、ALP、OCN/BGLAP和OPN/SPP1）mRNA表达上调。同时，共培养系统显著增加抗炎因子表达（TGF-β1和IL-10）并降低促炎因子（TNF-α和IL-1β），表明交替活化巨噬细胞（M2-Mφ）极化增强。EphB4和ephrinB2的mRNA和蛋白表达随着两种细胞共培养时间的延长而显著增加。然而，药理学阻断EphB4/ephrinB2信号通路与共培养系统中hPDLSC成骨分化、M2巨噬细胞极化和p-STAT3表达的降低相关。结论：我们的数据表明EphB4/ephrinB2通路在共培养系统中hPDLSCs的成骨分化和M2-Mφ极化中具有潜在的介导作用。其对hPDLSCs成骨分化的调节作用可能涉及STAT3信号通路。