构建KOA大鼠模型及分组
建立KOA模型并设置对照组、模型组、治疗组和阳性对照组。
雌性SD大鼠经手术切断内侧副韧带并切除内侧半月板和前交叉韧带诱发退化性KOA,随机分为Sham、Model、CKA-L治疗组和吡罗昔康组。
Efficacy and Potential Mechanisms of Yi-Ping Lin Circum-Knee Acupuncture in the Treatment of Knee Osteoarthritis.
包含动物模型、ELISA、X-ray、组织染色、转录组测序、RT-qPCR和Western blot等多个独立证据层级,并进行了功能验证和机制验证。
雌性SD大鼠KOA模型 CKA-L治疗组 吡罗昔康阳性对照组
模型构建方法:切断内侧副韧带、切除内侧半月板和前交叉韧带 CKA-L治疗频率:每周3次,持续4周 吡罗昔康给药剂量:12 mg/kg,每日一次灌胃 样本量:每组3只(转录组测序每组4个样本) 关节炎指数评分:4点评分系统
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
建立KOA模型并设置对照组、模型组、治疗组和阳性对照组。
雌性SD大鼠经手术切断内侧副韧带并切除内侧半月板和前交叉韧带诱发退化性KOA,随机分为Sham、Model、CKA-L治疗组和吡罗昔康组。
在KOA模型上实施CKA-L针刺治疗。
选择内、外膝眼、鹤顶和委中穴位,施以平补平泻手法,留针30分钟。
验证CKA-L对KOA的治疗效果。
记录体重、关节炎指数(AI),X射线观察关节间隙,HE和甲苯胺蓝染色观察软骨形态,ELISA检测IL-1β和TNF-α。
鉴定CKA-L治疗KOA的差异表达基因和关键通路。
对Sham、Model和Treatment组进行RNA-seq,鉴定DEGs,并进行GO和KEGG富集分析及PPI网络分析。
验证转录组筛选出的核心基因的mRNA和蛋白表达变化。
采用RT-qPCR验证mRNA表达,Western blot验证蛋白表达。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 动物麻醉 | 异氟烷 | -- | -- |
| CKA-L治疗 | 针灸针 | -- | -- |
| ELISA | IL-1β ELISA试剂盒 | Elabscience | E-EL-R0012c |
| TNF-α ELISA试剂盒 | Elabscience | E-EL-R2856c | |
| 酶标仪 | BIO-TEK | ELx800 | |
| 组织切片 | 石蜡切片机 | Leica | -- |
| 染色 | 伊红 | -- | -- |
| 甲苯胺蓝染色液 | -- | -- | |
| 番红O溶液 | -- | -- | |
| 固绿溶液 | -- | -- | |
| 转录组测序 | TRIzol试剂 | Lifetech | 15596026 |
| RT-qPCR | FastKing RT cDNA试剂盒 | Tiangen | KR116 |
| Taq Pro Universal SYBR qPCR预混液 | Vazyme | Q712-02 | |
| 7500实时荧光定量PCR系统 | Applied Biosystems | -- | |
| Western blot | RIPA裂解液 | Beyotime | P0013B |
| PVDF膜 | -- | -- | |
| Immobilon Western化学发光HRP底物 | Millipore | WBKLS0100 | |
| 小鼠抗β-actin单克隆抗体 | Zhongsui Jinqiao | TA-09 | |
| Bgn抗体 | Proteintech | 16409-1-AP | |
| Serpine1抗体 | Bioss | bs-1704R | |
| Ctsb抗体 | Bioss | bs-1500R | |
| Tnfaip6抗体 | Proteintech | 13321-1-AP | |
| Lum抗体 | Proteintech | 10677-1-AP | |
| 山羊抗小鼠IgG-HRP | Abmart | M21001L | |
| 山羊抗兔IgG-HRP | Abmart | M21002L | |
| 统计分析与可视化 | SPSS软件 | IBM | v 23.0 |
| Origin软件 | OriginLab Corporation | v 2021 | |
| X-ray成像 | 动物便携式X射线诊断系统 | Hitachi | HF100Ha |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| KOA模型构建 | 手术方法:切断内侧副韧带、切除内侧半月板和前交叉韧带;麻醉剂量;青霉素粉剂量 阅读提示:Methods - Degenerative Knee Osteoarthritis Model |
| CKA-L治疗 | 穴位选择:内、外膝眼、鹤顶、委中;针刺深度:3-5 mm(膝眼、鹤顶)和5-7 mm(委中);留针时间:30分钟;治疗频率:每周3次,持续4周 阅读提示:Methods - Yi-Ping Lin Circum-Knee Acupuncture Treatment Methods and Prognostic Assessment |
| 吡罗昔康给药 | 给药剂量:12 mg/kg;给药方式:灌胃;给药频率:每日一次 阅读提示:Methods - Degenerative Knee Osteoarthritis Model |
| ELISA检测 | 滑液收集方法:注射0.2 mL蒸馏水至关节腔并反复抽吸;ELISA试剂盒型号;检测波长450 nm 阅读提示:Methods - ELISA |
| 转录组测序 | 样本分组:Sham、Model、Treatment,每组4个样本;RNA提取方法:TRIzol;测序平台:Illumina;差异筛选阈值:|log2(Fold Change)| ≥ 1,padj ≤ 0.05 阅读提示:Methods - Transcriptome Analysis |
| RT-qPCR | 内参基因:β-actin;PCR循环条件:95°C 10 min; 95°C 15s; 60°C 30s; 40-45个循环;相对定量方法:2^(-ΔΔCt) 阅读提示:Methods - RT-qPCR |
| Western blot | 蛋白质提取:RIPA裂解液(含蛋白酶抑制剂);SDS-PAGE凝胶浓度:10%;一抗孵育:4°C过夜;二抗孵育;化学发光底物 阅读提示:Methods - Western Blot |