建立PCPA失眠大鼠模型
模拟失眠状态,为评估ATAS-EMIT疗效提供模型基础。
通过腹腔注射PCPA连续2天建立失眠模型,并观察行为学变化确认造模成功。
ATAS-EMIT Activates the 5-HT/AC/cAMP Pathway to Ameliorate Insomnia in PCPA Insomniac Rats.
包含行为学实验、蛋白表达检测(ELISA/WB/IF)、转录组测序及RT-qPCR验证等多个独立证据层级,且包含功能验证和机制验证。
SD大鼠PCPA诱导失眠模型 大鼠海马组织 大鼠海马组织切片
PCPA剂量及给药方式:45 mg/mL,腹腔注射1 mL/100 g,连续2天 ATAS-EMIT治疗时间及频次:造模成功后次日开始,每日1次,共6次 行为学测试条件:旷场实验10 min,戊巴比妥钠协同睡眠实验(45 mg/kg) 分子检测:ELISA检测5-HT、AC、cAMP;Western blot和IF检测5HT1AR/5HT2AR
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
模拟失眠状态,为评估ATAS-EMIT疗效提供模型基础。
通过腹腔注射PCPA连续2天建立失眠模型,并观察行为学变化确认造模成功。
验证ATAS-EMIT对失眠大鼠的治疗效果。
对治疗组实施ATAS-EMIT针刺,对假针组模拟针刺,对照组和模型组给予相同抓取刺激。
评估ATAS-EMIT对失眠大鼠焦虑样行为和睡眠的改善效果。
通过旷场实验、戊巴比妥钠协同睡眠实验和悬尾实验评估大鼠行为。
检测失眠相关指标5-HT、AC、cAMP及受体表达,验证5-HT/AC/cAMP通路参与。
取海马组织,采用ELISA检测5-HT、AC、cAMP水平,Western blot和免疫荧光检测5HT1AR和5HT2AR表达。
探索ATAS-EMIT治疗失眠的更多潜在机制。
提取海马组织RNA进行转录组测序,鉴定差异表达基因,进行GO和KEGG富集分析。
筛选并验证与ATAS-EMIT治疗失眠相关的关键基因。
通过PPI网络分析筛选关键基因,并用RT-qPCR验证其表达。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 失眠模型建立 | 对氯苯丙氨酸 | Sigma | 7424-00-2 |
| 针刺干预 | 0.18×13 mm毫针 | -- | -- |
| ELISA检测 | 血清素5-羟色胺(5-HT)ELISA试剂盒 | Elabscience | E-EL-0033 |
| 大鼠腺苷酸环化酶(AC)ELISA试剂盒 | Mlbio | JL21346 | |
| 环磷酸腺苷(cAMP)ELISA试剂盒 | Elabscience | E-EL-0056 | |
| 蛋白质提取 | RIPA裂解液 | Biotronik | P0013B |
| Western blot | 兔抗β-肌动蛋白单克隆抗体 | Zhongsui Jinqiao | TA-09 |
| 兔抗5HT1A受体抗体 | Bioss | bs-1124R | |
| 兔抗5HT2A受体抗体 | Bioss | bs-1056R | |
| 小鼠抗山羊抗小鼠IgG-HRP | Abmart | M21001L | |
| 山羊抗兔IgG-HRP | Abmart | M21002L | |
| 5200Multi化学发光仪 | Tanon | -- | |
| 免疫荧光 | 荧光488标记的山羊抗兔IgG(H+L) | KPL | 5230-0385 |
| RNA提取 | TRIzol试剂 | Lifetech | 15596026 |
| 逆转录 | FastKing RT cDNA(含gDNase)试剂盒 | Tiangen | KR116 |
| RT-qPCR | Taq Pro Universal SYBR qPCR预混液 | Vazyme | Q712-02 |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 失眠模型建立 | PCPA浓度、剂量、给药时间、给药途径;大鼠品系、性别、体重;模型成功标准 阅读提示:Methods中 'Insomnia Model' 部分 |
| ATAS-EMIT针灸干预 | 针刺穴位、针刺深度、留针时间、治疗频率和总疗程 阅读提示:Methods中 'ATAS-EMIT Acupuncture Intervention' 部分 |
| 行为学评估 | 旷场实验装置尺寸、适应时间、测试时长;戊巴比妥钠剂量、睡眠判定标准;悬尾测试悬挂高度、测试时间 阅读提示:Methods中 'Behavioral Assessment' 部分 |
| 分子表达检测 | ELISA试剂盒型号、Western blot上样量、一抗和二抗稀释比、免疫荧光切片厚度和抗体稀释比 阅读提示:Methods中 'ELISA'、'Western Blot'、'Immunofluorescence (IF)' 部分 |
| 转录组测序及验证 | RNA提取方法、文库构建、测序平台、差异基因筛选阈值;RT-qPCR引物序列、内参基因 阅读提示:Methods中 'Transcriptome Sequencing and Functional Enrichment Analysis' 和 'RT-qPCR' 部分 |
| 统计分析 | 分组方式、样本量、正态性和方差齐性检验、组间比较方法、显著性水平 阅读提示:Methods中 'Statistical Analysis' 部分 |