SPHK1介导的M2巨噬细胞极化驱动TGF-β1依赖性血栓纤维化

背景与目的：静脉血栓纤维化导致血栓后综合征（PTS）和慢性血栓栓塞性肺高血压（CTEPH）。M2巨噬细胞通过分泌TGF-β1促进纤维化。本研究探讨鞘氨醇激酶1（SPHK1）是否通过调节M2巨噬细胞极化促进血栓纤维化。方法：对急性血栓和CTEPH患者的血栓组织进行组织学染色和免疫荧光（IF）。使用单细胞RNA测序（scRNA-seq）表征免疫细胞异质性并鉴定巨噬细胞亚群中SPHK1的表达。在体内，通过下腔静脉（IVC）结扎建立大鼠血栓模型，并给予SPHK1抑制剂PF543以评估其对纤维化和巨噬细胞极化的影响。在体外，骨髓来源巨噬细胞（BMDMs）经M2极化并与成纤维细胞共培养，以评估TGF-β1依赖性成纤维细胞活化。结果：组织学分析显示，与急性血栓相比，CTEPH血栓中ECM沉积和巨噬细胞浸润显著增加。Masson染色显示CTEPH样本中胶原纤维大量积聚。大鼠IVC结扎模型纤维化血栓的免疫荧光分析显示SPHK1和CD68强共表达，表明血栓重塑中存在表达SPHK1的巨噬细胞。scRNA-seq分析进一步揭示SPHK1在M2巨噬细胞亚群中高表达，尤其是在MARCO-1簇中，其表达与TGF-β1分泌密切相关。在体内，PF543治疗显著减少血栓组织中的胶原沉积、TGF-β1表达和M2巨噬细胞极化。在体外，SPHK1敲低显著抑制BMDMs中TGF-β1、Arg1、CD36和FASN的表达，表明促纤维化巨噬细胞功能受到抑制。共培养实验进一步证实M2巨噬细胞通过TGF-β1依赖性机制激活成纤维细胞。结论：本研究证明SPHK1促进M2巨噬细胞极化并驱动TGF-β1依赖性血栓纤维化，强调其在CTEPH进展中的关键作用。PF543对SPHK1的药理学抑制有效减弱纤维化重塑并抑制M2巨噬细胞极化，表明SPHK1可能作为治疗慢性血栓相关纤维化的有前景的靶点。关键词：SPHK1，静脉血栓形成，纤维化，M2巨噬细胞，TGF-β1，单细胞测序。