网络药理学预测
预测SH治疗ARS的潜在靶点和信号通路。
利用SwissTargetPrediction预测SH靶点，从GeneCards、OMIM和DrugBank获取ARS相关基因，取交集后构建PPI网络并进行GO和KEGG富集分析。
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鱼腥草素钠对急性鼻窦炎的双重作用：通过p38 MAPK/ERK通路的抗菌作用与上皮屏障修复
Dual Effects of Sodium Houttuyfonate Against Acute Rhinosinusitis: Antibacterial Action and Epithelial Barrier Repair Through the p38 MAPK/ERK Pathway.
实验完整度
高包含网络药理学预测、体内大鼠模型（症状、CT、病理、ELISA、qPCR）及体外细胞模型（CCK-8、Western blot、qPCR）等多层级验证，并涉及功能验证和机制验证。
主要模型
金黄色葡萄球菌诱导的急性鼻窦炎大鼠模型 LPS刺激的人鼻上皮细胞（HNEpC）损伤模型
重点核对
SH剂量：25、50、100 mg/kg（大鼠） SH浓度：60 μM（体外） LPS浓度：10 μg/mL（体外） MAPK调节剂：SB203580（10 μM）和Anisomycin（10 μM） 干预时间：LPS刺激6小时，SH预处理1小时
摘要
背景：鱼腥草（Houttuynia cordata Thunb）是一种传统药用植物，是鱼腥草素钠（SH）的来源，SH是一种稳定的衍生物，具有抗菌、抗病毒和抗炎活性。急性鼻窦炎（ARS）包括病毒性、病毒后性和细菌性形式；细菌性ARS引起严重的炎症和上皮屏障破坏。尽管临床应用广泛，但SH在ARS中的作用机制尚不清楚。方法：应用网络药理学鉴定SH相关的靶点和通路。通过将浸泡有金黄色葡萄球菌的Merocel海绵插入鼻腔诱导ARS大鼠模型。大鼠接受低、中、高剂量的SH，并设对照组和阳性药物组。进行了症状评分、CT、组织病理学、血液学、ELISA、qRT-PCR和免疫组织化学。在体外，用人鼻上皮细胞（HNEpCs）刺激脂多糖（LPS）并用SH处理，加或不加MAPK调节剂SB203580（抑制剂）或Anisomycin（激活剂）。评估了细胞活力、细胞因子表达和ERK/p38 MAPK磷酸化。结果：SH改善了ARS大鼠的鼻部症状，减少了上皮损伤，并使鼻pH恢复正常。它下调了IL-1β、IL-6、TNF-α和ICAM-1，同时上调了IL-4。透射电子显微镜显示纤毛和线粒体完整性恢复。在HNEpCs中，通过CCK-8测定，60 μM SH是最佳浓度。在LPS刺激的细胞中，SH抑制了IL-1β/IL-6 mRNA并抑制了ERK和p38 MAPK磷酸化；这些效应被Anisomycin逆转，证实了通路参与。结论：SH通过抑制细菌活性和通过抑制p38 MAPK/ERK恢复上皮完整性来减轻ARS中的鼻窦炎症。这些发现支持SH作为上气道炎症性疾病的潜在疗法。
实验结论
提炼研究问题、关键发现与证据，快速把握文章的核心贡献。
- 研究问题
- 鱼腥草素钠（SH）对急性鼻窦炎（ARS）的治疗作用及其潜在机制是什么？
- 核心机制
- SH通过抑制p38 MAPK和ERK1/2的磷酸化，从而抑制下游炎症因子（如IL-1β、IL-6、TNF-α）的表达，并恢复上皮屏障完整性。
- 主要证据
- 在ARS大鼠模型中，SH减轻鼻部症状、改善CT和组织病理学损伤，并降低炎症因子水平；在LPS刺激的HNEpC中，SH抑制ERK和p38磷酸化，且Anisomycin逆转这些效应。
- 研究意义
- SH具有双重抗炎和黏膜保护作用，可能作为治疗急性鼻窦炎及其他上气道炎症性疾病的天然治疗剂。
研究路径
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
建立ARS大鼠模型
模拟细菌性急性鼻窦炎的病理过程。
将无菌Merocel海绵插入大鼠右鼻腔，并滴入10 μL金黄色葡萄球菌悬液（1.2×10^9 CFU/mL）诱导感染。
SH治疗及体内评估
评估SH对ARS大鼠的治疗效果。
造模成功后，大鼠分组并给予不同剂量SH（25、50、100 mg/kg）或阳性药物，通过症状评分、CT、组织病理、ELISA、qPCR和免疫组化评估。
体外细胞模型建立及SH处理
在细胞水平验证SH对LPS诱导的HNEpC损伤的保护作用。
HNEpC细胞用LPS（10 μg/mL）刺激6小时，并分别用SH（60 μM）、SB203580（10 μM）、Anisomycin（10 μM）或SH+Anisomycin预处理1小时，然后检测细胞活力、形态和信号通路。
机制验证
验证SH是否通过抑制p38 MAPK/ERK通路发挥抗炎作用。
通过Western blot检测p-p38、p-ERK水平，通过qPCR检测IL-1β和IL-6 mRNA表达。
研究方法
按研究目的归类文中使用的方法，便于定位所需技术。
产品清单
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 网络药理学预测 | Marvin | -- | -- |
| SwissTargetPrediction | -- | -- | |
| GeneCards | -- | -- | |
| OMIM | -- | -- | |
| DrugBank | -- | -- | |
| STRING | -- | -- | |
| Cytoscape 3.10.2 | -- | -- | |
| DAVID | -- | -- | |
| 动物实验 | Merocel鼻海绵 | -- | -- |
| 鱼腥草素钠 | 上海源叶生物科技有限公司 | 83766-73-8 | |
| 阿莫西林克拉维酸钾片 | 鲁南贝特制药有限公司 | H20053424 | |
| 桉油精、柠檬烯、蒎烯肠溶胶囊 | 北京九和制药有限公司 | H20052401 | |
| 小动物活体micro-CT成像系统（Quantum GX） | Quantum GX | -- | |
| 精密pH试纸 | Sanaisi | -- | |
| 兽用全自动血液分析仪（BC-30Vet） | Mindray | -- | |
| ELISA分析 | IL-1β ELISA试剂盒 | RUIXIN | RX302869R |
| IL-6 ELISA试剂盒 | RUIXIN | RX302870R | |
| IL-4 ELISA试剂盒 | RUIXIN | RX302872R | |
| 免疫组织化学 | TNF-α抗体 | Bioss | BS-10802R |
| ICAM-1抗体 | Proteintech | 16174-1-AP | |
| 组织病理学 | RNAex试剂 | Accurate Biology | AG21101 |
| qRT-PCR | RNA提取试剂盒 | Accurate Biology | AG21101-C |
| 逆转录试剂盒 | Accurate Biology | AG11728 | |
| SYBR Green Premix Pro Taq HS qPCR试剂盒 | Accurate Biology | AG11718 | |
| QuantStudio 5实时荧光定量PCR系统 | Thermo Fisher Scientific | -- | |
| NanoDrop分光光度计 | Thermo Fisher Scientific | -- | |
| 细胞培养 | MEM培养基 | BasaMedia | L550KJ |
| 胎牛血清 | BDBIO | F801-500 | |
| 细胞活力测定 | CCK-8试剂盒 | Biosharp | BS350B |
| 细胞处理 | 脂多糖 | Sigma-Aldrich | 93572-42-0 |
| SB203580 | MedChemExpress | 152121-47-6 | |
| 茴香霉素 | MedChemExpress | 22862-76-6 | |
| Western blot | 磷酸化p38抗体 | Abcam | ab178867 |
| p38抗体 | Abcam | ab170099 | |
| 磷酸化ERK1/2抗体 | Cell Signaling Technology | 4370 | |
| ERK1/2抗体 | Cell Signaling Technology | 4695 | |
| β-微管蛋白抗体 | Proteintech | 10068-1-AP | |
| 山羊抗兔IgG | Immunoway | RS0002 | |
| BCA蛋白测定试剂盒 | Beyotime | P0012-1 | |
| 统计分析 | GraphPad Prism 8.0 | GraphPad | -- |
| 图形摘要 | BioRender | BioRender | -- |
关键环节
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 网络药理学预测 | 数据库版本和参数，如STRING最小交互评分0.9 阅读提示：Materials and Methods中的Network Pharmacology Prediction部分 |
| 建立ARS大鼠模型 | 金黄色葡萄球菌浓度（1.2×10^9 CFU/mL），给药体积（10 μL），造模时间（1周） 阅读提示：Materials and Methods中的Establishment and Grouping of ARS Rat Models部分 |
| 动物分组与给药 | SH剂量（25/50/100 mg/kg），阳性药物剂量（AMC 116 mg/kg，ELAP-EC 92.5 mg/kg），给药途径（口服） 阅读提示：Materials and Methods中的Establishment and Grouping of ARS Rat Models部分 |
| CT成像 | 设备型号（Quantum GX）及扫描参数 阅读提示：Materials and Methods中的CT Imaging of the Paranasal Sinuses部分 |
| pH测量 | 试纸品牌和型号，插入时间（10秒） 阅读提示：Materials and Methods中的Measurement of Nasal Secretion PH部分 |
| 血液学分析 | 血样采集量（1-2 mL），分析仪型号（BC-30Vet），检测参数（WBC、NEU、LYM、MONO） 阅读提示：Materials and Methods中的Detection of Hematological部分 |
| ELISA | 血清制备离心条件（3000 rpm，10分钟，4°C），试剂盒货号（RX302869R等） 阅读提示：Materials and Methods中的ELISA Analysis部分 |
| 免疫组织化学 | 一抗稀释比（1:1000），抗原修复条件（微波加热，柠檬酸盐缓冲液pH 6.0） 阅读提示：Materials and Methods中的Immunohistochemistry of Sinonasal Mucosa Tissue部分 |
| 组织病理学 | 固定液（4%多聚甲醛，2.5%戊二醛），切片厚度等 阅读提示：Materials and Methods中的Histopathological Analysis of Sinonasal Mucosal Tissue部分 |
| qRT-PCR（组织） | RNA提取试剂（RNAex），逆转录和qPCR试剂盒货号，内参基因（GAPDH） 阅读提示：Materials and Methods中的Quantification of mRNA Expression in Sinonasal Mucosa of ARS Rats部分 |
| 细胞培养与处理 | 细胞系（HNEpC）来源和编号（BNCC356247），培养基（MEM+10% FBS），LPS浓度（10 μg/mL）和刺激时间（6小时） 阅读提示：Materials and Methods中的Cell Culture和Cell Treatment部分 |
| CCK-8测定 | 细胞密度（5000/孔），SH浓度梯度（0-240 μM），LPS浓度（10 μg/mL），孵育时间 阅读提示：Materials and Methods中的CCK-8测定部分 |
| Western blot | 蛋白上样量（30 μg），一抗稀释比，检测蛋白（p38、p-p38、ERK、p-ERK） 阅读提示：Materials and Methods中的Western Blot部分 |