临床疗效评估
评估JQP对OA患者临床症状和实验室指标的影响
招募OA患者和健康对照,JQP治疗1个月,检测ESR、hs-CRP、TC、TG等指标,评估VAS、SAS、SDS评分,并进行关联规则分析。
Validation of Jianpi Qingre Tongluo Recipe in Reducing Inflammation and Dyslipidemia in Osteoarthritis via Lnc RNA HOTAIR/APN/PI3K/AKT.
包含临床数据挖掘、网络药理学、分子对接和体外细胞实验,具有多个证据层级,但缺乏动物实验验证。
OA患者外周血单核细胞(PBMC)与软骨细胞(OA-CH)共培养模型 SD大鼠含药血清制备模型
JQP给药方案:XFC 3粒/次,3次/天;HQC 3粒/次,3次/天,持续1个月(临床部分) JQP含药血清制备:SD大鼠灌胃JQP 2.592 g/kg,连续7天,血清添加浓度为20% PBMC刺激浓度筛选:CCK-8法确定最佳刺激浓度(具体浓度文中未明确) HOTAIR转染:pcDNA3.1-LncRNA HOTAIR或si-LncRNA HOTAIR质粒,Lipofectamine 2000转染,孵育24小时
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
评估JQP对OA患者临床症状和实验室指标的影响
招募OA患者和健康对照,JQP治疗1个月,检测ESR、hs-CRP、TC、TG等指标,评估VAS、SAS、SDS评分,并进行关联规则分析。
预测JQP治疗OA的潜在靶点和通路
通过TCMSP筛选JQP活性成分,收集药物和疾病靶点,构建化合物-靶点网络、PPI网络,进行GO和KEGG富集分析。
验证核心靶点与JQP活性成分的结合活性
使用AutoDock Vina进行分子对接,计算结合能,可视化最优对接结果。
模拟OA炎症微环境,验证PBMCs对软骨细胞的影响
将OA患者PBMCs与OA软骨细胞共培养,检测HOTAIR表达及炎症因子和APN水平。
验证HOTAIR对软骨细胞活力、炎症因子和APN/PI3K/AKT通路的影响
通过过表达或敲低HOTAIR,检测细胞活力、炎症因子水平、APN表达及PI3K/AKT磷酸化。
验证APN和PI3K/AKT通路在HOTAIR调控中的作用
使用PI3K/AKT抑制剂或过表达APN,检测HOTAIR对细胞活力、炎症因子和通路蛋白的影响。
验证JQP含药血清对共培养细胞的保护作用及机制
JQP含药血清干预共培养细胞,检测HOTAIR表达、炎症因子水平、APN及PI3K/AKT通路变化。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 细胞培养 | DMEM培养基 | Hyclone | SH30022.01 |
| 胎牛血清 | BI | 04-001-1ACS | |
| 胰酶 | Beyotime | C0205 | |
| 青霉素 | -- | -- | |
| 链霉素 | -- | -- | |
| 细胞转染 | Lipofectamine 2000转染试剂 | -- | -- |
| RT-qPCR | Trizol试剂 | -- | -- |
| PrimeScript RT试剂盒(含gDNA Eraser) | TaKaRa | RR047A | |
| Novostart SYBR qPCR SuperMix Plus | novoprotein | E096-01B | |
| ELISA | IL-6 ELISA试剂盒 | Wuhan Genmei Technology | JYM0140Hu |
| IL-1β ELISA试剂盒 | Wuhan Genmei Technology | JYM0083Hu | |
| IL-10 ELISA试剂盒 | Wuhan Genmei Technology | JYM0155Hu | |
| IL-4 ELISA试剂盒 | Wuhan Genmei Technology | JYM0142Hu | |
| APN ELISA试剂盒 | Wuhan Genmei Technology | JYM1859Hu | |
| 酶标仪 | Rayto | RT-6000 | |
| CCK-8检测 | CCK-8检测试剂盒 | BIOSS | BA00208 |
| Western blot | SDS-PAGE凝胶制备试剂盒 | Beyotime | -- |
| 电泳仪 | Tanon | EPS300 | |
| 电泳槽 | Tanon | VE-180 | |
| 转膜仪 | Tanon | VE-186 | |
| 免疫荧光 | 荧光显微镜 | -- | -- |
| Western blot | 自动曝光仪 | Shanghai Peiqing Technology | JS-1070P |
| p-AKT抗体 | CST | 4060s | |
| PI3K抗体 | Abcam | ab86714 | |
| PTEN抗体 | Abcam | ab170941 | |
| AKT抗体 | CST | 4691s | |
| p-PI3K抗体 | Abcam | ab182651 | |
| APN抗体 | bioss | bs-0471R | |
| ADIPOR1抗体 | bioss | bs-0610R | |
| ADIPOR2抗体 | bioss | bs-0611R | |
| GAPDH抗体 | Zsbio | TA-08 | |
| 山羊抗小鼠IgG | Zsbio | ZB-2305 | |
| 山羊抗兔IgG | Zsbio | ZB-2301 | |
| 免疫荧光 | 山羊抗兔IgG (FITC) | -- | -- |
| 网络药理学 | 中药系统药理学数据库与分析平台 | -- | -- |
| 动物实验 | 健脾清热通络方 | -- | -- |
| 细胞培养 | Transwell小室 | NEST | 701001 |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 临床研究 | 患者纳入标准、JQP给药方案、观察指标及检测方法 阅读提示:Materials and Methods: Clinical Research |
| 网络药理学 | 活性成分筛选条件(OB≥30%,DL≥0.18)、数据库来源、富集分析参数 阅读提示:Materials and Methods: Network Pharmacology and Molecular Docking |
| 分子对接 | 软件版本、参数设置、结合能阈值 阅读提示:Materials and Methods: Molecular Docking |
| 细胞共培养 | PBMCs提取方法、共培养比例、刺激浓度、培养条件 阅读提示:Materials and Methods: Cell Experiment |
| HOTAIR转染 | 质粒种类、转染试剂、孵育时间、转染效率验证 阅读提示:Materials and Methods: Co-Culture of PBMCs with CHs from OA Patients and Transfection |
| JQP含药血清制备 | 动物品系、周龄、体重、给药剂量、给药时间、血清制备步骤 阅读提示:Materials and Methods: Administration Method of JQP and Preparation of JQP-Medicated Serum |