建立MCAO大鼠模型
建立缺血性卒中动物模型，为后续实验提供基础。
雄性SD大鼠随机分为假手术组和MCAO组，用硅胶线栓阻塞大脑中动脉90分钟，再灌注。
关于丁香通
公司信息
个人用户
企业机构
无忧采购 轻松科研
- 移动端
二氢杨梅素通过拮抗大鼠细胞焦亡减轻缺血性脑损伤
Dihydromyricetin Alleviates Ischemic Brain Injury by Antagonizing Pyroptosis in Rats.
实验完整度
高包含转录组测序、动物模型（MCAO）、神经行为学、TTC/尼氏/TUNEL染色、Western blot、IHC等多层级实验，并进行功能验证和机制验证。
主要模型
Sprague-Dawley大鼠MCAO模型
重点核对
大鼠品系：雄性Sprague-Dawley大鼠，体重280-320g MCAO模型：硅胶线栓阻塞大脑中动脉90分钟 DHM给药：腹腔注射100 mg/kg，再灌注开始时给药，连续7天 对照组：HP-β-CD溶液（4 ml/kg） 样本量：每组8只
摘要
缺血性卒中是一种严重威胁人类健康的世界性疾病，目前有效的治疗药物很少。二氢杨梅素（DHM）具有抗炎、抗氧化和抗凋亡功能。我们鉴定了缺血性卒中后的细胞焦亡。在此，我们研究了DHM对缺血性卒中和细胞焦亡的影响。在实验的第一部分，Sprague-Dawley大鼠被随机分为假手术组和MCAO组。通过硅胶线栓阻塞大脑中动脉90分钟建立MCAO模型。再灌注后1天取缺血半暗带进行mRNA测序。在第二部分，大鼠被分为假手术组、MCAO组和DHM组。在栓塞后90分钟开始再灌注的同时腹腔注射DHM，连续7天。通过形态学和分子学方法观察细胞焦亡的变化。转录组学结果提示建模后存在NLRP3介导的焦亡通路激活。MCAO后Longa评分升高，DHM处理后降低。2,3,5-三苯基氯化四氮唑（TTC）染色显示DHM可减少MCAO诱导的梗死体积。尼氏染色显示MCAO组神经元排列紊乱，尼氏体减少，但DHM处理逆转了这种效应。对焦亡相关分子的分析显示，MCAO组存在严重的细胞焦亡，而DHM有效减少了细胞焦亡。我们的结果表明，DHM对缺血性卒中具有神经保护作用，至少部分通过减少细胞焦亡实现。
实验结论
提炼研究问题、关键发现与证据，快速把握文章的核心贡献。
- 研究问题
- DHM是否能减轻缺血性卒中后的脑损伤，以及其作用是否与抑制细胞焦亡有关？
- 核心机制
- DHM通过抑制NLRP3/caspase-1/GSDMD介导的细胞焦亡通路，减少IL-1β的释放，从而发挥神经保护作用。
- 主要证据
- 在MCAO大鼠模型中，DHM治疗改善了神经行为评分，减少了脑梗死体积，改善了神经元形态，并降低了焦亡相关蛋白（NLRP3、caspase-1、GSDMD-N、IL-1β）的表达，同时减少了TUNEL阳性细胞。
- 研究意义
- 该研究为DHM作为缺血性卒中治疗药物提供了实验依据，并提示其可能通过抑制焦亡和抗炎作用发挥神经保护作用，具有临床转化潜力。
研究路径
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
转录组学分析
探索缺血性卒中后基因表达变化，特别是焦亡相关通路。
再灌注后1天取缺血半暗带进行mRNA测序，鉴定差异表达基因，并进行GO和GSEA富集分析。
DHM给药及神经行为学评估
评估DHM对MCAO大鼠神经功能的影响。
将大鼠分为假手术组、MCAO组和DHM组，再灌注开始时腹腔注射DHM（100 mg/kg）或载体，连续7天，每日进行Longa评分。
评估脑梗死体积和神经元形态
评估DHM对脑组织损伤的改善作用。
第7天取脑，进行TTC染色计算梗死体积，尼氏染色观察神经元形态。
检测细胞焦亡
验证DHM是否抑制MCAO诱导的细胞焦亡。
通过TUNEL染色检测DNA断裂，Western blot和IHC检测焦亡相关蛋白（NLRP3、caspase-1、GSDMD、IL-1β）的表达。
研究方法
按研究目的归类文中使用的方法，便于定位所需技术。
产品清单
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 动物模型 | 硅胶线栓 | Jialing | L3800 |
| 药物处理 | 二氢杨梅素 | Solarbio | SD8280 |
| 羟丙基-β-环糊精溶液 | -- | -- | |
| TTC染色 | 2,3,5-三苯基氯化四氮唑 | Coolaber | CT11531 |
| 尼氏染色 | 尼氏溶液 | Solarbio | G1430 |
| TUNEL染色 | TUNEL染色试剂盒 | Vazyme | -- |
| Western blot | RIPA裂解液 | -- | -- |
| PVDF膜 | -- | -- | |
| 抗NLRP3抗体 | Abcam | ab263899 | |
| 抗caspase-1 p20抗体 | Bioss | bs-10442R | |
| 抗GSDMD抗体 | ABclonal | A20197 | |
| 抗IL-1β抗体 | Abcam | ab283818 | |
| 抗β-微管蛋白抗体 | Applygen | C1340 | |
| 抗β-肌动蛋白抗体 | ZSGB-BIO | TA-09 | |
| 超增强化学发光试剂 | DiNing | DE2002 | |
| IHC | 抗NLRP3抗体 | Abcam | ab263899 |
| 抗IL-1β抗体 | Abcam | ab283818 | |
| mRNA测序 | TRIzol试剂 | Thermofisher | 15596018 |
| RNA 6000 Nano LabChip试剂盒 | Agilent | 5067-1511 | |
| Dynabeads Oligo (dT) | Thermo Fisher | -- | |
| SuperScript™ II逆转录酶 | Invitrogen | 1896649 | |
| 影像学 | 3.0 T磁共振设备 | -- | -- |
| Sante DICOM Viewer 8 | -- | -- | |
| 统计分析 | SPSS 22 | -- | -- |
| GraphPad Prism 7 | -- | -- |
关键环节
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 动物模型 | 大鼠品系（雄性SD，280-320g），线栓型号（L3800），阻塞时间（90分钟），麻醉方式（异氟烷） 阅读提示：见Methods: Animal Model |
| 药物处理 | DHM剂量（100 mg/kg），给药方式（腹腔注射），给药时间（再灌注开始时，连续7天），对照组（HP-β-CD溶液4 ml/kg） 阅读提示：见Methods: Animal Model |
| 神经行为学评估 | Longa评分标准（0-4分），评估时间（术后连续7天），纳入标准（评分1-3） 阅读提示：见Methods: Longa Test |
| 梗死体积测定 | TTC浓度（2%），切片厚度（2mm），染色温度（37°C），梗死体积计算公式 阅读提示：见Methods: TTC Staining |
| 组织染色 | 尼氏染色时间（30分钟），温度（37°C），TUNEL染色试剂盒（Vazyme），IHC抗体浓度（未明确） 阅读提示：见Methods: Nissl Staining, TUNEL Staining, IHC |
| 蛋白表达检测 | 组织取样部位（梗死周围区域），裂解时间（15分钟），离心（12000g，10分钟，4°C），抗体稀释浓度（未明确） 阅读提示：见Methods: Western Blot Assay |