瓜氨酸化和丙二醛-乙醛修饰的纤维蛋白原激活巨噬细胞并促进类风湿关节炎患者侵袭性滑膜成纤维细胞表型

目的：翻译后蛋白修饰丙二醛-乙醛（MAA）和瓜氨酸（CIT）与类风湿关节炎（RA）的发病机制有关。尽管确切机制尚未阐明，但巨噬细胞-成纤维细胞相互作用被认为在RA的发生和发展中起核心作用。本研究的目的是评估巨噬细胞在经纤维蛋白原（FIB）修饰抗原刺激后释放的可溶性介质对人成纤维样滑膜细胞（HFLS）的下游效应。方法：用PMA处理的U-937单核细胞（Mϕ）和巨噬细胞分化的外周血单个核细胞（MP）分别用FIB、FIB-MAA、FIB-CIT或FIB-MAA-CIT刺激。HFLS-RA细胞直接用FIB抗原或经FIB抗原刺激的巨噬细胞上清（Mϕ-SN或MP-SN）刺激。评估了与侵袭性HFLS表型、细胞外基质蛋白和激活的信号通路相关的基因。结果：与直接用相同抗原刺激相比，用Mϕ-SNFIB-CIT和Mϕ-SNFIB-MAA-CIT处理的HFLS-RA细胞在24小时时与侵袭性表型相关基因的mRNA表达显著增加。使用MP-SN获得相似结果。用任何经修饰抗原刺激后产生的Mϕ-SN处理的HFLS-RA细胞，细胞形态改变，且波形蛋白（p<0.0001 vs. Mϕ-SNFIB）和II型胶原（p<0.0001）的蛋白表达显著增加。在用Mϕ-SNFIB-MAA-CIT处理的HFLS-RA中，JNK、Erk1/2和Akt的磷酸化增加最为显著（p<0.05 vs Mϕ-SNFIB）。这些和其他数据提示Mϕ-SN中存在PDGF-BB。Mϕ-SNFIB-MAA-CIT含有最高浓度的PDGF-BB（p<0.0001 vs. Mϕ-SNFIB），其次是Mϕ-SNFIB-CIT，然后是Mϕ-SNFIB-MAA。用PDGF-BB处理的HFLS-RA细胞显示出与经修饰FIB刺激后产生的Mϕ-SN相似细胞形态，以及波形蛋白、II型胶原表达增加和JNK、Erk1/2和Akt信号分子磷酸化。结论：总之，这些发现支持假说：响应MAA修饰和/或瓜氨酸化纤维蛋白原，巨噬细胞释放包括PDGF-BB在内的可溶性因子，诱导成纤维细胞活化并促进侵袭性成纤维细胞表型。与单一修饰相比，双重修饰的纤维蛋白原激活巨噬细胞后细胞反应最强，为多种翻译后修饰在RA发展中的联合作用提供了新见解。