小鼠腔前卵泡体外培养的优化研究

目的 腔前卵泡体外培养效率低，且依赖于物种、发育阶段和促卵泡激素（FSH）浓度。在此，我们优化了小鼠腔前卵泡体外培养系统。 方法 从14日龄雌性小鼠中分离初级卵泡（PM卵泡，直径80‐100 μm）和早期次级卵泡（ES卵泡，直径110‐130 μm），在含10 mIU/mL或100 mIU/mL r‐FSH的培养基中培养。观察卵泡生长和卵母细胞成熟。通过ELISA检测雌二醇（E2）。通过免疫荧光和Western blot检测FSH受体（FSHR）、Ki‐67、3β‐HSD、CYP17和CYP19的水平。 结果 ES卵泡的腔形成率和卵母细胞成熟率显著高于PM卵泡（P < .05）。在100 mIU/mL r‐FSH条件下，ES卵泡的腔形成率和卵母细胞成熟率也显著高于10 mIU/mL r‐FSH条件（P < .05）。在ES卵泡中发现更高的FSHR水平。同时，在10 mIU/mL r‐FSH条件下，ES卵泡呈扁平生长模式，而在100 mIU/mL r‐FSH条件下观察到立体空间生长模式。100 mIU/mL r‐FSH刺激颗粒细胞增殖的作用显著强于10 mIU/mL r‐FSH。此外，与PM卵泡颗粒细胞相比，FSH显著促进ES卵泡颗粒细胞增殖。在100 mIU/mL r‐FSH条件下，ES卵泡中E2的分泌以及3β‐HSD、CYP17和CYP19的表达显著高于10 mIU/mL r‐FSH条件。 结论 100 mIU/mL r‐FSH理想地促进ES卵泡的发育，其生长模式能更合理地模拟体内卵泡的生长。