检测胃癌组织中肥大细胞浸润及其与Tregs的关系
明确胃癌中肥大细胞浸润程度及其与Treg标志物FOXP3的相关性。
收集40例胃癌患者的肿瘤及癌旁组织,制备石蜡切片,采用免疫荧光检测类胰蛋白酶和FOXP3表达,分析两者相关性。
Interaction between regulatory T cells and mast cells via IL-9 and TGF-β production.
研究主要基于免疫荧光和TCGA数据库相关性分析,缺乏功能实验和机制验证,实验设计较为简单。
胃癌患者肿瘤组织样本 TCGA胃癌数据队列
40例胃癌患者肿瘤及癌旁组织,2015年1月至2017年12月手术切除样本 免疫荧光检测FOXP3、类胰蛋白酶、TGFβ1、TGF-βR、IL-9、IL-9R、OX40L表达 TCGA数据库406例胃癌样本用于OX40L与TNM分期关系分析 TNM分期系统(第7版)
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
明确胃癌中肥大细胞浸润程度及其与Treg标志物FOXP3的相关性。
收集40例胃癌患者的肿瘤及癌旁组织,制备石蜡切片,采用免疫荧光检测类胰蛋白酶和FOXP3表达,分析两者相关性。
验证肥大细胞是否分泌TGFβ1,并确认其与Tregs的潜在联系。
通过免疫荧光检测胃癌组织中类胰蛋白酶和TGFβ1的共定位,并利用TCGA数据库分析TGFβ1与类胰蛋白酶表达的相关性;同时检测TGFβR在Treg细胞上的表达。
验证Treg细胞能否通过IL-9调节肥大细胞。
通过免疫荧光检测胃癌组织中IL-9与FOXP3的共表达,以及肥大细胞表面IL-9R的表达。
探究肥大细胞表达的OX40L是否与胃癌恶性程度和预后相关。
通过免疫荧光检测胃癌组织中OX40L与类胰蛋白酶的共定位,分析OX40L表达与TNM分期的关系,并用TCGA数据验证。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 免疫荧光 | 抗肥大细胞类胰蛋白酶抗体 | BIOSS | bs-2725R |
| 抗FOXP3抗体 | Santa Cruz Biotechnology, Inc. | sc-166212 | |
| 抗OX40抗体 | Santa Cruz Biotechnology, Inc. | sc-71768 | |
| 抗IL-9R抗体 | Santa Cruz Biotechnology, Inc. | sc-515622 | |
| 抗IL-9抗体 | BIOSS | bs-10435R | |
| 抗TGFβ1抗体 | BIOSS | bs-0086R | |
| 免疫荧光封闭 | 驴血清白蛋白 | Abbkine Scientific Co., Ltd. | BMS0140 |
| 免疫荧光二抗 | 山羊抗大鼠IgG抗体 | BIOSS | bs-0293G |
| 山羊抗兔IgG抗体 | BIOSS | bs-0295G | |
| 山羊抗小鼠IgG抗体 | BIOSS | bs-0296G | |
| 免疫荧光封片 | 含DAPI的Vectashield封片剂 | Vector Laboratories, Inc.; Maravai LifeSciences | -- |
| 免疫荧光成像 | 荧光显微镜 | Olympus Corporation | -- |
| CCD相机 | Nikon Corporation | -- | |
| 统计分析 | SPSS | SPSS Inc. | -- |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 患者样本收集 | 胃癌患者数量(40例)、收集时间(2015年1月至2017年12月)、纳入标准(病理确诊、术前未接受抗癌治疗、接受根治性切除)、排除标准 阅读提示:Materials and methods, Patients and specimens |
| 免疫荧光染色 | 一抗种类及稀释比例、二抗种类及稀释比例、封闭条件、染色温度和时间 阅读提示:Materials and methods, Immunofluorescence |
| 统计分析 | 相关性分析方法(Spearman)、组间比较方法(配对t检验、单因素方差分析)、显著性水平(P<0.05) 阅读提示:Materials and methods, Statistical analysis |
| TCGA数据验证 | 数据库来源、样本数量、分析指标(TGFβ1与类胰蛋白酶相关性、OX40L与分期关系) 阅读提示:Results, 图2A和图4C |