调节性T细胞与肥大细胞通过IL-9和TGF-β产生相互作用

Interaction between regulatory T cells and mast cells via IL-9 and TGF-β production.

作者信息Yi-Bin Zhao, Shao-Hui Yang, Jie Shen, Ke Deng, Qi Li, Yu Wang, Wei Cui, Hua Ye
PMID33133260
发布时间2020-12
DOI10.3892/ol.2020.12224

实验完整度

研究主要基于免疫荧光和TCGA数据库相关性分析,缺乏功能实验和机制验证,实验设计较为简单。

主要模型

胃癌患者肿瘤组织样本 TCGA胃癌数据队列

重点核对

40例胃癌患者肿瘤及癌旁组织,2015年1月至2017年12月手术切除样本 免疫荧光检测FOXP3、类胰蛋白酶、TGFβ1、TGF-βR、IL-9、IL-9R、OX40L表达 TCGA数据库406例胃癌样本用于OX40L与TNM分期关系分析 TNM分期系统(第7版)

摘要

近年来,关于癌细胞免疫抑制的研究备受关注。本研究旨在通过研究肥大细胞在癌症免疫抑制中的功能机制,为靶向肥大细胞的肿瘤免疫治疗提供新策略。2015年1月至2017年12月期间,在中国宁波市李惠利医院收集了40例胃癌(GC)患者的肿瘤组织并进行分组。制备病理切片,采用免疫荧光法分析叉头框蛋白P3(FOXP3)、类胰蛋白酶、TGFβ1、TGF-βR、IL-9、IL-9R和OX40配体(OX40L)的表达。然后,分析FOXP3与类胰蛋白酶、TGFβ1与类胰蛋白酶表达的相关性,以及不同分期GC患者中OX40L的表达。结果显示,GC患者中存在高水平的肥大细胞,且类胰蛋白酶与FOXP3表达呈正相关。肥大细胞通过分泌TGFβ1调节胃肿瘤微环境中的调节性T(Treg)细胞。反过来,Tregs通过产生IL-9促进肿瘤微环境中肥大细胞的存活。此外,肥大细胞中OX40L的表达与GC的TNM分期显著相关。总之,本研究报道了一个通过TGFβ1和IL-9发挥作用的阳性反馈系统,使Tregs与肥大细胞之间能够相互交流。此外,OX40L可能成为GC诊断和治疗的潜在靶点。这些结果可能为靶向肥大细胞的肿瘤免疫治疗提供新策略。

实验结论

提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。

研究问题
胃癌中肥大细胞与Treg细胞之间相互作用的机制,以及OX40L在胃癌恶性程度和预后评估中的价值。
核心机制
肥大细胞通过分泌TGFβ1促进Treg细胞,Treg细胞通过产生IL-9作用于肥大细胞表面的IL-9R,形成正反馈调节系统,介导肿瘤免疫抑制。
主要证据
免疫荧光检测显示胃癌组织中类胰蛋白酶与FOXP3、TGFβ1与类胰蛋白酶表达正相关,且Treg细胞分泌IL-9,肥大细胞表达IL-9R;TCGA数据验证TGFβ1与肥大细胞正相关,OX40L与TNM分期相关。
研究意义
研究表明OX40L可能作为胃癌的诊断和预后标志物,并为靶向肥大细胞的肿瘤免疫治疗提供新策略。

研究路径

按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。

1

检测胃癌组织中肥大细胞浸润及其与Tregs的关系

明确胃癌中肥大细胞浸润程度及其与Treg标志物FOXP3的相关性。

收集40例胃癌患者的肿瘤及癌旁组织,制备石蜡切片,采用免疫荧光检测类胰蛋白酶和FOXP3表达,分析两者相关性。

2

分析肥大细胞与TGFβ1共表达及TCGA数据验证

验证肥大细胞是否分泌TGFβ1,并确认其与Tregs的潜在联系。

通过免疫荧光检测胃癌组织中类胰蛋白酶和TGFβ1的共定位,并利用TCGA数据库分析TGFβ1与类胰蛋白酶表达的相关性;同时检测TGFβR在Treg细胞上的表达。

3

检测Treg细胞IL-9分泌及肥大细胞IL-9R表达

验证Treg细胞能否通过IL-9调节肥大细胞。

通过免疫荧光检测胃癌组织中IL-9与FOXP3的共表达,以及肥大细胞表面IL-9R的表达。

4

评估OX40L表达与胃癌TNM分期的关系

探究肥大细胞表达的OX40L是否与胃癌恶性程度和预后相关。

通过免疫荧光检测胃癌组织中OX40L与类胰蛋白酶的共定位,分析OX40L表达与TNM分期的关系,并用TCGA数据验证。

研究方法

按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。

产品清单

实验环节名称品牌货号
抗肥大细胞类胰蛋白酶抗体BIOSSbs-2725R
抗FOXP3抗体Santa Cruz Biotechnology, Inc.sc-166212
抗OX40抗体Santa Cruz Biotechnology, Inc.sc-71768
抗IL-9R抗体Santa Cruz Biotechnology, Inc.sc-515622
抗IL-9抗体BIOSSbs-10435R
抗TGFβ1抗体BIOSSbs-0086R
驴血清白蛋白Abbkine Scientific Co., Ltd.BMS0140
山羊抗大鼠IgG抗体BIOSSbs-0293G
山羊抗兔IgG抗体BIOSSbs-0295G
山羊抗小鼠IgG抗体BIOSSbs-0296G
含DAPI的Vectashield封片剂Vector Laboratories, Inc.; Maravai LifeSciences--
荧光显微镜Olympus Corporation--
CCD相机Nikon Corporation--
SPSSSPSS Inc.--

关键环节

汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。

环节核对要点
患者样本收集
胃癌患者数量(40例)、收集时间(2015年1月至2017年12月)、纳入标准(病理确诊、术前未接受抗癌治疗、接受根治性切除)、排除标准
阅读提示:Materials and methods, Patients and specimens
免疫荧光染色
一抗种类及稀释比例、二抗种类及稀释比例、封闭条件、染色温度和时间
阅读提示:Materials and methods, Immunofluorescence
统计分析
相关性分析方法(Spearman)、组间比较方法(配对t检验、单因素方差分析)、显著性水平(P<0.05)
阅读提示:Materials and methods, Statistical analysis
TCGA数据验证
数据库来源、样本数量、分析指标(TGFβ1与类胰蛋白酶相关性、OX40L与分期关系)
阅读提示:Results, 图2A和图4C