IPMK通过稳定PLCγ1-Sam68复合物在T细胞受体信号传导中非催化性激活PLCγ1

背景：磷脂酶C gamma 1（PLCγ1）是T细胞受体（TCR）和生长因子信号传导的重要介质。PLCγ1被Src家族激酶（SFKs）激活，并从磷脂酰肌醇4,5-二磷酸（PIP2）产生肌醇1,4,5-三磷酸（InsP3）。肌醇多磷酸多激酶（IPMK）是一种具有广泛底物特异性和非催化活性的多效酶，介导多种功能性蛋白-蛋白相互作用。因此，IPMK在细胞生长等关键生物学事件中发挥重要作用。然而，IPMK在TCR信号传导中对PLCγ1激活的贡献仍大多未被阐明。本研究旨在阐明IPMK在TCR信号传导中的功能，并揭示IPMK介导的信号作用模式在PLCγ1激活中的作用。方法：在CD4+ T细胞特异性IPMK敲除小鼠（IPMKΔCD4）中建立刀豆蛋白A（ConA）诱导的急性肝炎模型。进行组织学分析以评估肝损伤。使用原代培养的初始CD4+ T细胞在体外揭示IPMK的作用机制。通过Western blot分析、定量实时PCR和流式细胞术分析TCR刺激诱导的PLCγ1激活及初始CD4+ T细胞中的下游信号通路。通过酵母双杂交筛选和免疫共沉淀鉴定IPMK结合蛋白和蛋白复合物。结果：IPMKΔCD4小鼠表现出减轻的ConA诱导的急性肝炎。这些小鼠的CD4+辅助T细胞显示出降低的PLCγ1 Y783磷酸化，随后抑制钙信号传导和IL-2产生。发现IPMK通过直接与68 kDa的有丝分裂期间Src相关底物（Sam68）结合来促进PLCγ1激活。机制上，IPMK稳定Sam68与PLCγ1之间的相互作用，从而促进PLCγ1磷酸化。用IPMK显性负性肽干扰这种IPMK-Sam68结合相互作用削弱了PLCγ1磷酸化。结论：我们的结果表明，IPMK通过稳定PLCγ1-Sam68复合物非催化性促进PLCγ1磷酸化。在CD4+ T细胞中靶向IPMK可能是一种治疗TCR过度刺激引起的免疫疾病的有前景的策略。