人博卡病毒1的小非结构蛋白NP1直接与Ku70和RPA70相互作用并促进病毒DNA复制

人博卡病毒1（HBoV1）是细小病毒科博卡病毒属的成员，可在幼儿中引起急性呼吸道感染。在气-液界面培养的分化良好的假复层人气道上皮（HAE-ALI）是研究HBoV1感染的理想体外培养模型。与其他细小病毒不同的是，博卡病毒表达一个约25 kDa的小非结构蛋白NP1，该蛋白由病毒基因组中央的一个开放阅读框（ORF）编码。NP1在病毒DNA复制和前体mRNA加工中发挥重要作用。在本研究中，我们采用亲和纯化实验来鉴定HBoV1 NP1相互作用蛋白。我们鉴定出Ku70和RPA70以高结合亲和力与NP1直接相互作用，其特征为平衡解离常数（KD）分别为95 nM和122 nM。此外，我们定位了Ku70的aa266-439和RPA70的aa181-422为关键的NP1相互作用结构域。通过显性负性策略，我们揭示了Ku70和RPA70与NP1的相互作用不仅在体外病毒DNA复制实验中而且在HBoV1感染的HAE-ALI培养物中对HBoV1 DNA复制发挥重要作用。总之，我们的研究揭示了一种新的机制，即HBoV1 NP1通过其与Ku70和RPA70的直接相互作用来增强病毒DNA复制。