确定SARS-CoV-2血清状态
通过RT-PCR和血清学检测确定参与者既往感染状态,分为未感染和既往感染。
收集237名医护人员的血清样本,检测SARS-CoV-2核衣壳抗体和刺突RBD抗体,结合RT-PCR结果确定血清状态。
SARS-CoV-2 mRNA vaccine induces robust specific and cross-reactive IgG and unequal neutralizing antibodies in naive and previously infected people.
研究包含临床队列纵向样本分析、ELISA、活病毒中和试验、多重替代中和试验,但缺乏独立验证或机制验证。
健康医护人员队列 Vero E6细胞
168名mRNA疫苗接种者,其中20例既往感染,148例未感染 接种BNT162b2或mRNA-1273疫苗 样本采集时间点:接种前、第一剂后(中位21天)、第二剂后(中位54天) 活病毒中和试验使用SARS-CoV-2荧光素酶报告病毒,Vero E6细胞 多重替代中和试验检测ACE2阻断抗体
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
通过RT-PCR和血清学检测确定参与者既往感染状态,分为未感染和既往感染。
收集237名医护人员的血清样本,检测SARS-CoV-2核衣壳抗体和刺突RBD抗体,结合RT-PCR结果确定血清状态。
评估mRNA疫苗第一剂和第二剂后IgG、IgM、IgA抗体的产生动力学。
通过ELISA检测全刺突和RBD抗原的IgG、IgM、IgA抗体水平。
比较未感染和既往感染个体在疫苗接种后全刺突、RBD、NTD的IgG抗体水平。
通过滴定ELISA测量全刺突、RBD和NTD IgG抗体,计算曲线下面积(AUC)。
评估mRNA疫苗接种后对SARS-CoV-2参考株的中和抗体滴度,并比较未感染和既往感染个体。
使用SARS-CoV-2荧光素酶报告病毒感染Vero E6细胞,测定50%中和滴度(Neut50)。
评估mRNA疫苗诱导的抗体对参考株及七种变异株的ACE2阻断活性。
使用MSD多重免疫测定法检测对参考株和变异株(包括Delta、Alpha、Beta、Gamma等)的ACE2阻断抗体百分比。
评估mRNA疫苗接种后针对四种地方性人类冠状病毒(OC43、HKU1、NL63、229E)的交叉反应性IgG抗体水平。
通过滴定ELISA检测针对SARS-CoV-2和四种HCoV全刺突蛋白的IgG抗体。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 抗体检测 | 辣根过氧化物酶标记的山羊抗人IgG | Jackson ImmunoResearch | 109-035-008 |
| 辣根过氧化物酶标记的山羊抗人IgM | Jackson ImmunoResearch | 109-035-043 | |
| 辣根过氧化物酶标记的山羊抗人IgA | Jackson ImmunoResearch | 109-035-011 | |
| 核衣壳检测 | 小鼠抗MBP抗体 | New England Biolabs | E8032L |
| 碱性磷酸酶标记的山羊抗人IgG | Sigma-Aldrich | A9544 | |
| 碱性磷酸酶标记的山羊抗人IgM | Sigma-Aldrich | A3437 | |
| 碱性磷酸酶标记的山羊抗人IgA | Abcam | AB97212 | |
| 蛋白质表达 | Halotag PEG生物素配体 | Promega | G8281 |
| HCoV-NL63刺突蛋白 | Sino Biological | 40604-V08B | |
| HCoV-OC43刺突蛋白 | Sino Biological | 40607-V08B | |
| HCoV-229E刺突蛋白 | Sino Biological | 40605-V08B | |
| HCoV-HKU1刺突蛋白 | Sino Biological | 40606-V08B | |
| 蛋白质纯化 | Strep-Tactin琼脂糖树脂 | IBA Lifesciences GmbH | 2-1201-002 |
| Ni-NTA琼脂糖 | Qiagen | 30210 | |
| 活病毒中和试验 | Nano-Glo荧光素酶检测系统 | Promega | N1120 |
| ELISA | 链霉亲和素 | Invitrogen | 434302 |
| NAP封闭剂 | G-Biosciences | 786-190 | |
| 替代中和试验 | V-PLEX SARS-CoV-2 Panel 13 (ACE2) 试剂盒 | MESO SCALE DIAGNOSTICS, LLC | K15466U-2 |
| 细胞培养 | Vero E6细胞 | ATCC | CRL1586 |
| 蛋白质表达 | Expi293表达系统 | Thermo Fisher Scientific | A14635 |
| SARS-CoV-2核衣壳表达质粒 | Addgene | 157867 |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 队列和样本 | 参与者数量、年龄、性别、既往感染状态定义、样本采集时间点 阅读提示:STAR Methods: Experimental model and subject details, Clinical study |
| 疫苗接种 | 疫苗类型和剂量(BNT162b2或mRNA-1273)、接种间隔、采样时间 阅读提示:Results: Determination of SARS-CoV-2 serostatus among mRNA vaccine recipients; Discussion |
| 抗体检测 | 抗原(全刺突、RBD、NTD)、血清稀释倍数、ELISA步骤、检测波长 阅读提示:STAR Methods: Generation 2 RBD or NTD ELISA, Full-length spike protein ELISA |
| 活病毒中和试验 | 病毒株(SARS-CoV-2 nLuc)、细胞系(Vero E6)、血清起始稀释度、病毒量(75 PFU)、孵育时间(48小时) 阅读提示:STAR Methods: Live virus neutralization assay |
| 多重替代中和试验 | MSD试剂盒类型、血清稀释度、检测仪器、计算结果方式 阅读提示:STAR Methods: Multiplex surrogate neutralization assay |