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PDIA3通过作为分子伴侣促进STAT1和PKM2的非经典核输入来调控效应T细胞程序
PDIA3 orchestrates effector T cell program by serving as a chaperone to facilitate the non-canonical nuclear import of STAT1 and PKM2
摘要
T细胞活化失调是类风湿关节炎免疫病理学的基础，但调控T细胞效应程序的机制仍不完全清楚。本研究利用类风湿关节炎患者的群体和单细胞RNA测序数据，验证了蛋白质二硫键异构酶家族A成员3是一个潜在的治疗靶点。PDIA3在RA患者来源的致病性CD4 T细胞中显著上调，并与C反应蛋白水平和疾病活动评分28呈正相关。PDIA3的药理学抑制或基因敲除可减轻RA相关的关节病理和自身免疫反应。机制上，T细胞受体信号触发细胞内钙流激活NFAT1，这一过程在RA环境下被Wnt5a进一步增强。活化的NFAT1随后直接结合Pdia3启动子以增强PDIA3的表达，PDIA3与STAT1或PKM2复合以分别促进它们的核输入，从而转录T辅助细胞1和Th17谱系相关基因。这种非经典的调控机制可能发生在病理条件下，因为PDIA3只有在异常的外部刺激下才能被高度诱导。总之，我们的数据支持靶向PDIA3是在临床环境中减轻自身免疫疾病（如RA）的重要策略。
实验方法
产品清单
| 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|
| 初始CD4 T细胞分离试剂盒 | Miltenyi Biotec | 130-104-453 |
| 小鼠CD4 T细胞分离试剂盒 | Miltenyi Biotec | 130-049-201 |
| 人CD4 T细胞分离试剂盒 | Miltenyi Biotec | 130-045-101 |
| 细胞示踪剂CFSE | Life Technologies | -- |
| 细胞示踪剂紫罗兰 | Thermo Fisher Scientific | -- |
| MACSQuant Analyzer 10流式细胞仪 | Miltenyi Biotec | -- |
| RNeasy离心柱试剂盒 | -- | -- |
| 安捷伦2100生物分析仪 | Agilent | -- |
| Illumina TruSeq链特异性mRNA LT样本制备试剂盒 | Illumina | -- |
| 安捷伦DNA1000试剂盒 | Agilent | -- |
| MiSeq试剂盒V3 150循环 | -- | -- |
| MiSeq系统 | -- | -- |
| SPA柱 | -- | -- |
| pGL3载体 | -- | -- |
| Lipofectamine 3000试剂盒 | Invitrogen | -- |
| 双荧光素酶报告基因检测系统试剂盒 | Promega | -- |
| 小鼠IFN-γ ELISA试剂盒 | Biolegend | -- |
| 小鼠IL-17A ELISA试剂盒 | Biolegend | -- |
| 小鼠TNF-α ELISA试剂盒 | Biolegend | -- |
| Trizol试剂 | Takara | -- |
| cDNA合成试剂盒 | Takara | -- |
| SYBR Green PCR预混液 | Applied Biosystems | -- |
| ABI Prism 7500序列检测系统 | Applied Biosystems | -- |
| 高尔基体阻断剂 | BD Bioscience | -- |
| 固定/透化液 | BD Bioscience | -- |
| FlowJo软件 | -- | version 8.1 |
| 共聚焦显微镜 | Olympus | FV1000 |
| RIPA裂解液 | Servicebio | -- |
| 蛋白酶抑制剂混合物 | Roche | -- |
| 非变性凝胶上样缓冲液 | Beyotime Institute of Biotechnology | -- |
| 非变性PAGE电泳缓冲液 | Beyotime Institute of Biotechnology | -- |
| 非变性凝胶 | Beyotime Institute of Biotechnology | -- |
| ECL plus试剂 | Servicebio | -- |
| GraphPad Prism 8软件 | GraphPad Software Inc. | -- |