前脂肪细胞分离与培养
获取人原代脂肪前体细胞用于后续实验
从人皮下脂肪组织活检中分离基质血管组分(SVF),经胶原酶消化、过滤、离心获得前脂肪细胞,培养于DMEM-10%FBS。
A hyaluronic acid-based filler reduces lipolysis in human mature adipocytes and maintains adherence and lipid accumulation of long-term differentiated human preadipocytes
包含人原代前脂肪细胞分化、成熟脂肪细胞3D培养及脂解检测,但缺乏动物或临床验证。
人原代皮下前脂肪细胞 人成熟脂肪细胞3D培养模型
前脂肪细胞来源:6名非肥胖年轻女性患者的皮下脂肪组织活检 交联HA浓度:0.02%和0.3% 成脂分化诱导培养基含胰岛素、地塞米松、IBMX、T3 分化周期:6-11天(标准)或16-21天(长期)
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
获取人原代脂肪前体细胞用于后续实验
从人皮下脂肪组织活检中分离基质血管组分(SVF),经胶原酶消化、过滤、离心获得前脂肪细胞,培养于DMEM-10%FBS。
确定交联HA对前脂肪细胞的安全浓度范围
前脂肪细胞在不同浓度交联HA(0.02%-0.3%)中培养7天,检测LDH释放和细胞活力。
评估交联HA对前脂肪细胞成脂分化能力的影响
前脂肪细胞在促成脂培养基中分化6-11天,添加或不添加交联HA,通过BODIPY/DAPI染色量化脂质积累和细胞数量。
探究交联HA能否改善长期分化过程中的细胞存活和功能
前脂肪细胞在促成脂培养基中分化16-21天,添加或不添加交联HA,评估细胞脱落、脂质积累及脂联素分泌的变化。
评估交联HA对成熟脂肪细胞脂解的直接作用
将人成熟脂肪细胞包埋在Puramatrix肽水凝胶中,在含有或不含异丙肾上腺素及交联HA的培养基中培养,检测甘油释放以评估脂解。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 细胞培养 | DMEM培养基 | -- | -- |
| 胎牛血清 | -- | -- | |
| 青霉素-链霉素 | -- | -- | |
| 制霉菌素 | -- | -- | |
| 胶原酶 | -- | -- | |
| Puramatrix肽水凝胶 | Corning | 354250 | |
| GW9662 | Sigma | M6191 | |
| 细胞处理 | 交联透明质酸填充剂 | ART FILLER® Volume, Laboratoires FILLMED | -- |
| 细胞毒性检测 | CytoTox-One荧光检测 | Promega | G7891 |
| 细胞增殖检测 | CellTiter 96 AQueous One Solution细胞增殖检测 | Promega | G3580 |
| 脂联素分泌检测 | 比色ELISA试剂盒 | R&D Systems | DY1065 |
| 脂解检测 | 甘油检测试剂盒 | Randox | GY105 |
| 染色 | BODIPY | -- | -- |
| DAPI | -- | -- | |
| 显微镜成像 | Axio Observer Z1 | Zeiss | -- |
| ApoTome系统 | Zeiss | -- | |
| Axiocam 506 | Zeiss | -- |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 前脂肪细胞分离与培养 | 样本来源:六名非肥胖(BMI 25.6±0.9 kg/m2)年轻(32.0±3.7岁)女性患者;消化条件:胶原酶消化;培养基:DMEM-10%FBS + 1%青霉素-链霉素 + 1%制霉菌素 阅读提示:Methods 2.1 |
| 细胞毒性评估 | 细胞密度:5×10^3细胞/孔;交联HA浓度:0.02%-0.3%;培养时间:7天;检测指标:LDH释放、MTS活力 阅读提示:Methods 2.3; Figure 1 |
| 成脂分化及脂质积累量化 | 分化时间:6-11天(标准)或16-21天(长期);诱导剂:胰岛素、地塞米松、IBMX、T3;交联HA浓度:0.02%和0.3%;阴性对照:GW9662(0.1 µmol/L)或未分化;染色:BODIPY和DAPI;每孔重复三次 阅读提示:Methods 2.2, 2.6; Figures 2, 3 |
| 成熟脂肪细胞3D培养及脂解检测 | 细胞包埋于Puramatrix肽水凝胶;处理:异丙肾上腺素1 µmol/L;交联HA浓度:0.02%和0.3%;培养时间:2小时;检测:甘油释放、LDH活性 阅读提示:Methods 2.4, 2.5; Figure 4 |