胞质YAP1介导的ESCRT-III组装促进自噬性细胞死亡并在乳腺癌中被NEDD4L泛素化

背景：核Yes1相关转录调节因子（YAP1）促进肿瘤进展。然而，胞质YAP1在乳腺癌细胞中的功能及其对乳腺癌患者生存的影响仍不清楚。本研究旨在探讨胞质YAP1在乳腺癌细胞中的生物学功能，以及胞质YAP1作为乳腺癌生存预测标志物的可能性。方法：我们构建了细胞突变模型，包括NLS-YAP15SA（核定位）、YAP1S94A（不能与TEA结构域转录因子家族结合）和YAP1S127D（胞质定位），并使用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）实验、5-乙炔基-2'-脱氧尿苷（EdU）掺入实验和Western blotting（WB）分析检测细胞增殖和凋亡。通过免疫共沉淀、免疫荧光染色和WB分析研究了胞质YAP1介导的内体分选复合体所需转运III（ESCRT-III）组装的具体机制。使用表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）在体外和体内实验中模拟YAP1在胞质的滞留，以研究胞质YAP1的功能。通过质谱鉴定YAP1与NEDD4样E3泛素蛋白连接酶（NEDD4L）的结合，并在体外验证。使用乳腺组织微阵列分析胞质YAP1表达与乳腺癌患者生存之间的关系。结果：YAP1主要在乳腺癌细胞的细胞质中表达。胞质YAP1促进乳腺癌细胞的自噬性死亡。胞质YAP1与ESCRT-III复合体亚基带电多泡体蛋白2B（CHMP2B）和液泡蛋白分选4同源物B（VPS4B）结合，促进CHMP2B-VPS4B组装并激活自噬体形成。EGCG使YAP1滞留于细胞质，促进CHMP2B-VPS4B组装，从而促进乳腺癌细胞的自噬性死亡。YAP1与NEDD4L结合，NEDD4L介导YAP1的泛素化和降解。乳腺组织微阵列显示，高水平的胞质YAP1有利于乳腺癌患者的生存。结论：胞质YAP1通过促进ESCRT-III复合体的组装介导乳腺癌细胞的自噬性死亡；此外，我们建立了基于胞质YAP1表达的新的乳腺癌生存预测模型。