建立肥胖合并AD小鼠模型
模拟肥胖合并AD的病理状态。
C57BL/6小鼠喂食HFD诱导肥胖，后耳部涂抹MC903诱导AD样皮炎。
关于丁香通
公司信息
个人用户
企业机构
无忧采购 轻松科研
- 移动端
CD36-SREBP1轴调控肥胖加剧的特应性皮炎中TSLP的产生
CD36-SREBP1 Axis Mediates TSLP Production in Obesity-Exacerbated Atopic Dermatitis
实验完整度
高包含体内小鼠模型（HFD+MC903）、体外原代角质形成细胞实验、临床样本分析及转录组数据分析，并进行了功能验证（抑制剂、siRNA、过表达）和机制验证（ChIP、双荧光素酶）。
主要模型
原发性人角质形成细胞 HFD诱导的肥胖C57BL/6小鼠 MC903诱导的AD样皮炎小鼠模型 临床皮肤样本（AD患者、肥胖个体）
重点核对
HFD喂养时长≥12周，小鼠体重>38g MC903剂量及给药方式（2nmol，耳部涂抹，连续10天） SAB浓度（34.8μM、348μM）及给药方式 Fatostatin浓度（22μM、220μM）及给药方式 PA处理浓度（400μM、600μM、800μM）
摘要
肥胖与特应性皮炎（AD）风险增加相关，并可能加速其发展。在肥胖相关的皮肤病（包括银屑病和黑棘皮病）中已观察到角质形成细胞功能障碍，但在AD中尚未完全了解。本研究发现，高脂饮食诱导的肥胖加剧了小鼠AD样皮炎，皮损中炎症分子升高，CD36−SREBP1相关的脂肪酸积累增加。在肥胖的卡泊三醇（MC903）处理小鼠中，用化学抑制剂阻断CD36或SREBP1可有效缓解AD样炎症，减少脂肪酸积累，并下调TSLP表达。此外，棕榈酸处理通过激活CD36−SREBP1信号通路诱导角质形成细胞中TSLP过表达。染色质免疫沉淀测定进一步揭示了SREBP1与TSLP启动子区域的结合增加。我们的发现提供了有力证据，表明肥胖触发角质形成细胞中CD36−SREBP1−TSLP轴的激活，导致表皮脂质紊乱和AD样炎症的加剧。通过靶向CD36或SREBP1，可以开发未来的联合疗法或改良治疗策略，以帮助管理肥胖合并AD的患者。
实验结论
提炼研究问题、关键发现与证据，快速把握文章的核心贡献。
- 研究问题
- 肥胖如何加剧特应性皮炎（AD）的炎症反应？其潜在机制是什么？
- 核心机制
- 肥胖通过激活角质形成细胞中的CD36-SREBP1轴，促进脂肪酸积累，进而上调TSLP表达，加剧AD样炎症。
- 主要证据
- HFD小鼠模型、MC903诱导AD模型、原代角质形成细胞实验以及临床样本分析均显示CD36-SREBP1轴介导TSLP上调，且通过抑制剂、siRNA和过表达实验验证了该通路。
- 研究意义
- 研究揭示了肥胖加剧AD的分子机制，为肥胖合并AD患者提供了潜在的联合治疗或改良治疗策略，并强调了热量控制对皮肤健康的重要性。
研究路径
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
评估AD样炎症表型
评估肥胖对AD样皮炎严重程度的影响。
通过临床评分、耳厚度测量、搔抓计数、H&E染色、ELISA和RT-qPCR评估炎症表型。
检测表皮脂质代谢
探究肥胖是否影响表皮脂质代谢。
通过BODIPY染色、流式细胞术、免疫荧光和RT-qPCR检测脂肪酸积累及相关基因表达。
验证CD36和SREBP1在体内外的作用
验证CD36和SREBP1是否为肥胖加剧AD的关键介质。
使用CD36拮抗剂SAB和SREBP抑制剂fatostatin处理小鼠，并检测炎症和脂质相关指标；在原代角质形成细胞中，使用PA刺激，并通过siRNA和过表达实验验证CD36-SREBP1对TSLP的调控作用。
阐明SREBP1直接调控TSLP的机制
明确SREBP1是否直接结合TSLP启动子并调控其转录。
通过ChIP实验和双荧光素酶报告基因实验验证SREBP1结合TSLP启动子的特定区域。
研究方法
按研究目的归类文中使用的方法，便于定位所需技术。
验证机制链路
数据分析与统计
产品清单
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 动物实验 | D12492高脂饲料 | Research Diets | D12492 |
| D12450J对照饲料 | Research Diets | D12450J | |
| MC903（卡泊三醇） | Leo Pharma | -- | |
| 丹酚酸B | MedChemExpress | -- | |
| 法托他汀 | MedChemExpress | -- | |
| 棕榈酸 | Kunchuang Biotechnology | -- | |
| 细胞实验 | IL-4 | Proteintech | -- |
| IL-17A | Proteintech | -- | |
| SREBP1特异性小干扰RNA | -- | -- | |
| 转染试剂 | Invitrogen | -- | |
| Lipofectamine 3000转染试剂 | Invitrogen | -- | |
| 分散酶II | Sigma-Aldrich | -- | |
| 胰蛋白酶-EDTA | Sigma-Aldrich | -- | |
| 流式分析 | BODIPY 500/510荧光染料 | Thermo Fisher Scientific | -- |
| APC抗小鼠IL-4抗体 | BioLegend | -- | |
| FITC抗小鼠CD3抗体 | BioLegend | -- | |
| PE抗小鼠IL-17A抗体 | BioLegend | -- | |
| PE抗小鼠IFN-γ抗体 | BioLegend | -- | |
| PE-CY7抗小鼠CD4抗体 | BioLegend | -- | |
| ELISA | TSLP ELISA试剂盒 | Elabscience | -- |
| IgE ELISA试剂盒 | Elabscience | -- | |
| RT-qPCR | TRIzol试剂 | Invitrogen | -- |
| 逆转录试剂盒 | Takara | -- | |
| SYBR Premix Ex Taq II | Takara | -- | |
| Chromo 4连续荧光检测器及PTC-200 DNA Engine循环仪 | Bio-Rad Laboratories | Chromo 4 | |
| Western blot | RIPA裂解缓冲液 | -- | -- |
| 蛋白酶抑制剂混合物 | R&D Systems | -- | |
| BCA蛋白定量试剂盒 | Beyotime | -- | |
| 抗SREBP1抗体 | Proteintech | 14088-1-AP | |
| 抗SREBP1抗体 | Abcam | ab28481 | |
| 抗SREBP1抗体 | BD Pharmingen | 557036 | |
| 抗CD36抗体 | Novus Biologicals | NB400-144 | |
| 抗TSLP抗体 | Novus Biologicals | NB110-55234 | |
| 抗GAPDH抗体 | Cell Signaling Technology | 5174 | |
| 抗p65抗体 | Cell Signaling Technology | 8242 | |
| 抗磷酸化p65抗体 | Cell Signaling Technology | 3031 | |
| 抗磷酸化IKKα/β抗体 | Cell Signaling Technology | 2697 | |
| 抗IKK抗体 | Cell Signaling Technology | 8943 | |
| 增强化学发光检测试剂盒 | GeneTex | -- | |
| 免疫荧光 | 抗角蛋白10抗体 | Proteintech | 18342-1-AP |
| 抗角蛋白14抗体 | Proteintech | 10143-1-AP | |
| 抗丝聚蛋白抗体 | Novus Biologicals | NBP1-87528 | |
| 抗兜甲蛋白抗体 | Proteintech | 55439-1-AP | |
| 抗PPAR-γ抗体 | Proteintech | 16643-1-AP | |
| Zeiss Axioskop 2显微镜 | Zeiss | Axioskop 2 | |
| ChIP | Simple ChIP酶法染色质免疫沉淀试剂盒 | Cell Signaling Technology | -- |
| 抗SREBP1抗体 | Santa Cruz Biotechnology | sc-365513 | |
| 正常小鼠IgG | Cell Signaling Technology | -- | |
| 统计分析 | GraphPad Prism 9软件 | GraphPad Software | 9 |
关键环节
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 体内小鼠模型 | 高脂饮食（D12492）喂养时长≥12周，起始周龄5-6周；小鼠体重>38g；MC903剂量（2nmol）及给药方式（耳部涂抹）；给药时长（10天）。 阅读提示：Materials and Methods: Mice and treatment；Figure 1 legend |
| 药物处理 | SAB浓度（34.8μM、348μM），Fatostatin浓度（22μM、220μM），溶剂（1% DMSO），给药体积（30μl），给药频率（每日1次），给药时长（10天）。 阅读提示：Materials and Methods: Mice and treatment；Figure 3 and 4 legends |
| 体外细胞实验 | 原代角质形成细胞的分离和培养条件（无血清培养基，传代次数P2-P3）；细胞饥饿时间（24小时）；细胞因子刺激浓度（IL-4 100ng/ml，IL-17A 50ng/ml，MC903 100ng/ml）及时间（24小时）；PA浓度（400μM、600μM、800μM）及处理时间（24小时用于RT-qPCR，48小时用于Western blot）。 阅读提示：Materials and Methods: Cell culture and treatment；Figure 5 legend |
| 蛋白检测 | 抗体信息（anti-SREBP1, anti-CD36, anti-TSLP等）、稀释比例、孵育条件（4℃过夜）；蛋白上样量（30-40μg）；SDS-PAGE凝胶浓度（10%）。 阅读提示：Materials and Methods: Western blot analysis；Supplementary Materials and Methods: Western blot analysis |