建立DSS诱导的结肠炎模型并评估Lut的疗效
验证Lut对DSS诱导的UC小鼠模型的保护作用。
将小鼠随机分为对照组、DSS组和Lut组,Lut组给予25 mg/kg Lut灌胃,DSS组和Lut组从第8天至第14天给予3% DSS饮水。记录体重、DAI、结肠长度、脾脏指数,并进行H&E染色和病理评分。
Luteolin Alleviates Ulcerative Colitis in Mice by Modulating Gut Microbiota and Plasma Metabolism
包含体内动物模型、组织病理学、分子表达、肠道菌群测序和血浆代谢组学等多个独立证据层级,并有功能验证和机制验证。
DSS诱导的溃疡性结肠炎小鼠模型(BALB/c小鼠)
Lut给药剂量25 mg/kg,CMC-Na溶解,灌胃给药 DSS诱导浓度为3%(w/v),从第8天至第14天 随机分组:对照组、DSS组、Lut组,每组8只雄性BALB/c小鼠 疾病活动指数(DAI)评分、结肠长度、脾脏指数、组织病理学评分
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
验证Lut对DSS诱导的UC小鼠模型的保护作用。
将小鼠随机分为对照组、DSS组和Lut组,Lut组给予25 mg/kg Lut灌胃,DSS组和Lut组从第8天至第14天给予3% DSS饮水。记录体重、DAI、结肠长度、脾脏指数,并进行H&E染色和病理评分。
检测Lut对系统性及结肠组织炎症反应的影响。
通过ELISA检测血清和结肠组织中炎症因子(TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-10)的水平,通过RT-qPCR和Western blot检测结肠组织中炎症因子的mRNA和蛋白表达。
检验Lut是否能够修复DSS导致的结肠屏障损伤。
通过PAS染色观察杯状细胞数量,使用qPCR检测MUC2、ZO-1、Occludin mRNA水平,通过免疫组化和Western blot检测紧密连接蛋白(ZO-1、Occludin、Claudin-1)表达。
探究Lut是否调节DSS诱导的肠道菌群失调。
收集盲肠内容物,提取DNA,扩增16S rRNA V3-V4区,使用Illumina MiSeq PE300平台测序。分析α多样性、β多样性、LEfSe差异菌属,并进行Spearman相关性分析。
鉴定Lut治疗后血浆差异代谢物及相关通路。
收集血浆,进行UPLC-QTOF-MS/MS分析。使用Progenesis QI软件处理数据,通过PCA和OPLS-DA分析,筛选差异代谢物(fold change≥1,p<0.05,VIP≥1),并进行KEGG通路富集分析及与菌群和临床指标的相关性分析。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 动物实验 | 葡聚糖硫酸钠 | MP Biomedicals | -- |
| 木犀草素 | MedChem Express | -- | |
| 羧甲基纤维素钠 | -- | -- | |
| Western blot | RIPA裂解液 | Solarbio | -- |
| PVDF膜 | Millipore | -- | |
| ZO-1抗体 | Proteintech | 21773-1-AP | |
| Occludin抗体 | Proteintech | 66378-1-Ig | |
| Claudin-1抗体 | Proteintech | 28674-1-AP | |
| IL-6抗体 | Proteintech | 26404-1-AP | |
| TNF-α抗体 | Proteintech | 17590-1-AP | |
| COX-2抗体 | Proteintech | 66351-1-Ig | |
| IL-1β抗体 | Proteintech | 16806-1-AP | |
| β-actin抗体 | Bioss | bs-0061R | |
| 辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔/小鼠IgG | Proteintech | SA00001-2 | |
| ECL化学发光底物 | Biosharp | -- | |
| Amersham Imager 600成像系统 | GE Healthcare Biosciences | -- | |
| 免疫组织化学 | ZO-1抗体 | Proteintech | 21773-1-AP |
| Occludin抗体 | Proteintech | 66378-1-Ig | |
| 酶联免疫吸附试验 | 小鼠TNF-α ELISA试剂盒 | Yuanmu | YM-S2863 |
| 小鼠IL-6 ELISA试剂盒 | Yuanmu | YM-S2894 | |
| 小鼠IL-1β ELISA试剂盒 | Yuanmu | YM-S2771 | |
| 小鼠IL-10 ELISA试剂盒 | Yuanmu | YM-S2907 | |
| 肠道菌群分析 | TGuideS96磁珠法土壤/粪便DNA提取试剂盒 | Tiangen Biotech | -- |
| 代谢组学分析 | Acquity I-Class PLUS超高效液相色谱系统 | Waters | -- |
| Xevo G2-XS QTof质谱仪 | Waters | -- | |
| Acquity UPLC HSS T3色谱柱(1.8 μm,2.1 × 100 mm) | Waters | -- |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 动物实验 | 小鼠品系、性别、年龄、体重、饲养条件;Lut剂量、溶解溶剂、给药途径和频次;DSS分子量、浓度、给药时间;分组数量和样本量。 阅读提示:Methods 2.1 Animal Model |
| 组织病理学分析 | 固定液、包埋方法、染色方法(H&E、PAS)、病理评分标准。 阅读提示:Methods 2.3 Histopathological Analysis |
| 炎症因子检测 | ELISA试剂盒品牌、货号、检测血清样本量;RT-qPCR引物序列、基因;Western blot抗体品牌、货号、稀释比例。 阅读提示:Methods 2.4、2.5、2.6、2.7 |
| 肠道菌群分析 | DNA提取试剂盒、16S rRNA扩增区域、测序平台、数据分析软件及参数;LEfSe阈值。 阅读提示:Methods 2.8 Gut Microbiota Analysis |
| 血浆代谢组学分析 | 样本前处理参数(提取溶剂、内标浓度);LC-MS条件(色谱柱、流动相、梯度洗脱、质谱参数);代谢物筛选标准(fold change、p值、VIP)。 阅读提示:Methods 2.9 Analysis of Plasma Metabolomics |