CLIC4通过介导PAR1信号调节RhoA，调控内皮屏障控制

背景：内皮氯化物胞内通道蛋白CLIC1和CLIC4是G蛋白偶联受体（GPCRs）鞘氨醇-1-磷酸（S1P）R1和S1PR3激活小GTPases Rac1和RhoA所必需的。为了确定CLIC1和CLIC4是否在其他内皮GPCR通路中起作用，我们评估了CLIC在凝血酶信号传导中的作用，涉及凝血酶调节的蛋白酶激活受体1（PAR1）和下游效应因子RhoA。方法：我们评估了CLIC1和CLIC4在人脐静脉内皮细胞（HUVEC）中对凝血酶反应重新定位到细胞膜的能力。我们通过敲低（KD）每种CLIC蛋白的表达来检查CLIC1和CLIC4在HUVEC中的功能，并比较了对照组和CLIC KD HUVEC中凝血酶介导的RhoA或Rac1激活、ezrin/radixin/moesin（ERM）磷酸化和内皮屏障调节。我们生成了条件性Clic4小鼠等位基因，并检查了内皮特异性缺失Clic4的小鼠中PAR1介导的肺微血管通透性和视网膜血管生成。结果：凝血酶促进了CLIC4而非CLIC1重新定位到HUVEC膜。HUVEC中敲低CLIC4减少了凝血酶介导的RhoA激活、ERM磷酸化和内皮屏障破坏。敲低CLIC1并未减少凝血酶介导的RhoA活性，但延长了凝血酶对RhoA和内皮屏障的反应。内皮特异性缺失Clic4的小鼠中，PAR1激活肽诱导的肺水肿和微血管通透性降低。结论：CLIC4是内皮PAR1信号的关键效应因子，是培养内皮细胞和小鼠肺内皮中RhoA介导的内皮屏障破坏所必需的。CLIC1对凝血酶介导的屏障破坏并不关键，但有助于凝血酶处理后屏障恢复阶段。