临床样本基因组分析
鉴定RIT1突变在NSCLC中的频率和特征。
使用MSK-IMPACT平台分析10,476例NSCLC标本的DNA测序数据，识别RIT1突变并评估其与临床特征及共突变的关系。
关于丁香通
公司信息
个人用户
企业机构
无忧采购 轻松科研
- 移动端
RIT1驱动致癌转化并作为肺腺癌的可操作靶点
RIT1 Drives Oncogenic Transformation and Is an Actionable Target in Lung Adenocarcinoma
实验完整度
高包含细胞系、类器官、动物模型和患者样本等多个证据层级，并进行功能验证和机制验证。
主要模型
H2110细胞系 MSK-LX1033患者来源异种移植模型 Rit1M90I敲入小鼠模型 Rit1M90I;Trp53floxed小鼠模型
重点核对
RIT1 M90I突变在肿瘤中的表达 SHP2抑制剂RMC-4550的给药剂量（30 mg/kg） RAS三复合物抑制剂RMC-7977的给药剂量（10 mg/kg） 肿瘤体积测量时间点（第20天、第23天、第26天）
摘要
RIT1是RAS家族的一种小GTP酶，RIT1突变已在肺癌、白血病和发育障碍努南综合征中被发现。RIT1突变因蛋白水解受损导致蛋白水平升高，进而引起RAS/MAPK信号通路及其他通路的失调。在此，我们记录了人类肺癌中RIT1突变的多样性，并表明RIT1 M90I的生理性表达足以在小鼠模型中驱动自发性肺肿瘤的发展。对直接抑制RIT1或下游RAS/MAPK通路的补充方法的评估显示，RIT1 M90I肿瘤对SHP2抑制剂和RAS核苷酸交换抑制敏感。此外，一项概念验证的化学生物学方法确定RAS三复合物抑制剂直接结合GTP结合的RIT1，导致肿瘤缩小。这些分子为RIT1驱动的肺肿瘤提供了一种可行的治疗方法。
实验结论
提炼研究问题、关键发现与证据，快速把握文章的核心贡献。
- 研究问题
- RIT1突变是否驱动肺腺癌的发生，以及哪些靶向治疗策略对RIT1驱动的肿瘤有效。
- 核心机制
- RIT1突变（如M90I）通过逃避LZTR1介导的降解导致蛋白水平升高，进而过度激活RAS/MAPK通路，该过程依赖经典RAS的核苷酸交换。
- 主要证据
- Rit1M90I敲入小鼠自发肺肿瘤；H2110细胞系和MSK-LX1033 PDX模型显示SHP2抑制剂RMC-4550和RAS TCI RMC-7977可抑制肿瘤生长。
- 研究意义
- 该研究为RIT1驱动肺肿瘤提供了潜在的治疗策略，并支持开发特异性靶向RIT1的抑制剂。
研究路径
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
RIT1 M90I敲入小鼠模型
评估生理性表达RIT1 M90I是否足以驱动肺肿瘤形成。
通过鼻内滴注表达Cre重组酶的腺病毒诱导Rit1M90I条件敲入小鼠肺中重组，通过μCT和组织学监测肿瘤发展，并进行IHC表征。
细胞增殖和克隆形成实验
评估不同MAPK通路抑制剂对RIT1突变肺癌细胞增殖的影响。
H2110细胞用不同浓度的抑制剂处理，进行克隆形成和细胞活力测定。
体内异种移植瘤模型
评估SHP2抑制剂和RAS TCI在RIT1驱动的肿瘤中的抗肿瘤疗效。
建立H2110 CDX和MSK-LX1033 PDX模型，用RMC-4550、RMC-7977、trametinib等治疗，测量肿瘤体积并分析信号通路变化。
机制验证：RIT1-CYPA结合和RGL3竞争实验
验证RAS TCI是否直接结合RIT1并形成三元复合物。
使用NanoBiT分裂荧光素酶实验检测RIT1-CYPA复合物形成，并通过RGL3 (RBD)竞争实验评估RIT1-GTP水平。
研究方法
按研究目的归类文中使用的方法，便于定位所需技术。
数据分析与统计
产品清单
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 基因组分析 | MSK-IMPACT | -- | -- |
| 细胞培养 | 达尔伯克改良伊格尔培养基 | -- | -- |
| RPMI 1640培养基 | -- | -- | |
| 胎牛血清 | -- | -- | |
| 青霉素-链霉素 | -- | -- | |
| 支原体检测试剂盒 | Lonza Bioscience | -- | |
| 基因构建 | pDONR221 | Addgene | -- |
| LT3GEPIR载体 | -- | -- | |
| 病毒包装 | Lenti-X包装混合试剂 | Takara | -- |
| 药物处理 | BI-3406 | Selleckchem | -- |
| LY3009120 | Selleckchem | -- | |
| RMC-4550 | Selleckchem | -- | |
| 考比替尼 | Selleckchem | -- | |
| 曲美替尼 | Selleckchem | -- | |
| RMC-4998 | Revolution Medicines | -- | |
| RMC-7977 | Revolution Medicines | -- | |
| 多西环素 | RPI | D43020 | |
| 环孢素A | Sigma | 30024 | |
| 细胞增殖实验 | CellTiter-Glo发光法细胞活力检测试剂盒 | Promega | -- |
| 蛋白提取与定量 | NP-40裂解液 | -- | -- |
| 蛋白酶和磷酸酶抑制剂混合物 | MedChemExpress | -- | |
| BCA蛋白定量试剂盒 | -- | -- | |
| 免疫印迹 | iBlot2干转印系统 | -- | -- |
| Pierce ECL免疫印迹底物 | Thermo Fisher | -- | |
| SuperSignal West Pico PLUS化学发光底物 | Thermo Fisher | -- | |
| RIT1抗体 | Abcam | ab53720 | |
| pan-RAS抗体 | Cell Signaling Technology | 67648 | |
| ERK1/2抗体 | Cell Signaling Technology | 4695 | |
| 磷酸化ERK1/2抗体 | Cell Signaling Technology | 4370 | |
| RSK1/2/3抗体 | Cell Signaling Technology | 9355 | |
| 磷酸化RSK抗体 | Cell Signaling Technology | 8753 | |
| HA抗体 | Cell Signaling Technology | 3724 | |
| Vinculin抗体 | Cell Signaling Technology | 13901 | |
| 免疫组织化学 | Ki67抗体 | Abcam | ab16667 |
| 磷酸化ERK1/2抗体 | Cell Signaling Technology | 4376S | |
| TTF1抗体 | Abcam | ab133638 | |
| p40抗体 | Abcam | ab203826 | |
| CC10抗体 | Abcam | ab40873 | |
| SPC抗体 | MilliporeSigma | AB378 | |
| Leica BOND聚合物精制检测系统 | Leica Biosystems | DS9800 | |
| 滨松Nanozoomer全玻片扫描仪 | Hamamatsu | -- | |
| 动物实验 | Cultrex RGF BME基质胶 | R&D Systems | 3536-005-02 |
| 曲美替尼溶解成分 | -- | -- | |
| RMC-4550配方 | -- | -- | |
| RMC-7977配方 | -- | -- | |
| BI-3406配方 | -- | -- | |
| Quantum GX2微型CT扫描仪 | -- | -- | |
| RNA测序 | Trizol试剂 | -- | -- |
| RNeasy小型试剂盒 | Qiagen | -- | |
| Bioanalyzer 2100分析仪 | Agilent | -- | |
| Illumina测序平台 | Illumina | -- | |
| Qubit荧光定量仪 | -- | -- | |
| NanoBiT载体1.1 | Promega | -- | |
| NanoBiT载体2.1 | Promega | -- | |
| 蛋白互作分析 | JetOPTIMUS转染试剂 | Polyplus | -- |
| Nano-Glo活细胞试剂 | Promega | -- | |
| Nano-Glo Endurazine活细胞底物 | Promega | -- | |
| GloMax发光检测仪 | Promega | -- | |
| Tecan Infinite M1000酶标仪 | Tecan | -- |
关键环节
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 细胞培养 | 细胞系（H2110和HEK293T）的培养条件（培养基、血清、抗生素） 阅读提示：Methods: Cell lines, DNA constructs and reagents |
| 药物处理 | 药物浓度和处理时间（例如RMC-4550浓度、RMC-7977浓度） 阅读提示：Methods: Cell clonogenicity and proliferation assays; Figure 3B; Figure 5D |
| 免疫印迹 | 抗体滴度、孵育时间、显色底物 阅读提示：Methods: Immunoblot, RBD pull down, and antibodies |
| 免疫组化 | 抗原修复条件（pH、时间）、抗体稀释度 阅读提示：Methods: Histology and Immunohistochemistry |
| 动物实验 | 异种移植模型建立方式（细胞数量、基质胶比例）、给药方案（剂量、频率、途径） 阅读提示：Methods: In vivo xenograft studies |