生化活性测定
验证RMC-6236对多种RAS变体的抑制活性
测定RMC-6236与CypA的结合亲和力（KD1），以及RMC-6236:CypA复合物与RAS变体的亲和力（KD2）；通过TR-FRET检测RAS-RAF结合抑制。
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RMC-6236在RAS驱动癌症中对RAS-GTP抑制的转化与治疗评估
Translational and Therapeutic Evaluation of RAS-GTP Inhibition by RMC-6236 in RAS-Driven Cancers
实验完整度
高包含体外生化与细胞实验、多种异种移植模型、基因工程小鼠模型、患者样本及临床试验数据，并进行功能验证和机制研究。
主要模型
KRAS突变的癌症细胞系（如HPAC、Capan-2） 小鼠异种移植模型（CDX和PDX） 自发性肺癌基因工程小鼠模型 同系小鼠肿瘤模型（eCT26） 患者（临床试验）
重点核对
RMC-6236的给药剂量和方案（如25 mg/kg每日口服） KRAS突变类型（如KRASG12X）对敏感性的影响 肿瘤基因拷贝数改变（如KRASG12C扩增、CDKN2A缺失） 肿瘤内药物暴露水平与DUSP6抑制的关系 免疫环境（如CD8+ T细胞浸润）对疗效的影响
摘要
RAS驱动的癌症占人类癌症的30%。RMC-6236是一种RAS(ON)多选择性非共价抑制剂，靶向经典RAS亚型的突变型和野生型变体的活性GTP结合状态，具有广泛治疗潜力，可满足上述未满足的医疗需求。RMC-6236在RAS依赖的细胞系中表现出强效抗癌活性，尤其是在KRAS第12密码子突变的细胞系中。值得注意的是，在携带KRASG12X异种移植模型的小鼠临床试验中，口服RMC-6236在体内耐受性良好，并在多种肿瘤类型中驱动了显著的肿瘤消退。转化PK/疗效和PK/PD模型预测，每日100mg和300mg的剂量将分别在RAS驱动肿瘤患者中实现肿瘤控制和客观缓解。与此一致，我们在此描述了两名晚期KRASG12X肺腺癌和胰腺腺癌患者（每日300mg）的客观缓解，证明了RMC-6236在正在进行的I/Ib期临床试验（NCT05379985）中的初步活性。意义：RMC-6236的发现使得首次在RAS驱动癌症中对典型突变型和野生型RAS-GTP进行靶向和同时抑制的治疗评估成为可能。我们证明，广谱RAS-GTP抑制在暴露水平上具有耐受性，可在此类肿瘤的临床前模型和患者中诱导显著的肿瘤消退。
实验结论
提炼研究问题、关键发现与证据，快速把握文章的核心贡献。
- 研究问题
- RMC-6236作为一种RAS(ON)多选择性抑制剂，在RAS驱动癌症中是否具有抗肿瘤活性，并确定其临床有效剂量。
- 核心机制
- RMC-6236通过形成CypA:RMC-6236:RAS三复合物，阻断RAS与效应蛋白的相互作用，抑制RAS信号通路，诱导肿瘤细胞凋亡，并调节肿瘤免疫微环境。
- 主要证据
- 体外实验显示RMC-6236抑制RAS-RAF结合和RAS信号通路；异种移植模型和GEMM模型显示肿瘤消退；临床试验中两名患者获得客观缓解。
- 研究意义
- RMC-6236是首个能够同时靶向突变和野生型RAS-GTP的抑制剂，为RAS驱动癌症提供了新的治疗策略，并支持进一步临床开发。
研究路径
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
细胞活性测定
评估RMC-6236对RAS突变癌细胞增殖和信号通路的影响
在多种癌细胞系中检测pERK抑制、细胞增殖抑制（EC50）和凋亡诱导。
体内异种移植模型药效评估
评估RMC-6236在体内对肿瘤生长的抑制作用
在多种CDX和PDX模型中，口服给药RMC-6236，测量肿瘤体积变化和DUSP6表达。
PK/PD和疗效建模
建立药物暴露、药效和肿瘤生长抑制之间的关系，并预测临床剂量
使用Simeoni肿瘤生长模型和PK/PD模型分析数据，预测人体有效剂量。
临床病例研究
评估RMC-6236在患者中的初步疗效和安全性
在I/Ib期临床试验中，两名KRASG12X患者接受RMC-6236 300mg每日治疗，评估肿瘤反应。
研究方法
按研究目的归类文中使用的方法，便于定位所需技术。
验证样本或模型特征
验证分子表达变化
验证免疫效应
验证机制链路
数据分析与统计
产品清单
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 蛋白质纯化 | Superdex 75 10/300 GL | -- | -- |
| 蛋白质浓缩 | Amicon Ultra-4 30K离心过滤器 | Millipore Sigma | -- |
| 晶体筛选 | MRC 2结晶板 | -- | -- |
| 细胞培养 | 胎牛血清 | -- | -- |
| 青霉素 | -- | -- | |
| 链霉素 | -- | -- | |
| HEPES | -- | -- | |
| 达尔伯克改良伊格尔培养基（DMEM） | -- | -- | |
| RPMI-1640培养基 | -- | -- | |
| 基质胶 | -- | -- | |
| 二甲基亚砜 | -- | -- | |
| 药物处理 | RMC-6236 | Revolution Medicines | -- |
| 阿达格拉西布 | -- | -- | |
| 抗PD-1抗体（克隆RMP1-14） | -- | -- | |
| 分子检测 | AlphaLISA SureFire Ultra pERK1/2 (T202/Y204)检测试剂盒 | PerkinElmer | ALSU-PERK-A50K |
| MSD多阵列检测系统（磷酸化/总ERK1/2全细胞裂解液试剂盒） | Meso Scale Discovery | K15107D | |
| 细胞增殖检测 | CellTiter-Glo 2.0试剂 | Promega | G9243 |
| CellTiter-Glo发光细胞活力检测试剂盒 | Promega | G7572 | |
| 凋亡检测 | CaspaseGlo-3/7检测试剂盒 | Promega | G8092 |
| 蛋白质印迹 | MSD Tris裂解缓冲液 | Meso Scale Discovery | R60TX-2 |
| NP-40细胞裂解液 | Invitrogen | FNN0021 | |
| 蛋白酶抑制剂混合物 | -- | -- | |
| 磷酸酶抑制剂混合物 | -- | -- | |
| BCA蛋白定量试剂盒 | Pierce | 23225 | |
| LDS上样缓冲液 | -- | -- | |
| 抗磷酸化p44/42 MAPK (ERK1/2) (T202/Y204)抗体 | Cell Signaling Technology | 9101 | |
| 抗p44/42 (ERK1/2)抗体 | Cell Signaling Technology | 9107 | |
| 抗pAKT (S473)抗体 | Cell Signaling Technology | 4060 | |
| 抗AKT抗体 | Cell Signaling Technology | 2920 | |
| 抗pS6 (S235/236)抗体 | Cell Signaling Technology | 2211 | |
| 抗S6抗体 | Cell Signaling Technology | 2317 | |
| 抗PARP抗体 | Cell Signaling Technology | 9542 | |
| 抗β-actin抗体 | Cell Signaling Technology | 4967 | |
| 抗vinculin抗体 | Cell Signaling Technology | 13901 | |
| 抗RAS抗体 | Abcam | ab108602 | |
| 抗KRAS抗体 | Sigma-Aldrich | WH0003845M1 | |
| 山羊抗兔IR800偶联二抗 | LI-COR | 926-32211 | |
| 山羊抗小鼠IR680偶联二抗 | LI-COR | 926-68070 | |
| 驴抗兔IR800偶联二抗 | LI-COR | 926-32213 | |
| 驴抗小鼠IR680偶联二抗 | LI-COR | 926-68072 | |
| 山羊抗兔IgG（H+L）HRP偶联二抗 | Thermo Fisher Scientific | 31462 | |
| 山羊抗小鼠IgG（H+L）HRP偶联二抗 | Thermo Fisher Scientific | A16072 | |
| RNA提取 | RNeasy Mini试剂盒 | Qiagen | 74104 |
| 反转录 | High-Capacity cDNA反转录试剂盒 | Applied Biosystems | 4368814 |
| qPCR | TaqMan基因表达预混液 | Applied Biosystems | 4369016 |
| 人DUSP6 TaqMan探针 (Hs00737962_m1) | Thermo Fisher Scientific | -- | |
| 小鼠DUSP6 TaqMan探针 (Mm00518185_m1) | Thermo Fisher Scientific | -- | |
| 人18S TaqMan探针 (Hs99999901_s1) | Thermo Fisher Scientific | -- | |
| 小鼠18S TaqMan探针 (Mm03928990_g1) | Thermo Fisher Scientific | -- | |
| DNA提取 | QIAamp DNA Mini试剂盒 | Qiagen | 51304 |
| 数字PCR | Naica系统用于微滴数字PCR | Stilla | -- |
| KRAS野生型检测试剂盒 (p.G12C) | apexbio | AA100902-WT | |
| KRAS突变型检测试剂盒 (p.G12C) | apexbio | AA100902-MU | |
| ACTB探针 | -- | -- | |
| 药物分析 | ACQUITY UPLC系统 | Waters | -- |
| Shimadzu UPLC系统 | Shimadzu | -- | |
| Sciex 5500三重四极杆质谱仪 | Sciex | -- | |
| Sciex 6500+三重四极杆质谱仪 | Sciex | -- | |
| Halo 90Å AQ-C18色谱柱 (2.1×50 mm) | Advanced Materials Technology | -- | |
| ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱 (2.1×50 mm) | Waters | -- | |
| ACQUITY UPLC BEH C4色谱柱 (2.1×50 mm) | Waters | -- | |
| 维拉帕米 | -- | -- | |
| 塞来昔布 | -- | -- | |
| 格列本脲 | -- | -- | |
| 地塞米松 | -- | -- | |
| 特非那定 | -- | -- | |
| PK分析 | Phoenix WinNonLin（版本8.3） | Certara | -- |
| 免疫组化 | 抗EpCAM兔单克隆抗体 | Cell Signaling Technology | 14452 |
| 抗Ki-67兔单克隆抗体 | Biocare | CRM325 | |
| 抗磷酸化p44/42 MAPK (Erk1/2; Thr202/Tyr204)兔单克隆抗体 | Cell Signaling Technology | 4370 | |
| 抗磷酸化组蛋白H3 (Ser10)兔多克隆抗体 | Cell Signaling Technology | 9701 | |
| 抗磷酸化S6核糖体蛋白 (Ser235/236)兔单克隆抗体 | Cell Signaling Technology | 4858 | |
| Biocare过氧化物酶封闭液 | Biocare | PX968 | |
| 背景清除剂 | Biocare | BP974M | |
| MACH4 HRP聚合物检测系统 | Biocare | MRH534 | |
| Huron TissueScope LE120全玻片扫描仪 | Huron Technologies | -- | |
| 图像分析 | HALO图像分析软件 | Indica Labs | -- |
| 流式细胞术 | 小鼠BD Fc阻断剂（克隆2.4G2） | BD Pharmingen | -- |
| 蓝色死细胞染色试剂盒 | Invitrogen | -- | |
| 抗CD45抗体（克隆30F11） | BD Biosciences | -- | |
| 抗CD19抗体（克隆1D3） | BD Biosciences | -- | |
| 抗CD8b抗体（克隆H35-17.2） | BD Biosciences | -- | |
| 抗Ly-6G抗体（克隆1A8） | BD Biosciences | -- | |
| 抗I-A/I-E抗体（克隆M5/114.15.2） | BD Biosciences | -- | |
| 抗CD3ε抗体（克隆145-2C11） | BioLegend | -- | |
| 抗CD4抗体（克隆GK1.5） | BioLegend | -- | |
| 抗CD11b抗体（克隆M1/70） | BioLegend | -- | |
| 抗F4/80抗体（克隆BM8） | BioLegend | -- | |
| 抗Ly-6C抗体（克隆HK1.4） | BioLegend | -- | |
| Cytek Aurora流式细胞仪 | Cytek Biosciences | -- | |
| SpectroFlo软件 | Cytek Biosciences | -- | |
| FlowJo软件 | FlowJo, LLC | -- | |
| 实验动物管理 | Studylog随机化软件 | -- | -- |
| gentleMACS组织处理器 | Miltenyi Biotec | -- | |
| 其他 | GraphPad Prism 9 | GraphPad Software | -- |
| ComBat算法 | -- | -- | |
| dr4pl R包 | -- | -- |
关键环节
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 生化活性测定 | RMC-6236浓度、CypA浓度、RAS蛋白浓度 阅读提示：Methods: RAS-RAF TR-FRET |
| 细胞实验 | 细胞系、处理时间、RMC-6236浓度范围 阅读提示：Methods: In Vitro Assays |
| 体内药效实验 | 动物品系、细胞接种量、给药剂量和方案 阅读提示：Methods: In Vivo Studies |
| PK/PD研究 | 采样时间点、药物浓度测定方法 阅读提示：Methods: PK/PD Relationship |
| 临床研究 | 患者纳入标准、给药剂量、反应评估标准 阅读提示：Results: Clinical Cases |