LINC02099通过miRNA-214-3p/CTSS轴促进糖尿病小鼠视网膜细胞外基质沉积

目的：视网膜纤维化是增殖性糖尿病视网膜病变（PDR）的标志，可导致视网膜脱离和不可逆的视力丧失。本研究旨在探讨长链非编码RNA（lncRNA）LINC02099在视网膜细胞外基质（ECM）沉积中的作用及调控机制，这是PDR相关视网膜纤维化的关键过程。方法：通过lncRNA微阵列分析鉴定PDR患者玻璃体标本中差异表达的lncRNA。在Müller细胞中建立体外高糖（HG）（25 mM）模型，并通过腹腔注射链脲佐菌素建立体内糖尿病小鼠模型。采用实时定量PCR检测lncRNA、microRNA和靶基因mRNA的表达。利用Western blotting和免疫荧光染色评估ECM沉积。通过荧光原位杂交和双荧光素酶报告基因实验分析涉及LINC02099、miRNA-214-3p及其靶基因的竞争性内源RNA网络。此外，使用暗适应视网膜电图评估处理小鼠的视觉功能。结果：LINC02099是PDR患者玻璃体样本中表达最高的lncRNA。LINC02099过表达加剧了HG诱导的Müller细胞中纤连蛋白、I型胶原和IV型胶原的上调，而LINC02099敲低则产生相反效果。机制上，LINC02099被发现直接与miR-214-3p相互作用。引入miR-214-3p模拟物显著抑制了HG诱导的纤连蛋白、I型胶原和IV型胶原表达。组织蛋白酶S（CTSS）被鉴定为miR-214-3p的直接靶标，其敲低减弱了HG诱导的这些ECM成分的表达。此外，LINC02099敲低通过下调CTSS表达降低HG条件下纤连蛋白、I型胶原和IV型胶原的表达水平，这一过程可被miR-214-3p抑制剂显著逆转。最后，体内实验证实LINC02099过表达通过miR-214-3p/CTSS轴加重糖尿病小鼠视网膜中的ECM沉积。结论：本研究确立了LINC02099/miRNA-214-3p/CTSS轴作为PDR相关视网膜ECM表达的新型调控机制。靶向该通路可能为PDR的管理和改善晚期糖尿病视网膜病变患者的预后提供新的治疗策略。