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技术资料/正文
关于酵母表达纯化的常见问题与解答
661 人阅读发布时间：2023-08-21 20:13
酵母表达系统具有原核和高等真核表达系统的优点，是真核表达蛋白的常用系统之一，其中毕赤酵母表达系统是最常用的、最有效的表达系统之一。在实验过程中，可能会遇到一些常见问题，下面是一些主要问题及其解答：
1、酵母表达诱导条件如何摸索，如何选择？
与大肠杆菌表达实验类似，酵母表达系统中诱导条件对实验结果也非常重要。我们可以根据小量表达检测结果，优化培养基以及诱导条件（设置菌的浓度梯度，诱导剂的浓度梯度，诱导时间梯度来探索最佳表达条件），提高目的蛋白的表达量。
2、如何解决蛋白无法表达或者是表达效果差的问题？
在实际实验中，也有少数的蛋白无法通过酵母表达出来，针对这种情况下，我们会免费提供密码子优化服务来确保基因转录、mRNA翻译以及翻译后修饰的正常进行。
3、蛋白如何长期保存？
表达出来的蛋白立马用于后续实验，如果暂时不用，可以在纯化的蛋白溶液中加入适量的甘油，并将蛋白保存至-80 ℃冰箱里。
4、酵母表达的优势体现在哪？
相对于大肠杆菌表达，酵母表达具有醇氧化酶基因AOX1启动子，非常利于外源基因的表达调控，其次酵母表达具有翻译后的蛋白加工修饰功能例如磷酸化、糖基化等等，高度还原目的蛋白。另外，酵母表达的目的蛋白的可溶性高，外源基因可以单拷贝或者多拷贝的形式在特定的位点整合进酵母染色体上，伴随着染色体的复制而复制，有较高的遗传稳定性。