【笃玛实验科普-260002】ELISA实验三大"刺客"样本篇-溶血

在ELISA实验过程中，最常见的样本非血清莫属，而血清中发生溶血、出现乳糜血、存在异嗜性抗体将会严重影响最终实验结果，接下来我们一起了解一下为什么会出现以上的情况，以及这三大刺客如何影响血清样本的ELISA实验结果。首先，我们先介绍第一大刺客-溶血。

1、首先我们先来了解一下取得全血之后我们该如何分离得到血清和血浆。非抗凝管采集全血后室温放置30min，让血液充分自然凝固；使用促凝管可缩短至15~30min。4℃条件下3000rpm离心10~15min，如图，底部为凝血块，上层澄清淡黄色液体为血清。抗凝管采集血液后立即轻轻颠倒混匀5-8次，使抗凝剂与血液充分混合，防止凝固；4℃条件下3000rpm离心10~15min，如图，底部为红细胞层，中间为白细胞和血小板，上层淡黄色液体为血浆，占比55%。

2、而溶血将会发生在血清分离过程中，在采血过程中由于采血针头、穿刺位置、抽血速度等等出现误差，红细胞破裂而出现溶血现象；而在静置和运输过程，由于冷冻样本、剧烈振荡、放置时间过长或过短造成红细胞破裂而溶血；最后，在离心过程中，转速、离心时间等等也会造成溶血，接下来我们来看详细的溶血发生过程。

3、采血过程。第一个原因-采血针：采血针头过细会产生挤压和剪切力，破坏红细胞；第二个原因，抽血操作：在血肿处采血或反复在血管里探索挤压红细胞造成溶血；抽血速度过快会使红细胞承受的压力增大，摩擦力增大破坏红细胞；最后，血清管和抗凝管要分清：血清管在凝血过程中颠倒混匀，红细胞会被不规则的血块挤破；而使用抗凝管时没有立即颠倒混匀，局部血凝，后续操作红细胞也会被挤破。

4、放置、运输过程。冷冻全血会产生细小冰晶戳破红细胞，而温差过大会使得红细胞热胀冷缩破坏红细胞膜；剧烈振荡会使得红细胞被撞击产生形变损伤，还会产生细小泡沫，小泡沫破裂时也会损伤到红细胞；最后，采血后长时间放置会使得红细胞自然衰竭而破裂，造成溶血。

5、在离心过程中，过高的转速、过长的离心时间都会使得红细胞承受巨大的作用力，压碎红细胞；而离心机未配平，剧烈的震荡也必然会震裂红细胞，造成溶血。

6、了解完了溶血的发生机制，现在我们来了解一下溶血到底时如何影响ELISA的实验结果的。首先，血红蛋白本身就有颜色，且在450nm处也有广泛的吸光度，将会增加背景信号，使得最终结果偏高；而红细胞膜破裂会释放出一些蛋白酶等内源性物质，会干扰待测抗原与捕获抗体的特异性结合，破坏酶标抗体催化底物显色的过程，使得结果偏离实际值。

有关于第一刺客-溶血的内容我们就了解到这里，下一集，我们将会共同了解第二个刺客---乳糜血对ELISA实验的影响，关注上海笃玛生物获取更多实验技巧！