上海富衡 | 如何通过显微镜初步判断细胞状态

对细胞实验新手来说，初步判断细胞状态是避免后续实验翻车的关键第一步。核心判断标准主要围绕细胞形态、生长速度、培养基状态三个维度，核心逻辑是用显微镜观察实际特征，用细胞资料确认是否符合标准。

用显微镜观察 3个核心视觉特征

显微镜是直接观察工具，建议用10倍物镜看整体（密度、污染） ，20-40倍物镜看细节（形态、活死） ，重点关注以下 3 点：

1. 细胞形态

• 贴壁细胞：观察是否铺展均匀、边缘清晰。比如 HeLa 细胞正常是梭形或多角形，若变成皱缩的圆形、边缘模糊，或出现大量细长 “伪足”，可能状态异常。

• 悬浮细胞：观察是否圆润透亮、大小均一。若出现明显聚团（非自然轻微聚集）、细胞变形（如扁扁的、有凹陷），或胞内出现大量黑色颗粒，可能状态不佳。

2. 活死细胞比例

• 简单方法：直接观察“透亮 vs 灰暗”—— 活细胞胞质透亮，光线能穿透；死细胞胞质灰暗、反光弱，甚至会漂浮在培养基表面（贴壁细胞）。

• 精准方法：用台盼蓝染色（显微镜下操作），活细胞不染色，死细胞被染成蓝色，正常状态下死细胞比例应＜5%。

3. 培养基与背景

• 看培养基：正常含酚红的培养基是浅红色，若突然变黄（pH过低，代谢过快或污染）、变紫（pH过高，瓶盖过紧），或出现浑浊（细菌污染）、白色/绿色菌丝（真菌污染），直接判断异常。

• 看背景：显微镜下若有大量快速移动的小点（细菌）、或丝状/颗粒状异物（杂质或污染），即使细胞形态看似正常，也需警惕。

用细胞资料对照确认是否正常”

细胞资料是“标准参照物”，常见来源包括细胞系说明书（购买时附带）、细胞出库图、ATCC等数据库（官网可查）、文献中该细胞的培养描述，重点对照 3 类信息：

1. 对照形态标准

• 查资料：找到该细胞的标准形态图或描述，比如“CHO 细胞贴壁培养时呈上皮样，梭形为主”。

• 做对比：若显微镜下观察到的细胞形态与资料描述差异大（如CHO细胞全变成圆形贴壁），即使没有明显“坏相”，也可能是细胞分化或变异，状态不合格。

2. 对照生长特性

• 查资料：确认该细胞的常规倍增时间（如HepG2细胞约48小时）、最佳密度范围（如贴壁细胞汇合度70%-80%时状态最好）。

• 做对比：若实际培养中，细胞2天就长满（远超倍增时间，可能污染或传代密度过高），或5天还没到50%汇合度（生长停滞，可能营养不足或细胞老化），均为状态异常。

3. 对照培养条件

• 查资料：确认该细胞的必需条件，比如“是否需要 CO?（多数贴壁细胞需5%CO?）、最佳温度（37℃）、专用培养基（如HeLa用 DMEM，淋巴瘤细胞用RPMI-1640）”。

• 做对比：若显微镜观察到细胞状态差，先核对培养条件是否与资料一致（比如误将需CO?的细胞放在普通培养箱），避免因环境错误误判细胞本身。

关键流程：显微镜+资料的验证

1. 先查资料：提前 10 分钟调出该细胞的资料，记住核心标准（形态、倍增时间、培养基）。

2. 再用显微镜观察：按“形态→活死→培养基”的顺序观察，每一步都对照资料确认。

3. 排除干扰：若观察到疑似异常（如细胞略皱缩），先查资料确认“传代后是否有暂时收缩期”（多数贴壁细胞传代后 4-6 小时才铺展），避免误判。