上海富衡 | 内皮专用培养基：血管内皮细胞研究的得力助手

一、内皮专用培养基的组成与功能

1. 基础培养基框架：内皮专用培养基常以 M199、DMEM 或 F - 12 等作为基础培养基。M199 含有丰富的营养成分，包括多种氨基酸、维生素和无机盐，能为内皮细胞提供广泛的物质基础，满足其多样的代谢需求。DMEM 则具有较高的葡萄糖含量，为内皮细胞旺盛的能量代谢提供充足 “燃料”。F - 12 培养基富含微量元素，有助于维持内皮细胞内复杂的生理生化反应平衡。这些基础培养基构成了内皮细胞生长的基本框架。
2. 生长因子与细胞因子：为模拟体内微环境对内皮细胞生长的调控，内皮专用培养基中添加了特定的生长因子与细胞因子。血管内皮生长因子（VEGF）是其中关键的一员，它能够促进内皮细胞的增殖、迁移，诱导血管生成，对维持内皮细胞的血管生成能力至关重要。成纤维细胞生长因子（FGF）同样不可或缺，它可刺激内皮细胞的分裂与存活，增强细胞的活力。此外，表皮生长因子（EGF）也能参与调节内皮细胞的生长与分化过程，共同助力内皮细胞保持良好的生长态势。
3. 血清与替代物：传统的内皮专用培养基常添加一定比例（如 5% - 20%）的胎牛血清（FBS）。FBS 富含多种营养成分和生长调节因子，能有效促进内皮细胞的生长。然而，血清成分复杂且批次间存在差异，可能影响实验结果的稳定性。因此，近年来无血清或低血清的内皮专用培养基逐渐兴起，它们使用化学定义明确的替代物取代部分或全部血清。这些替代物不仅能提供细胞生长所需的营养，还能减少批次差异带来的影响，使实验结果更具重复性和可靠性。
4. 其他补充成分：为维持内皮细胞的正常生理功能，培养基中还添加了一些其他成分。例如，肝素可抑制平滑肌细胞的生长，选择性促进内皮细胞生长，同时它还能与 VEGF 等生长因子结合，增强其生物学活性。谷氨酰胺作为细胞代谢的重要氮源，参与多种代谢途径，为内皮细胞的生长和修复提供必要的物质基础。此外，抗氧化剂如维生素 C、维生素 E 等可清除细胞代谢过程中产生的自由基，保护内皮细胞免受氧化损伤。

二、使用内皮专用培养基的注意事项

1. 储存与稳定性：内皮专用培养基应严格按照产品说明储存，一般需置于 2 - 8℃环境中，避免冷冻。冷冻会导致培养基中的蛋白质变性、生长因子失活以及其他成分的物理化学性质改变，严重影响培养基的性能。同时，要注意培养基的保质期，在有效期内使用。开启后的培养基应尽快用完，若需保存，应密封并在短时间内使用，防止微生物污染和成分降解。
2. 培养条件适配：使用内皮专用培养基培养内皮细胞时，需精准控制培养环境。温度应恒定在 37℃，模拟人体体温，这是内皮细胞生长的最适温度，有利于细胞内各种酶促反应的正常进行。气体环境方面，5% CO₂与 95% 空气的混合比例至关重要，CO₂用于维持培养基的 pH 值在 7.2 - 7.4 之间，适宜的 pH 环境对内皮细胞的生长和代谢活动起着关键作用。此外，培养箱内的湿度应保持在较高水平，以防止培养基蒸发导致成分浓缩，影响细胞生长环境的稳定性。
3. 细胞接种与观察：在接种内皮细胞时，要确定合适的接种密度。密度过低，细胞间相互作用不足，可能导致细胞生长缓慢甚至凋亡；密度过高，则会使营养竞争加剧，代谢废物积累过快，影响细胞的正常生长。一般每平方厘米接种 5000 - 10000 个内皮细胞较为适宜，但具体密度需根据细胞来源和实验目的进行调整。接种后，需定期使用倒置显微镜观察细胞的生长状态，包括细胞的形态、贴壁情况、增殖速度等。正常的内皮细胞呈典型的铺路石样形态，紧密贴壁生长。若发现细胞形态异常、贴壁不牢或生长速度明显改变，应及时检查培养基的质量、培养条件以及是否存在污染等问题。