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上海富衡生物科技有限公司
入驻年限：5 年
- 联系人：
刘胜富
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上海 闵行区
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抗体、ELISA 试剂盒、细胞库 / 细胞培养、论文服务、试剂、实验室仪器 / 设备、技术服务、耗材
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技术资料/正文
血管“石化”之谜：谁在操控平滑肌细胞的“叛变”？从机制揭秘到实验指南，全面解析钙化诱导技术 | 上海富衡
248 人阅读发布时间：2025-03-30 12:30
血管钙化：沉默的“血管石化”危机
血管钙化是动脉粥样硬化、慢性肾病和糖尿病等疾病的核心病理特征，其本质是血管平滑肌细胞（VSMCs）的成骨样转分化——原本负责血管收缩的VSMCs“叛变”为骨样细胞，分泌钙盐形成钙化斑块，导致血管僵硬、心血管事件风险激增。
核心病理机制：
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高磷驱动：高磷环境通过激活氧化应激和铁死亡（SLC7A11/GPX4轴抑制），促进钙盐沉积。
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信号通路失控：CXCL5-TGF-β受体1、TLR4-NF-κB、NR4A3-糖酵解等通路推动成骨转化。
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表观遗传调控：乳酸诱导的组蛋白H3K18乳酰化直接激活成骨基因（如Phospho1）。
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性别差异：雌激素通过PI3K/Akt通路抑制Runx2，保护绝经前女性血管健康。
实验室攻坚：如何让VSMCs“叛变”？
细胞模型：
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细胞选择：大鼠主动脉VSMCs（如A7R5细胞系）或原代细胞，传代≤5代以维持分化能力。
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诱导试剂组合：β-甘油磷酸盐（β-Gly）+氯化钙（CaCl₂）模拟高磷血症。
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诱导时间：1-3周（钙结节肉眼可见）。
动物模型：
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慢性肾病模型：5/6肾切除联合高磷饲料（CKD模型）。
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急性模型：维生素D3（50万单位/kg，皮下注射3天）或华法林诱导（150 mg/kg，皮下注射3周）。
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基因编辑：CRISPR/Cas9敲除Arntl基因可加剧钙化，而过表达则抑制成骨转分化。
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代谢干预：铁死亡抑制剂（Ferrostatin-1）或乳酸脱氢酶抑制剂（FX-11）可逆转钙化。
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动态监测：活细胞成像追踪钙结节形成，单细胞测序解析异质性。
关键实验操作与避坑指南
核心步骤
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细胞接种：密度1×10^5 cells/孔，预铺促贴壁试剂（如明胶等）防止细胞脱落。
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培养基配制：基础培养基+钙化因子（上海富衡，WWL-Y030），严格无菌操作。
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换液策略：每2天全量换液，换液时动作轻柔避免机械损伤已形成的钙结节。
常见失败原因
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细胞状态差：高代次细胞成骨能力下降，需定期检测α-SMA表达。
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诱导剂毒性：β-GP浓度＞10 mmol/L或CaCl₂＞6 mmol/L导致细胞死亡。
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批次差异：不同批次试剂或培养基成分影响钙化均一性。
结果验证：如何捕捉“叛变”证据？
定性检测：
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茜素红染色：钙结节呈橘红色，适用于细胞模型。
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Von Kossa染色：磷酸盐沉积显黑色，用于动物组织切片。
定量分析：
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钙含量测定：邻-甲酚酞络合法检测总钙浓度。
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成骨标志物：Western blot检测Runx2、ALP、骨钙素表达。
高通量技术：
单细胞测序：解析钙化过程中VSMCs的转录组异质性。
结语
血管钙化是VSMCs“叛变”引发的多维度病理事件，从代谢重编程到表观遗传修饰，每一环节都藏着治疗突破口。无论是基础研究还是药物开发，深入解析这些机制将为心血管疾病治疗开启新纪元。
参考文献与产品推荐：
血管钙化诱导试剂盒：大鼠血管平滑肌细胞钙化诱导分化与检测试剂盒（富衡，WWL-Y030）；人血管平滑肌细胞钙化诱导分化与检测试剂盒（富衡，WWL-Y032）；小鼠血管平滑肌细胞钙化诱导分化与检测试剂盒，WWL-Y031）。
【1】Hao-Yue Tang,Ai-Qun Chen,Huan Zhang, et al.
Vascular Smooth Muscle Cells Phenotypic Switching in Cardiovascular Diseases. Cells. 2022;11
(24):4060-4060. doi:10.3390/cells11244060
【2】Karen Muyor,Jonas Laget,Irene Cortijo,et al.
Vascular calcification in different arterial beds in ex vivo ring culture and in vivo rat model. Scientific Reports. 2022;12
(1):0-0. doi:10.1038/s41598-022-15739-w
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